1、专题综合测评(二)微生物的培养与应用(满分：100分时间：90分钟)一、选择题(每题2分，共25小题，共50分)1有关培养基配制原则表述正确的是()A任何培养基都必须含有碳源、氮源、矿质元素、水及生长因子B碳源和氮源必须具有一定比例，碳元素的含量最多，其次为氮元素C微生物的生长除受营养因素影响外，还受到温度、pH、氧、渗透压等的影响D营养物质的浓度越高越好C培养基中碳源和氮源必须具有一定比例，但含量最多的元素不应是碳元素，应是氧元素。营养物质的浓度并不是越高越好，浓度过高会导致培养物细胞失水。2平板冷凝后，要将平板倒置，其原因是()A接种时再拿起来方便B在皿底上标记日期等方便C正着放置容易破碎
2、D防止皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染D平板倒置主要是防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染。3微生物(除病毒外)需要从外界吸收营养物质，并通过代谢来维持正常的生长和繁殖。下列有关微生物营养的说法，正确的是()A纤维素分解菌与硝化细菌所利用的碳源物质是相同的B在纤维素分解菌生长的培养基中只需碳源、氮源、水、无机盐即可正常生长C培养基中的营养物质浓度越高对微生物的生长越有利D生长因子是微生物生长必需的，而微生物本身合成这些物质的能力往往不足D纤维素分解菌是异养型微生物，其碳源为有机物，如纤维素等。硝化细菌是自养型微生物，其碳源物质为CO2，因此A错误；纤维素分解菌的培养基中需加入维生素做生长因子，才
3、能正常生长，因此B错误；培养基中的营养物质浓度过高会导致微生物不能从培养基中吸水，将出现失水过多而死亡的现象，对生长不利，因此C错误。4微生物培养是微生物工程中的基础技术，下列相关叙述正确的是()A病毒和细菌的培养基成分相同B平板划线法中的“线”是连续的、不分区域的C微生物培养基中并不是都必须添加碳源或氮源D在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行消毒C病毒必须寄生在活细胞内才能进行生命活动，如可用活鸡胚培养病毒；平板划线法每次划线前都要灼烧接种环，划线是分区域的；微生物种类不同，对营养物质的需求不同，应根据所培养微生物的需要确定培养基的成分；对培养基和培养皿要进行灭菌，
4、而不是消毒。5稀释涂布平板法是微生物培养中的一种常用的接种方法。下列相关叙述错误的是()A操作中需要将菌液进行一系列的浓度梯度稀释B需将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基表面C不同浓度的菌液均可在培养基表面形成单个的菌落D对培养基和涂布器等均需进行严格灭菌处理C只有菌液稀释到一定程度后，在固体培养基表面才能形成单个的菌落，否则可能会出现两个或两个以上的细菌共同形成一个菌落，或菌落出现重叠。6用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时()可以用相同的培养基都需要使用接种针进行接种都需要在火焰旁进行接种都可以用来计数活菌ABCDC平板划线法或稀释涂布平板法都使用固体培养基；平板划线法使用接种针进
5、行操作，而稀释涂布平板法使用涂布器进行操作；纯化时，要进行无菌操作，需要在火焰旁接种，避免空气中的微生物混入培养基；平板划线法一般用于分离而不是计数。7将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37 恒温箱的目的是()A对比观察培养基有没有被微生物利用B对比分析培养基是否被杂菌污染C没必要放入未接种的培养基D为了下次接种时再使用B对未接种的培养基进行培养，起到对照作用，可确定培养基是否被杂菌污染。8下面是微生物平板划线示意图，划线的顺序为1、2、3、4、5。下列叙述正确的是()A在五个区域中划线前后都要对接种环和培养基进行灭菌B划线操作时完全打开皿盖，划完立即盖上C接种时不能划破培养基，否则难
6、以达到分离单菌落的目的D第1区和第5区的划线最终要连接起来，以便比较前后的菌落数C在每次划线前后都要对接种环进行灭菌；进行划线操作时，左手将培养皿的皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖；注意接种时不能划破培养基，否则难以达到分离单菌落的目的；第1区和第5区的划线不能相连。9鉴别纤维素分解菌的培养基中碳源为()ACMCNaB木聚糖C纤维素D裂解酶A分离纤维素分解菌的选择培养基中，加入纤维素粉，而鉴别纤维素分解菌的培养基中加入的是纤维素钠(CMCNa)。10固氮菌可以从豆科植物的根瘤中分离出来，有关说法错误的是()A选用大且红润的豆科植物根瘤B分离培养
7、固氮菌的关键是杀死表面杂菌C因材料过大，不能采用平板培养基分离技术D可以利用选择培养基进行纯化C题目中的固氮菌应是根瘤菌。可以在缺氮的培养基上选择培养，也可以利用琼脂平板划线法进行分离。当然，杀死根瘤表面杂菌，将内部根瘤菌制成菌落是实验的关键。11某细菌培养至对数期，当细菌数目为105个/mL时，开始计时，90 min后细菌数目为1.6106个/mL。试问再经过多久，细菌数目会达到6.4106个/mL()A30 minB45 minC60 minD90 minB按公式NtN02t，则1.61061052t，2t16，t4。即细菌由105个/mL1.6106个/mL，共繁殖了4代，每个繁殖周期为
8、22.5 min。仍按此公式可知，由1.6106个/mL6.4106个/mL，繁殖了2代，共需222.545 min。12下列操作需要在火焰旁进行的是()土壤取样称取土壤稀释土壤溶液涂布平板微生物的培养ABCDD实验操作过程要进行严格的无菌操作，除实验空间必须消毒外，每个操作步骤都必须在无菌区进行。土壤的称取、溶液的稀释、涂布平板都需要在酒精灯火焰旁的无菌区(或接种箱内的酒精灯火焰旁)完成，以防止杂菌污染。13在做分离分解尿素的细菌实验时，一同学从对应稀释倍数为106的培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只筛选出大约50个菌落。该同学的结果产生的原因可能有()土样不同培养基被污染操作失误
9、没有设置对照ABCDA实验结果不同，最可能的原因是土样不同，其次是操作失误或培养基被污染，而与是否设置对照没有关系。14关于土壤中细菌的分离，下列正确的操作步骤是()土壤取样称取10 g土壤，加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中吸取0.1 mL进行平板涂布依次稀释至101、102、103、104、105、106、107倍的稀释液ABCDC在分离土壤中某种细菌时，应先选取土样(10 g)，然后加无菌水获得土壤浸出液，并进行不同倍数稀释，最后将稀释液涂布到培养基表面进行培养，并分离和计数。15三个培养皿中分别加入10 mL不同的培养基，然后接种相同的大肠杆菌样液。培养36 h后，计算菌落数，结果如下
10、表。下列相关叙述正确的是 ()培养皿培养基成分菌落数琼脂、葡萄糖35琼脂、葡萄糖、生长因子250琼脂、生长因子0A该实验采用的是液体培养基B该实验采用平板划线法接种C和对照，说明大肠杆菌的生长不需要生长因子D和对照，说明大肠杆菌的生长需要葡萄糖D该培养基加入了琼脂，故为固体培养基；对微生物进行计数时宜采用稀释涂布平板法接种，而不是平板划线法接种；与中有葡萄糖、生长因子两种变量，不能得出相应结论；和对照，自变量是有无葡萄糖，说明大肠杆菌的生长需要葡萄糖。16苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得
11、了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如下图所示，为土壤样品。下列相关叙述错误的是()A图中培养目的菌株的选择培养基中应加入苯酚作为碳源B如果要测定中活细菌数量，常采用稀释涂布平板法C若图中为对照实验，则其中应以苯酚作为唯一的碳源 D使用平板划线法可以在上获得单菌落C用苯酚作为选择培养基中的碳源，也是微生物的能源物质，会影响其他微生物生长。测定培养液中细菌数目常采用稀释涂布平板法。若为对照实验，则中应含除苯酚外的其他碳源，以苯酚作为唯一碳源。使用稀释涂布平板法或平板划线法都可以在上获得单菌落。17下列关于微生物分离和培养的叙述，错误的是()A可采用干热灭菌法对微生物培养基进行灭菌B测定土
12、壤样品中的细菌数目，常用菌落计数法C分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度D分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源A培养基灭菌通常用的是高压蒸汽灭菌法，而干热灭菌法通常适用于玻璃器皿、金属用具等耐高温且不适合其他方法的物品；分离能分解尿素的细菌，用的选择培养基里尿素是唯一的氮源，这样才能分离出分解尿素的细菌。18下列有关分解纤维素的微生物分离的叙述，不正确的是()A在加入刚果红的培养基中，当纤维素被纤维素分解菌释放的纤维素酶分解后会出现透明圈B在用刚果红染色时只能先培养微生物再加入刚果红，不能在倒平板时加入C纤维素酶的发酵方法有液体发酵法和固体发酵法D纤维素酶的测定方法，一般
13、是对所产生的葡萄糖进行定量的测定B刚果红染色有两种方法，一种是先培养微生物再加入刚果红，另一种是在倒平板时就将刚果红染液加入培养基中，然后再培养微生物，两种方法各有优缺点，但都可以应用。19下列关于纤维素分解菌分离实验的说法，不正确的是()A通常采用刚果红染色法筛选纤维素分解菌B从土壤中分离含量较多的微生物时，选择培养可以省略C该实验用到选择和鉴别培养基D在用刚果红染色法中，若将微生物培养在事先加入刚果红的培养基上，出现透明圈的菌落肯定为所需菌种D刚果红能鉴别纤维素，可采用刚果红染色法筛选纤维素分解菌；从土壤中分离含量较多的微生物时，选择培养可以省略，但需要进行鉴别培养；有些微生物具有降解色素
14、的能力，它们在长时间培养过程中会降解刚果红而形成明显的透明圈，故出现透明圈的菌落不一定为所需菌种。20加工橘子罐头时采用酸碱处理脱去中果皮(橘络)会产生严重污染。目前使用酶解法去除橘络可减少污染。下列生长在特定环境中的4类微生物，不能产生所用酶的是()A生长在麦麸上的黑曲霉B生长在酸奶中的乳酸菌C生长在棉籽壳上的平菇D生长在木屑上的木霉 B根据题目分析可知需要的酶为纤维素酶，黑曲霉、平菇、木霉分别以分解麦麸、棉籽壳、木屑为生，故能产生纤维素酶，生长在酸奶中的乳酸菌不能合成纤维素酶。21通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物。在缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长，在培养基中
15、加入青霉素可抑制细菌和放线菌的生长，在培养基中加入10%酚可以抑制细菌和霉菌的生长。利用上述方法不能从混杂的微生物群体中分离出()A大肠杆菌B霉菌C放线菌D固氮细菌A固氮微生物的生长不需要从培养基上获得氮源，可在缺乏氮源的培养基上正常生长；加入青霉素的培养基上不能生长细菌和放线菌，则可收获霉菌；加入酚的培养基使细菌和霉菌不能正常生长，而放线菌却能利用酚作原料合成自身产物。22在农田土壤的表层自生固氮菌较多。将用表层土制成的稀泥浆接种到特制的培养基上培养，可将自生固氮菌与其他细菌分开，对培养基的要求是()加抗生素不加抗生素加氮素不加氮素加葡萄糖不加葡萄糖37 恒温箱中培养2830 温度下培养AB
16、CDC自生固氮菌有固氮功能，因此培养基中不需要加氮素；细菌对抗生素敏感，因此，不能加抗生素；自生固氮菌是异养型的，应加葡萄糖；其生长繁殖的适宜温度是2830 。23某学者欲研究被石油污染过的土壤中的细菌数并从中筛选出能分解石油的细菌。下列有关操作错误的是()A利用平板划线法对细菌进行计数B利用以石油为唯一碳源的培养基筛选能分解石油的细菌C采用稀释涂布平板法分离菌种D称取土壤和稀释土壤溶液时应在火焰旁A平板划线法能对细菌分离纯化但不能计数，通常将被石油污染过的土壤浸出液稀释后，采用稀释涂布平板法分离分解石油的细菌菌种，并对菌种进行计数；筛选能分解石油的细菌只能利用以石油为唯一碳源的选择培养基；称
17、取土壤和稀释土壤溶液过程中的每一步都要在火焰旁操作。24现有两种固体培养基，已知其配制时所加的成分和含量如下表，用这两种培养基分别去分离土壤中的两种微生物，你认为它们适于分离()成分KH2PO4MgSO47H2ONaClCaSO42H2OCaCO3葡萄糖纯淀粉甲培养基0.02%0.02%0.02%0.01%0.5%0.5%2%乙培养基0.02%0.02%0.02%0.01%0.5%A甲培养基适于分离自养型自生固氮菌；乙培养基适于分离异养型自生固氮菌B甲培养基适于分离异养型自生固氮菌；乙培养基适于分离自养型自生固氮菌C甲培养基适于分离酵母菌；乙培养基适于分离真菌D甲培养基适于分离自养型共生细菌；
18、乙培养基适于分离异养型共生固氮菌B固氮菌中能独立生存的是自生固氮菌，需和其他生物结合在一起才能生存的是共生固氮菌，甲培养基中含有的葡萄糖和淀粉是有机物，由此推出该培养基适于分离异养型的自生固氮菌；乙培养基中不含有机碳源，所以可用来分离培养自养型的自生固氮菌。25下表资料表明在各种培养基中细菌的生长情况，(S、C、M)为简单培养基，U、V、X、Y、Z代表加入培养基的不同物质，问哪一种物质细菌不能合成()培养基S、C、MVZUYZXVYUXYZ生长状态注：表中“”表示能生长，“”表示不能生长。AUBVCYDZC从表中可以看出，凡是能生长的均有Y，而不能生长的均无Y。因此，Y是细菌不能合成的物质。二
19、、非选择题(共4个小题，共50分)26(10分)细菌荚膜的观察是微生物形态结构观察的基本内容之一。硅酸盐细菌在无氮培养基、钾细菌培养基及硅酸盐细菌培养基上均能生长，形成较厚的荚膜。下表1为无氮培养基的配方，表2是每种培养基上每个稀释度的菌落数及菌落直径情况。请回答下列问题：表1无氮培养基的配方葡萄糖10.0 gK2SO40.2 gK2HPO40.2 gCaCO35.0 gMgSO47H2O0.2 g琼脂20.0 gNaCl0.2 g将上述物质溶解后，用蒸馏水定容至1 000 mL表2各稀释度平板上菌落数及菌落直径培养基种类各稀释度对应的平均菌落数菌落直径(mm)103104105106无氮培养
20、基323201.02.0钾细菌培养基36640.6多数小于1.5硅酸盐细菌培养基50851.2多数大于2.0(1)根据无氮培养基的配方可知，从物理性质上看该培养基属于_培养基；从功能上看，该培养基属于_培养基，理由是_。(2)硅酸盐细菌能在无氮培养基中生长，推测该细菌具有_功能。(3)为统计硅酸盐细菌的数目，应采用_法进行接种，该方法的所有操作都应在_附近进行。(4)进行上述实验的同时也设置了空白对照，空白对照的培养基中_，说明培养基灭菌合格。根据表2中的数据可以得出，用_培养基筛选硅酸盐细菌的效果最好。解析(1)培养基中添加了一定的琼脂，且该培养基是用来观察菌落与测定菌落直径的，因此该培养基
21、为固体培养基。无氮培养基里不含氮源，故从功能上看，该培养基属于选择培养基。(2)硅酸盐细菌能在无氮培养基中生长，推测该细菌具有固氮功能。(3)从“稀释度”以及“菌落数”等信息可以分析出，硅酸盐细菌的接种方法应是稀释涂布平板法，所有操作都应在酒精灯火焰附近进行。(4)为检测培养基灭菌是否合格，需设置空白对照：空白对照的培养基中无菌落长出，说明培养基灭菌合格。从“平均菌落数”以及“菌落直径”可以看出，硅酸盐细菌培养基筛选硅酸盐细菌的效果最好。答案(1)固体选择配制的培养基中无氮源(2)固定空气中氮气的(或固氮)(3)稀释涂布平板酒精灯火焰(4)无菌落长出硅酸盐细菌27(13分)为了调查某河流的水质
22、状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题：(1)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是_；然后，将1 mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为_。(2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌，操作时，接种环通过_灭菌，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，这样做的目的是_。(3)示意图A和B中，_表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。
23、(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液中_的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高_的利用率。解析(1)为了检测培养基平板灭菌是否合格，可在涂布接种前，随机取灭菌后的空白平板先行培养一段时间。0.1 mL稀释液中平均有(393837)/338个活菌，则每毫升稀释液中活菌的数目为38/0.1380，则稀释前每毫升水样中活菌数目为3801003.8104，则每升水样中活菌数目为3.81041 0003.8107。(2)接种环、接种针等金属用具可直接在酒精灯火
24、焰的充分燃烧层灼烧，以达到迅速彻底灭菌的目的。在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，其目的是将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落。(3)比较图A和图B可以看出：A培养基中细菌的分布呈线性，是用平板划线法接种培养后得到的结果；B培养基中细菌均匀分布，是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。(4)振荡培养可以提高培养液中溶解氧的含量，还可以使菌体与培养液充分接触，提高了营养物质的利用率，因此振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。答案(1)检测培养基平板灭菌是否合格3.8107(2)灼烧将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落(3)B(4)溶解氧营养物质28(12分)临床使用抗生素
25、前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。回答下列问题：(1)为了从样本中获取致病菌单菌落，可用_法或_法将样本接种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。(2)取该单菌落适当稀释，用_法接种于固体培养基表面，在37 培养箱中培养24 h，使其均匀生长，布满平板。(3)为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有A、B、C、D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A_；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B_；
26、含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小，说明 _；含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素D的 _。(4)根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选用抗生素 _。解析(1)实验室中对微生物纯化培养时，常用的接种方法有划线法和稀释涂布平板法。(2)若让已经获得的单个菌落在固体培养基上大量且均匀繁殖，常用涂布器把稀释的菌液均匀涂满整个平板。(3)对某种抗生素越敏感的致病菌，在该抗生素存在的范围内，越不易生存，形成的透明圈就越大。但是，如果在透明圈中还有菌落生存，则说明这个菌落的细菌耐药性很强。(4)通过(3)可知，在应用时，要想杀死某
27、致病菌，就得选择能使该致病菌大量死亡，即产生的透明圈大的那种抗生素。答案(1)划线稀释涂布平板(2)涂布(3)敏感不敏感该致病菌对C的敏感性比对A的弱耐药菌(4)A29(15分)在农业生产中发现一种广泛使用的除草剂(含氮有机化合物)在土壤中不易降解，长期使用可污染土壤。为修复被该除草剂污染的土壤，可按下面程序选育能降解该除草剂的细菌(已知该除草剂在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明)。(1)制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行_处理。(2)要从长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌，从物理性质、用途方面来看，上述培养皿中培养基的特点是_。(3)在划线培养时，只有很少菌落出
28、现，大部分细菌在此培养基上不能生长的主要原因是_或有氧条件抑制了这些细菌的生长。(4)在固体培养基上形成的菌落中，无透明带菌落利用的氮源主要是_，有透明带菌落利用的氮源主要是_，据此可筛选出目的菌。(5)科研人员用放射线处理该细菌获得两个突变株A和B，然后对突变株A和B进行实验，结果如下表所示：接种的菌种一般培养基实验处理及结果A不生长添加营养物质甲，能生长B不生长添加营养物质乙，能生长AB能生长不添加营养物质甲、乙就能生长突变株A不能在一般培养基上生长的原因是_。突变株A和B混合在一起接种于一般培养基中能生长的最可能原因是_。解析(1)制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行稀释
29、处理。(2)从物理性质来看，题图培养皿中培养基属于固体培养基；从用途方面来看，该培养基是以含氮除草剂为唯一氮源的选择培养基。(3)在以该除草剂为唯一氮源的培养基上，不能降解该除草剂的细菌(除具有固氮能力的细菌外)是不能生长的。(4)含一定量该除草剂的培养基不透明，菌落周围形成透明带是由于该除草剂被某些细菌降解导致的。(5)突变株A的生长依赖于营养物质甲，突变株B的生长依赖于营养物质乙。不添加营养物质甲和乙，二者混合培养时都能生长，最可能的原因是突变株A为突变株B提供了营养物质乙，突变株B为突变株A提供了营养物质甲。答案(1)稀释(2)以该除草剂为唯一氮源的固体培养基(3)培养基中缺少这些细菌可利用的氮源(4)氮气该除草剂(5)突变株A缺乏合成营养物质甲所需要的酶突变株A生长需要营养物质甲，突变株B可以提供；突变株B生长需要营养物质乙，突变株A可以提供
