1、学业分层测评(十三) (建议用时：45分钟) 学业达标1PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生。下列防止污染的方法中不正确的是()A将样品的处理、配制PCR反应液、PCR循环扩增及PCR产物的鉴定等步骤分区或分室进行B吸样枪吸样要慢，吸样时尽量一次性完成，枪头小套、小离心管应一次性使用，以免交叉污染C所有PCR试剂都应放置于大瓶分装，以减少重复加样次数，避免污染机会DPCR试剂、PCR反应液应与样品及PCR产物分开保存，不应放于同一冰盒或同一冰箱【解析】所有的PCR试剂都应放置于小瓶分装，一次性用完，避免因多次使用造成
2、污染。【答案】C2DNA的复制需要引物，主要原因是()A可加快DNA的复制速度B引物可与DNA母链通过碱基互补配对结合C引物的5端有助于DNA聚合酶的延伸DNA链DDNA聚合酶只能从3端延伸DNA链【解析】DNA聚合酶不能从5端开始合成DNA，而只能从3端延伸DNA链，因此，DNA复制需要引物。当引物与DNA母链通过碱基互补配对结合后，DNA聚合酶就能从引物的3端开始延伸DNA链，DNA的合成方向总是从子链的5端向3端延伸。【答案】D3下列属于PCR技术的条件的是()单链的脱氧核苷酸序列引物目的基因所在的DNA片段脱氧核苷酸核糖核苷酸DNA连接酶耐热的DNA聚合酶DNA限制性核酸内切酶ABC
3、D【解析】PCR技术的条件：模板，本题为第项；引物，本题为第项；原料，本题为第项；酶，本题为第项。【答案】B4下列有关PCR技术的叙述，不正确的是()APCR技术利用的是碱基互补配对原则BPCR技术可用于基因诊断、判断亲缘关系等CPCR技术需在体内进行DPCR技术可能为变性、复性、延伸三个阶段【解析】PCR技术是聚合酶链式反应的简称，是在体外快速大量复制DNA片段的一种新技术。【答案】C5下图是PCR反应过程中哪次循环的产物()【导学号：05520039】A第一次循环 B第二次循环C第三次循环 D第四次循环【解析】在PCR反应中，以引物为标记，第一次循环时加入的DNA为模板，两条DNA链可分别
4、由引物和引物与其结合并在DNA聚合酶的作用下延伸，所以形成的每个子DNA中只有一种引物；从第二次循环开始，上次产生的含引物的DNA分子单链又可作为模板，形成的DNA分子两端均含引物。【答案】A6下列有关PCR技术的说法中，不正确的是()APCR技术是在细胞内完成的BPCR技术是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术CPCR技术的原理与DNA复制的原理相同DPCR技术的前提是有一段已知的目的基因的核苷酸序列【解析】PCR技术是在生物体外进行DNA复制的技术，其原理与DNA复制的原理相同，但前提是必须要有一段已知的目的基因的核苷酸序列和根据核苷酸序列合成的引物。【答案】A7PCR实验中使用的微
5、量离心管、缓冲溶液以及蒸馏水使用前必须进行的关键步骤是()A反复洗涤 B用酒精擦洗C高压灭菌 D在20 储存【解析】为了避免外源DNA等因素的污染，PCR实验中使用的微量离心管、缓冲溶液以及蒸馏水等在使用前必须进行高压灭菌。PCR所用的缓冲溶液和酶应分装成小份，并在20 储存。使用前，将所需的试剂从冰箱内拿出，放在冰块上缓慢融化。故选C。【答案】C8PCR操作过程中，对于温度的控制，应当控制在()A37 B室温C80 D先为95 ，然后降至55 ，最后调至72 【解析】利用PCR技术体外扩增DNA时，不需要解旋酶，而是通过加热破坏双螺旋结构。然后再降温至55 左右，两种引物通过碱基互补配对与两
6、条单链DNA结合。【答案】D9右图表示DNA变性和复性示意图，相关说法正确的是()A向右的过程为加热(5060 )变性的过程B向左的过程是DNA双链迅速致冷复性C变性与在生物体内解旋过程的实质相同D图中DNA片段共有8个游离的磷酸基、8个3端【解析】DNA体外的变性同体内的解旋实质是相同的，都是使氢键断裂，DNA双螺旋打开，只是体内需解旋酶，体外是高温条件。【答案】C10在进行DNA亲子鉴定时，需大量的DNA。PCR技术(多聚酶链式反应)可以使样品DNA扩增，获得大量DNA克隆分子。该技术的原理是利用DNA的半保留复制，在试管中进行DNA的人工复制(如下图，图中黑色长方形是引物)。(1)图中的
7、变性、延伸分别是指_、_。(2)假设PCR反应中的DNA模板为P，第一轮循环的产物2个子代DNA为N1，第二轮的产物4个子代DNA为N2，N1、N2中分别含有模板DNA单链的DNA分别有_个、_个。若继续循环，该DNA片段共经过30次循环后能形成_个DNA片段。(3)某样品DNA分子中共含3 000个碱基对，碱基数量满足：，若经5次循环，至少需要向试管中加入_个腺嘌呤脱氧核苷酸。(不考虑引物所对应的片段)(4)若下图为第一轮循环产生的产物，请绘出以a链和b链为模板经PCR扩增的产物。【解析】(1)变性的实质是DNA双链解旋；延伸的实质是以DNA单链为模板，按照碱基互补配对原则合成子链的过程。(
8、2)由于PCR原理为DNA双链复制，其特点是半保留复制，所以无论复制几次，模板链一直存在于2个DNA分子中。DNA复制的数量变化是指数式增长方式。(3)由(AT)/(GC)1/2可知ATGC1122，所以A的比例为1/6，在一个DNA分子中的数量为3 0002(1/6)1 000个，5次循环的DNA数为32个，所以以原料合成的DNA数相当于32131个，至少需腺嘌呤脱氧核苷酸为311 00031 000个。(4)画图的关键是注意引物A、B的位置和所对应的模板链。【答案】(1)模板DNA双链解聚形成单链在DNA聚合酶的作用下，原料脱氧核苷酸聚合形成新的DNA链(2)22230(3)31 000(
9、4)如图能力提升11下列有关PCR技术中引物的叙述，正确的是() 【导学号：05520040】A引物是一小段DNA分子或双链RNA分子B扩增一个DNA分子至少需要的引物数目等于新合成的DNA子链数目C两种引物之间能够发生碱基互补配对DDNA聚合酶只能从引物的5端连接脱氧核苷酸【解析】引物是一小段单链DNA分子或单链RNA分子；在DNA分子扩增时，需要两种引物，由于新合成的子链都需要引物作为复制的起点，则扩增一个DNA分子至少需要的引物数目等于新合成的DNA子链数目；两种引物分别与DNA母链之间发生碱基互补配对，并不是两种引物之间发生碱基互补配对；DNA聚合酶只能从引物的3端连接脱氧核苷酸，从而
10、使子链DNA分子的复制方向只能是5端3端。【答案】B12“X基因”是DNA分子上一个有遗传效应的片段，若要用PCR技术特异性地拷贝“X基因”，需在PCR反应中加入两种引物，两种引物及其与模板链的结合位置如图1所示。经4轮循环后产物中有五种不同的DNA分子，如图2所示，其中第种DNA分子有几个()A2B4C6D8【解析】PCR技术扩增时，由两种引物决定所扩增的片段的特定序列，上一次循环的产物为下一次循环的模板。第一次循环形成和，第二次循环形成、四个DNA，以此类推4次循环后共形成16个DNA，其中、各一个，、各三个，共8个。【答案】D13多聚酶链式反应(PCR技术)是体外酶促合成特异性DNA片段
11、的一种方法，由高温变性、低温复性及适温延伸等几步反应组成一个周期，循环进行，使目的DNA得以迅速扩增，其简要过程如图所示。下列关于PCR技术叙述不正确的是 ()APCR技术是在实验室中以少量DNA制备大量DNA的技术B反应中新合成的DNA可以作为下一轮反应的模板CPCR技术中以核糖核苷酸为原料，以指数方式扩增D应用PCR技术与DNA分子杂交技术可以检测基因突变【解析】PCR技术就是体外大量扩增DNA的技术，即以少量DNA制备大量DNA的技术，A正确；PCR技术的原理就是DNA复制，反应中新合成的DNA又可以作为下一轮反应的模板，所需原料是脱氧核苷酸，以指数方式扩增，B正确，C错误；应用PCR技
12、术与DNA分子杂交技术可以检测基因突变，D正确。【答案】C14请回答PCR技术方面的有关问题：(1)利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似(如图所示)。图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物A的DNA片段所占的比例为_。在第_轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段。(2)设计引物是PCR技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物(只标注了部分碱基序列)都不合理(如图)，请分别说明理由。第1组：_；第2组：_。(3)PCR反应体系中含有热稳定DNA聚合酶，下面的表达式不能正确反映DNA聚合酶的功能，这是因为_。【解析】
13、(1)从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物A的DNA片段所占的比例为15/16。在第三轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段。(2)某同学设计的两组引物(只标注了部分碱基序列)都不合理，原因引物和引物局部发生碱基互补配对而失效。引物自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效。(3)DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸连续结合到双链DNA片段的引物链上。【答案】(1)15/16三(2)引物和引物局部发生碱基互补配对而失效引物自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效(3)DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸连续结合到双链DNA片段的引物链上15PCR技术是一种体外迅速扩增DNA片段的技术，操作步
14、骤简介如下：第步：准备“汤”和模板DNAA配制多聚酶链式反应“汤”配方：蒸馏水100 SPU缓冲液 15 SPU氯化镁溶液 8 SPU引物 3 SPU引物 3 SPUDNA聚合酶 1 SPU矿物油 1 SPUdNTP每一种各加 4 SPU注：SPU是一种溶液的计量单位；矿物油可防止聚合酶在冻结时受伤害，以保证酶的活性；dNTP有四种：dATP、dGTP、dCTP、dTTP。B准备要拷贝的DNA如要拷贝自己的DNA，可以用一牙签轻刮口腔内壁，将牙签放入蒸馏水中摇动。加热使蒸馏水沸腾，使细胞破碎释放出DNA。用离心机离心后，去除蒸馏水中较大的细胞碎片。这时上清液中就有了较纯的DNA。第步：多聚酶链
15、式反应将DNA(B)放入汤(A)中。水浴加热。首先，95 ，使DNA双螺旋打开，历时1 min；然后，55 ，使引物结合到DNA上，历时30 s；最后，72 ，与DNA聚合酶结合使DNA复制，历时1 min。重复步骤。每重复一次，即完成一次拷贝。根据上述操作过程回答下列问题：(1)以上材料可以说明()ADNA的复制必须在活细胞中才能完成BDNA能指导蛋白质的合成C在合适的条件下，非细胞环境也能进行DNA的复制DPCR技术是一种无性生殖技术(2)若用人体细胞内的遗传物质做PCR扩增，则扩增后的几百亿个DNA分子起码可分为46种。要将其分开，可用电泳、染色等技术，常用的试剂有溴化乙锭等。有些试剂毒
16、性较强，因此应戴上化学实验专用手套作为保护措施，以避免其与皮肤接触。溴化乙锭是一种强烈的诱变物，若接触皮肤活细胞，很可能会引起()A基因重组B该个体会产生变异较大的后代C癌变D皮肤外层是死细胞，该物质接触皮肤后对人体不会有影响(3)PCR技术中用到的DNA聚合酶，取自生长在热泉中的一种细菌。就PCR技术来讲，你认为使用这种细菌中提取的酶较普通的动植物体内提取的DNA聚合酶的优势是_。(4)PCR技术能将某一DNA分子扩增成许多相同的DNA片段，原因是：DNA分子具有_结构；DNA复制时遵循_原则。(5)DNA分子进行扩增时，除了所要扩增的DNA片段外，还需要四种_、_和_等条件。若已知DNA的
17、一条单链的碱基组成为ATCCGAT，则与它互补的另一条单链的碱基组成为_。【解析】(1)在合适的条件下，细胞外也可完成DNA复制。(2)溴化乙锭是一种化学诱变物，在DNA的复制过程中，诱发基因突变，可能导致细胞发生癌变。(3)PCR技术要在较高的温度下进行，所以使用的DNA聚合酶要耐高温，在较高的温度下不变性。(4)DNA规则的双螺旋结构和碱基互补配对原则使DNA能够复制出与其完全相同的子代DNA。(5)DNA分子复制时，不仅需要DNA片段，还需要四种游离的脱氧核苷酸、能量、酶等条件。由碱基互补配对原则可知，其互补链的碱基组成为TAGGCTA。【答案】(1)C(2)C(3)耐高温，在较高的温度下不变性(4)规则的双螺旋碱基互补配对(5)脱氧核苷酸能量酶TAGGCTA
