1、 教学准备 1. 教学目标 (一)知识与技能了解有关培养基的基础知识;掌握培养基的制备、高压蒸汽灭菌和平板划线法等基本操作技术(二)过程与方法分析实验思路的确定和形成的原因,分析实验流程,对比前面的实验设计,归纳共性,分析差异,增加印象(三)情感、态度与价值观形成勇于实践、严谨求实的科学态度和科学精神2. 教学重点/难点 【课题重点】无菌技术的操作【课题难点】无菌技术的操作3. 教学用具 4. 标签 教学过程 【导入】复习引入【复习引入】【师】前两节课,我们学习了微生物的实验室培养的基础知识,今天这节课我们学习实验操作,翻到P16。首先,复习知识:微生物鉴定的重要依据是_培养基的四大营养液成分
2、是_、_、_、_培养基除了为微生物提供营养物质外,还需满足微生物生长对_、_、_的需求获得纯净培养物的关键是_【生】回答【师】实验操作部分包括量大内容:制备牛肉膏蛋白胨固体培养基;纯化大肠杆菌【投影】大肠杆菌图片【生】了解【讲授】教学内容【(一)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基】【师】首先学习第一部分的内容:制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制作培养基,得知道培养基成分,及培养基配方【投影】配方(1000ml)【师】该培养基由4个组分构成,拿到配方后,我们应如何进行配置呢?分为哪几个步骤?请大家找到并勾划【生】计算;称重;溶化;灭菌;倒平板【师】课本上给出的步骤不够全面,下面我们的分析过程与之稍有不同,请大
3、家认真注意听讲【分析】计算根据所需要培养基数量,计算所需要的体积;由体积,根据配反比例,计算所需用量。如需要100ml培养基,根据配方数据,各组分缩小10倍,即得各组的用量(牛肉膏0.5g,蛋白胨1g,nacl0.5g;琼脂2g)称重制备100ml培养基,各组分用量都比较少,需准确称取各种成分实验室常用的精确度较高的称量仪器是电子天平,它的精确度可达0.0001g,即0.1mg(小数点后四位)各组分中,蛋白胨为粉末状,nacl、琼脂都容易称量,但牛肉膏比较粘稠,可用玻棒或药匙挑取,放在称量纸上称量(图片)注意:称取牛肉膏和蛋白胨时,动作要迅速,称后要及时盖上瓶盖,为什么?【生】防止牛肉膏和蛋白
4、胨吸收空气中的水分3、溶化注意溶化药品的顺序,否则有些培养基容易产生沉淀;加水加热溶化牛肉膏:称量时用称量纸称取,现在直接将称量纸一同放入烧杯中,溶化后取出称量纸丢弃加入蛋白胨和nacl,玻棒搅棒溶解加入琼脂,继续加热使其溶化,并用玻棒搅棒,为什么?【生】防止琼脂糊底,导致烧杯破裂最后,用蒸馏水定容至100ml调pH 用1mol/l 的naoh溶液调节ph至ph7.6左右 调节ph常用ph试纸或者ph测定仪5、灭菌 将烧杯中的培养基转移至三角锥形瓶中,塞上棉花塞,包上牛皮纸,放入高压蒸汽灭菌锅内灭菌15-30min 将培养皿用报纸包紧,放入干热灭菌箱内灭菌2h 灭菌结束,取出培养基、培养皿,放
5、在干净的位置待用6、倒平板待培养基冷却到50,在酒精灯火焰附近倒平板【思考】你用什么方法估计温度?【生】用手摸【师】用手触摸锥形瓶,感觉温度刚好不烫手下面我们学习如何倒平板【倒平板操作】【师】看P17图文解说,首先,大家气度一遍步骤【生】读书【分析】 将灭菌培养基放在火焰旁边的桌上,右手拿着装有培养基的锥形瓶,左手拔出棉塞 右手拿锥形瓶,使瓶口迅速通过火焰【思考】为什么要拖过酒精灯火焰? 用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙,右手将锥形瓶内的培养基倒出10-20ml,左手立即盖上皿盖 等待平板冷却凝固,约5-10min,将平板倒置【思考】为什么要倒置?【分析】平板冷凝后,皿盖上会结出水珠,凝
6、固后的培养基表面温度比较高,将平板倒置,可以防止水珠落入培养基,又可以避免培养基中水分过快地挥发【讨论4】在到平板的过程中,如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位,这个平板还能用来继续培养微生物吗?【生】不能【师】因为空气中的微生物可能会在皿盖与皿底之间的培养基上滋生,造成污染【生】笔记【师】倒平板之后,配置培养基的操作还没有结束,我们需要进行下一步:7、无菌检查将培养基放置在37的恒温箱中培养24-48h,没有长出细菌,即可进行下面的操作【生】笔记二、纯化大肠杆菌【师】纯化大肠杆菌需要用到微生物的分离与纯化技术,即:从混杂菌种中获得只含一种或一株微生物的过程可利用固体培养基,将混杂的细菌
7、分散或稀释成单个细胞,使其生长繁殖成单个菌落首先,请大家阅读课本,找到微生物的接种技术有哪几种?【生】平板划线法、稀释涂布平板法、斜面接种法、穿刺接种法【师】下面我们重点学习平板划线法、稀释涂布平板法首先,学习平板划线法【平板划线法】【师】请大家气度步骤【生】读书【分析】点燃酒精灯,后面所有操作都在酒精灯火焰附近进行 操作的第一步,必须首先将接种环在酒精灯火焰上灼烧,直接烧至红 在火焰附近冷却接种环,并打开盛有菌液的试管棉塞 将试管口通过酒精灯的火焰 将已经冷却的接种环伸入菌液中,沾取一环菌液 将试管口通过酒精灯的火焰,并塞上棉塞 左手将培养皿打开一条缝隙,右手将沾有菌液的接种环迅速伸入平板内
8、,划线三至五条注意:用力不能过大,不能将培养基划破 灼烧接种环,冷却,从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线,重复以上操作,在第三、第四、第五区域内划线注意:不要将最后一个区域的划线与第一区域相连【生】理解过程【师】课件演示划线操作【生】观看操作【师】最后,划线结束后,要将接种环在酒精灯火焰上灼烧,杀死细菌,将平板倒置,放置培养箱中培养【视频】平板划线法【生】观看,加深记忆理解【师】培养几天之后,我们就会得到长着细菌的培养基【投影】图片【(一)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基】【师】首先学习第一部分的内容:制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制作培养基,得知道培养基成分,及培养基配方【投影】配方(1000m
9、l)【师】该培养基由4个组分构成,拿到配方后,我们应如何进行配置呢?分为哪几个步骤?请大家找到并勾划【生】计算;称重;溶化;灭菌;倒平板【师】课本上给出的步骤不够全面,下面我们的分析过程与之稍有不同,请大家认真注意听讲【分析】计算根据所需要培养基数量,计算所需要的体积;由体积,根据配反比例,计算所需用量。如需要100ml培养基,根据配方数据,各组分缩小10倍,即得各组的用量(牛肉膏0.5g,蛋白胨1g,nacl0.5g;琼脂2g)称重制备100ml培养基,各组分用量都比较少,需准确称取各种成分实验室常用的精确度较高的称量仪器是电子天平,它的精确度可达0.0001g,即0.1mg(小数点后四位)
10、各组分中,蛋白胨为粉末状,nacl、琼脂都容易称量,但牛肉膏比较粘稠,可用玻棒或药匙挑取,放在称量纸上称量(图片)注意:称取牛肉膏和蛋白胨时,动作要迅速,称后要及时盖上瓶盖,为什么?【生】防止牛肉膏和蛋白胨吸收空气中的水分3、溶化注意溶化药品的顺序,否则有些培养基容易产生沉淀;加水加热溶化牛肉膏:称量时用称量纸称取,现在直接将称量纸一同放入烧杯中,溶化后取出称量纸丢弃加入蛋白胨和nacl,玻棒搅棒溶解加入琼脂,继续加热使其溶化,并用玻棒搅棒,为什么?【生】防止琼脂糊底,导致烧杯破裂最后,用蒸馏水定容至100ml调pH 用1mol/l 的naoh溶液调节ph至ph7.6左右 调节ph常用ph试纸
11、或者ph测定仪5、灭菌 将烧杯中的培养基转移至三角锥形瓶中,塞上棉花塞,包上牛皮纸,放入高压蒸汽灭菌锅内灭菌15-30min 将培养皿用报纸包紧,放入干热灭菌箱内灭菌2h 灭菌结束,取出培养基、培养皿,放在干净的位置待用6、倒平板待培养基冷却到50,在酒精灯火焰附近倒平板【思考】你用什么方法估计温度?【生】用手摸【师】用手触摸锥形瓶,感觉温度刚好不烫手下面我们学习如何倒平板【倒平板操作】【师】看P17图文解说,首先,大家气度一遍步骤【生】读书【分析】 将灭菌培养基放在火焰旁边的桌上,右手拿着装有培养基的锥形瓶,左手拔出棉塞 右手拿锥形瓶,使瓶口迅速通过火焰【思考】为什么要拖过酒精灯火焰? 用左
12、手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙,右手将锥形瓶内的培养基倒出10-20ml,左手立即盖上皿盖 等待平板冷却凝固,约5-10min,将平板倒置【思考】为什么要倒置?【分析】平板冷凝后,皿盖上会结出水珠,凝固后的培养基表面温度比较高,将平板倒置,可以防止水珠落入培养基,又可以避免培养基中水分过快地挥发【讨论4】在到平板的过程中,如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位,这个平板还能用来继续培养微生物吗?【生】不能【师】因为空气中的微生物可能会在皿盖与皿底之间的培养基上滋生,造成污染【生】笔记【师】倒平板之后,配置培养基的操作还没有结束,我们需要进行下一步:7、无菌检查将培养基放置在37的恒温箱
13、中培养24-48h,没有长出细菌,即可进行下面的操作【生】笔记二、纯化大肠杆菌【师】纯化大肠杆菌需要用到微生物的分离与纯化技术,即:从混杂菌种中获得只含一种或一株微生物的过程可利用固体培养基,将混杂的细菌分散或稀释成单个细胞,使其生长繁殖成单个菌落首先,请大家阅读课本,找到微生物的接种技术有哪几种?【生】平板划线法、稀释涂布平板法、斜面接种法、穿刺接种法【师】下面我们重点学习平板划线法、稀释涂布平板法首先,学习平板划线法【平板划线法】【师】请大家气度步骤【生】读书【分析】点燃酒精灯,后面所有操作都在酒精灯火焰附近进行 操作的第一步,必须首先将接种环在酒精灯火焰上灼烧,直接烧至红 在火焰附近冷却
14、接种环,并打开盛有菌液的试管棉塞 将试管口通过酒精灯的火焰 将已经冷却的接种环伸入菌液中,沾取一环菌液 将试管口通过酒精灯的火焰,并塞上棉塞 左手将培养皿打开一条缝隙,右手将沾有菌液的接种环迅速伸入平板内,划线三至五条注意:用力不能过大,不能将培养基划破 灼烧接种环,冷却,从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线,重复以上操作,在第三、第四、第五区域内划线注意:不要将最后一个区域的划线与第一区域相连【生】理解过程【师】课件演示划线操作【生】观看操作【师】最后,划线结束后,要将接种环在酒精灯火焰上灼烧,杀死细菌,将平板倒置,放置培养箱中培养【视频】平板划线法【生】观看,加深记忆理解【师】培养几天之后,我们就会得到长着细菌的培养基【投影】图片
