1、基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序1.目的基因的获取2.基因表达载体的构建3.将目的基因导入受体细胞4.目的基因的检测与鉴定 目前被较广泛提取使用的目的基因有：苏云金杆菌抗虫基因、人胰岛素基因、人干扰素基因、种子贮藏蛋白基因、植物抗病基因等。基因操作的基本步骤 一、提取目的基因 将需要的基因从供体生物 的细胞内提取出来。供体生物细胞 取出DNA 用限制酶剪去多余部分 目的基因 限制酶 获得目的基因的方法1.从基因文库中获取目的基因什么是基因文库？什么是部分基因文库？怎样从基因文库中得到我们所需的目的基因？目的基因的有关信息与什么相联系？2.人工合成基因法PCR扩增技术 获得目的基因的
2、方法PCR (polymerase chain reaction)聚合酶链式反应是一项再生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。通过此技术，可获取大量的目的基因。PCR技术 原理：前提：过程：PCR扩增仪DNA双链复制的基本原理一段已知目的基因的核苷酸序列1.目的基因DNA受热变性，解链；2.引物与单链互补结合；3.合成链在DNA聚合酶作用下进行延伸。二、基因表达载体的构建基因工程的核心 基因操作的基本步骤 目的：所需物质：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。它们各自的作用是什么?用与提取目的基因相同的限制酶切割质粒使之出现一个切口，将目的
3、基因插入切口处，让目的基因的黏性末端与切口上的黏性末端互补配对后，在连接酶的作用下连接形成重组DNA分子。三、将目的基因导入受体细胞转化 基因操作的基本步骤基因工程中常用的受体细胞有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。用人工的方法使体外重组的DNA分子转移到受体细胞，主要是借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。目的基因导入受体细胞后，就可以随着受体细胞的繁殖而复制，由于细菌繁殖的速度非常快，在很短的时间内就能够获得大量的目的基因。将目的基因导入受体细胞并使之扩增 导入 扩增 将目的基因导入各类细胞的方法 将目的基因导入植物细胞 将目的基因导入动物细胞 将目的基因导入微生物细胞农杆菌转
4、化法、基因枪法、花粉管通道法显微注射技术感受态细胞吸收DNA分子农杆菌转化法 你能说说农杆菌转化法的大概过程吗？根据农杆菌可将目的基因导入双子叶植物的机理，你能分析出农杆菌不能将目的基因导入单子叶植物的原因吗？如果想将一个抗病基因导入单子叶植物，理论上你认为该怎么做？显微注射技术导入贮藏蛋白基因的超级羊和超级小鼠 将目的基因导入微生物细胞利用大肠杆菌可以生产出人的胰岛素。若要生产人的糖蛋白，可以用大肠杆菌吗？四、目的基因的检测与鉴定检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因检测目的基因是否转录出mRNA检测目的基因是否翻译成蛋白质 基因操作的基本步骤分子杂交技术1）以下说法正确的是（）A、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列B、质粒是基因工程中唯一的运载体C、运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接D、基因控制的性状都能在后代表现出来C练习 2)有关基因工程的叙述中，错误的是（）A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来B、限制性内切酶用于目的基因的获得C、目的基因须由运载体导入受体细胞D、人工合成目的基因不用限制性内切酶A练习 作业1.课本15页“思考与探究”第4题2.11页“寻根问底”
