1、温馨提示： 此套题为Word版，请按住Ctrl,滑动鼠标滚轴，调节合适的观看比例，答案解析附后。关闭Word文档返回原板块。课时提升训练 八动物细胞融合与单克隆抗体(20分钟50分)1.(16分)下图为细胞融合的简略过程,请据图回答下列问题:(1)若A、B是植物细胞,在细胞融合之前已用_处理,除去了_;由A、B到细胞C的过程中,常用的物理方法是_。融合完成的标志是_。(2)若A、B是植物细胞,则形成的D细胞还要应用_技术把D培养成植株。(3)若A、B是动物细胞,一般取自_,然后用_使其分散开来;由A、B到C的过程中,常用的不同于植物细胞融合的手段是_,所形成的D称为_,A、B融合为C的过程说明
2、了细胞膜具有_。(4)若该过程是制备单克隆抗体,A为小鼠浆细胞,那么,在获得此细胞之前,小鼠已经被注射了_。注射后小鼠身体发生了相应的免疫反应,生成了_,图中B为_。(5)若该过程是制备单克隆抗体,在A、B到C的过程中,所形成的C有_种(只考虑两两融合),用来培养的D细胞应该是_。从中选择出它的方法是_培养,获得D后,常用的培养方法是培养液中培养和_。【解析】(1)若A、B是植物细胞,在细胞融合之前已用纤维素酶和果胶酶处理,除去了细胞壁;由A、B到细胞C的过程中,常用的物理方法是电激、离心、振动。融合完成的标志是产生新的细胞壁。(2)若A、B是植物细胞,则还要应用植物组织培养技术把形成的D细胞
3、培养成植株。(3)若A、B是动物细胞,一般取自动物胚胎或出生不久的幼龄动物的组织或器官,然后用胰蛋白酶使其分散开来;由A、B到C的过程中,常用的不同于植物细胞融合的手段是用灭活的病毒促融,所形成的D称为杂交细胞,A、B融合为C的过程说明了细胞膜具有一定的流动性。(4)若该过程是制备单克隆抗体,A为小鼠浆细胞,那么,在获得此细胞之前,小鼠已经被注射了抗原。注射后小鼠身体发生了相应的免疫反应,生成了浆细胞、记忆细胞、抗体,图中B为骨髓瘤细胞。(5)若该过程是制备单克隆抗体,在A、B到C的过程中,所形成的C有3种(只考虑两两融合),用来培养的D细胞应该是杂交瘤细胞。从中选择出它的方法是用特定选择培养
4、基培养,获得D后,常用的培养方法是培养液中培养和小鼠腹腔内培养。答案:(1)纤维素酶和果胶酶细胞壁电激、离心、振动产生新的细胞壁(2)植物组织培养(3)动物胚胎或出生不久的幼龄动物的组织或器官胰蛋白酶用灭活的病毒促融杂交细胞一定的流动性(4)抗原浆细胞、记忆细胞、抗体骨髓瘤细胞(5)3杂交瘤细胞用特定选择培养基小鼠腹腔内培养2.(20分)(2018北京高二检测)人肌红蛋白(Myo)是早期诊断急性心肌梗塞的生化标志物之一。为制备抗Myo的单克隆抗体,科研人员进行研究。(1)科研人员以Myo作为抗原免疫小鼠,取小鼠的脾脏细胞与_细胞诱导融合。用_培养基筛选融合细胞,得到杂交瘤细胞。(2)将得到的杂
5、交瘤细胞接种到多孔培养板上,进行抗体阳性检测,之后稀释、培养、再进行抗体阳性检测,多次重复上述操作,多次重复该过程的目的是筛选获得抗Myo抗体_的杂交瘤细胞。(3)双抗体夹心法是医学上常用的定量检测抗原的方法,具体原理如图所示:固相抗体和酶标抗体均能与抗原结合,这是由于不同抗体与同一抗原表面的_结合。该检测方法中,酶标抗体的作用是_。(4)研究人员获得三种抗Myo单克隆抗体,分别记为A、B、C。为检测它们之中哪两种适合用于双抗体夹心法,科研人员需要进行_组实验,检测并比较各组实验的_。【解析】(1)根据题意分析,准备单克隆抗体时应该取小鼠的脾脏细胞与骨髓瘤细胞诱导融合,再用选择培养基筛选融合细
6、胞,得到杂交瘤细胞。(2)经过多次重复筛选获得的是抗Myo抗体产量大、纯度高的杂交瘤细胞。(3)据图分析,固相抗体和酶标抗体均能与抗原结合,这是由于不同抗体与同一抗原表面的不同部位结合。该检测方法中,酶标抗体的作用是与待测抗原结合;酶催化检测底物反应,可通过测定酶反应产物量来判断待测抗原量。(4)根据题意,为检测A、B、C中哪两种适合用于双抗体夹心法,科研人员需要进行6组实验,检测并比较各组实验的产物量。答案:(1)骨髓瘤选择(2)产量大、纯度高(3)不同部位(表位)与待测抗原结合;酶催化检测底物反应,可通过测定酶反应产物量来判断待测抗原量(4)6产物量【补偿训练】已知某传染性疾病的病原体为R
7、NA病毒,该病毒表面的A蛋白为主要抗原,该疫苗生产和抗体制备的部分流程如下图。请据图回答:(1)代表的是_过程。为获得A基因表达载体,需用同种_对A基因和运载体进行酶切。除质粒外,_也可作为运载体。将A基因表达载体导入动物细胞的常用方法是_。(2)为获得A基因,还可根据A蛋白的_序列,推测出A蛋白的基因序列,据此可利用化学方法合成A基因。(3)过程采用的技术是_,获得的X叫_细胞。(4)对健康人进行该传染病免疫预防时,可选用图中基因工程生产的_所制备的疫苗。对该传染病疑似患者确诊时,可从疑似患者体内分离病毒,与已知病毒进行_比较;或用图中的_进行特异性结合检测。【解析】(1)从图中分析可知,A
8、基因是从病毒提取的RNA经逆(反)转录产生DNA后获得的,所以过程代表的是逆(反)转录过程。构建基因表达载体时,首先要将目的基因从DNA上剪切下来,所以要用到限制性核酸内切酶(限制性内切酶、限制酶),然后用DNA 连接酶将目的基因与外源DNA连接起来。除质粒外,噬菌体(或动植物病毒)也可作为运载体。将A基因表达载体导入动物细胞的常用方法是显微注射法。(2)为获得A基因,还可根据A蛋白的氨基酸序列,推测出A蛋白的基因序列,据此可利用化学方法合成A基因。(3)图中将已免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞通过动物细胞融合,然后经过两次筛选获得能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。(4)通过注射疫苗,能进行传染病免疫
9、预防,所以将用A蛋白制备的疫苗注射到健康人体内,可以进行该传染病的免疫预防。对该传染病疑似患者确诊时,可从疑似患者体内分离病毒,与已知病毒进行核酸(基因)序列对比,也可用抗A蛋白的单克隆抗体进行特异性结合来检测。答案:(1)逆(反)转录限制性核酸内切酶(限制性内切酶、限制酶)噬菌体(或“动植物病毒”)显微注射法(2)氨基酸(3)动物细胞融合杂交瘤(4)A蛋白核酸(基因)序列抗A蛋白的单克隆抗体3.(14分)阅读抗A、抗B血型定型试剂(单克隆抗体)说明书的部分内容,请据此回答下列问题。抗A、抗B血型定型试剂(单克隆抗体)说明书【组成与性状】本品系用产生抗A、抗B抗体的杂交瘤细胞培育的上清液配制而
10、成,专供鉴定人血型用。【使用方法】将本品与受检红细胞盐水混合,按照有无凝集判定。抗A试剂能和A型血、AB型血凝集,抗B试剂能和B型血、AB型血凝集(略)【注意事项】略【保存及年限】有效期一年,保存于28 。(1)该定型试剂(单克隆抗体)是通过_技术制备的。制备过程中,首先要利用A型血的红细胞或者B型血的红细胞作为_反复注射给实验动物,一段时间后从实验动物体内提取出_细胞,并诱导其与骨髓瘤细胞融合,通常采用的生物诱导剂是_。之后还需要通过多次_、_和培养,才能获得能生产单克隆抗体的杂交瘤细胞。(2)传统工艺中抗A血型定型试剂是从B型血的血清中提取的,与传统工艺生产的抗A血型定型试剂相比,本试剂的
11、突出优点是_、_。(3)该试剂的保存温度条件苛刻,主要是避免_。【解析】(1)抗A和抗B血型定型试剂是单克隆抗体,制备单克隆抗体是动物细胞融合技术的应用之一。在制备过程中需要将抗原(A型血的红细胞或者B型血的红细胞 )首先注入实验动物体内,使其产生具有相应免疫能力的B淋巴细胞(能产生抗A或抗B抗体的B淋巴细胞),再用灭活的病毒诱导B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合,并通过多次筛选和抗体检测得到能大量增殖和产生特异性抗体的杂交瘤细胞,最后经过体外或体内培养,获取单克隆抗体。(2)单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高,并能大量制备的优点。(3)抗体的化学本质是蛋白质,高温会破坏蛋白质的空间结构,从而使该试剂失
12、去药效,因此保存温度条件苛刻。答案:(1)动物细胞融合抗原能产生抗A或抗B抗体的B淋巴灭活的病毒筛选抗体检测(2)特异性强灵敏度高(3)因温度过高导致蛋白质分子变性失活【补偿训练】某研究者用抗原(A)分别免疫3只同种小鼠(X、Y和Z),每只小鼠免疫5次,每次免疫一周后测定各小鼠血清抗体的效价(能检测出抗原抗体反应的血清最大稀释倍数),结果如下图所示。若要制备杂交瘤细胞,需取免疫后小鼠的B淋巴细胞(染色体数目40条),并将该细胞与体外培养的小鼠骨髓瘤细胞(染色体数目60条)按一定比例加入试管中,再加入聚乙二醇诱导细胞融合,经筛选培养及抗体检测,得到不断分泌抗A抗体的杂交瘤细胞。回答下列问题:(1
13、)制备融合所需的B淋巴细胞时,所用免疫小鼠的血清抗体效价需达到16 000以上,则小鼠最少需要经过_次免疫后才能有符合要求的。达到要求后的X、Y、Z这3只免疫小鼠中,最适合用于制备B淋巴细胞的是_小鼠,理由是_。(2)细胞融合实验完成后,融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外,可能还有_,体系中出现多种类型细胞的原因是_。(3)杂交瘤细胞中有_个细胞核,细胞核中染色体数目最多是_条。(4)未融合的B淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活,原因是_。【解题指南】(1)题干关键词:“效价”“杂交瘤细胞”“传代培养”。(2)隐含信息:抗体效价越高,能检测出抗原抗体反应的血清最大稀释倍数越大,说明免疫
14、后小鼠的B淋巴细胞产生抗体能力越强。(3)关键知识:制备单克隆抗体的技术流程和动物细胞体外培养的过程。【解析】本题考查制备单克隆抗体的相关知识。(1)据图中数据分析,第四次注射后Y、Z小鼠的血清抗体效价均达到16 000以上,免疫后小鼠Y产生抗体的效价最高,最适用于制备单克隆抗体。(2)B淋巴细胞与骨髓瘤细胞混合在一起时,可能发生B淋巴细胞之间的融合,骨髓瘤细胞之间的融合和B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合,故体系中会出现多种类型的细胞。(3)杂交瘤细胞形成后,小鼠的B淋巴细胞核与骨髓瘤细胞核会融合形成1个细胞核,1个细胞核中染色体数目最多可达100条。(4)未融合的B淋巴细胞经多次传代培养后,仍然不是能恶性增殖的细胞,分裂次数是有限的。答案:(1)四YY小鼠的抗体效价最高(2)B淋巴细胞相互融合形成的细胞,骨髓瘤细胞相互融合形成的细胞细胞融合是随机的,没有特异性,且融合率达不到100%(3)1100(4)不能无限增殖关闭Word文档返回原板块
