1、选修1专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数（练）1.下列关于分解尿素的细菌，说法正确的是（ ）A以尿素作为唯一碳源B能分解尿素的原因是能合成并分泌蛋白酶C环境中含有大量的尿素诱导该细菌产生了分解尿素的特性D以尿素为唯一氮源且添加了酸碱缓冲剂的培养基来培养该细菌后不会使酚红指示剂变红【答案】D【解析】由于只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源，缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，所以分离分解尿素的细菌时以尿素作为唯一氮源，A项错误；分解尿素的细菌能分解尿素的原因是能合成并分泌脲酶，B项错误；该细菌产生脲酶是受基因控制的，而不是环境中的尿素诱导的，C项
2、错误；细菌合成的脲酶将尿素分解成的氨会使培养基的碱性增强，pH升高，所以在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养该细菌后会使酚红指示剂变红，但如果培养基中添加了酸碱缓冲剂，则不会使酚红指示剂变红，D项正确。2.下列有关生物工程与技术的叙述不正确的是（ ）APCR技术可用于目的基因的获取B选择单核居中期向单核靠边期过渡的花粉进行离体培养成功率高C在以尿素为唯一碳源的培养基上长出的菌落一定是尿素分解菌D“三北防护林”建设中，应遵循协调与平衡原理和物种多样性原理【答案】C【解析】PCR可以用于外源目的基因的大量扩增，故A正确。在花粉选择进行离体培养时应选择单核靠边期的成功率高，故B正确。在以
3、尿素为唯一碳源的培养基上长出的菌落有可能是尿素分解菌也有可能是以氮气为主的细菌，还要加入酚红指示剂进行鉴别，故C错误。“三北防护林”建设中，应遵循协调与平衡和物种多样性原理，故D正确。3.分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是( )加尿素 不加尿素 加琼脂 不加琼脂 加葡萄糖 不加葡萄糖 加硝酸盐 不加硝酸盐A B C D【答案】B【解析】要分离分解尿素的细菌应以尿素为唯一氮源，故1需要2错误，故C错误。需要用固体培养基必须加入琼脂，故3正确，4错误，D错误。需要加碳源即葡萄糖，故5正确，6错误。不需要氮源，故不需要甲硝酸眼，故7错误，8正确，因此A错误，B正确。4.从土壤中分离以尿素为氮
4、源的细菌，下列实验操作不正确的（ ）A.将土壤用无菌水稀释，制备1031O5土壤稀释液B.将不同浓度的土壤稀释液涂布于不同平板上C.用加入刚果红指示剂的选择培养基筛选分解尿素的细菌D.从周围出现红色环带的菌落中挑取能够分泌脲酶的菌株【答案】C【解析】A、将土壤用无菌水稀释，然后经过系列稀释，制备1031O5土壤稀释液；A正确B、将不同浓度的土壤稀释液涂布于不同平板上；B正确C、用加入酚红指示剂的选择培养基筛选分解尿素的细菌，刚果红指示剂是用于分离分解纤维素的菌；C错误D、分解尿素的菌在分解尿素时产生氨气，氨气能使酚红指示剂显红色，从周围出现红色环带的菌落中挑取能够分泌脲酶的菌株；D正确5.下图
5、表示从土壤中分离能降解酚类化合物对羟基苯甲酸的微生物的实验过程。下列与该实验相关内容的叙述中不正确的是（ ）A实验中所用的培养基均属于选择培养基B通过图中I、过程目的是增加目标微生物的数量C统计处培养基中的菌落数并不一定代表接种到上的活菌数D在处培养基上能生长的一定是能降解对羟基苯甲酸的微生物【答案】D【解析】从混合物中分离某种微生物要用选择培养基，需要在培养基中加入特定的物质，如羟基苯甲酸，在该培养基中所需要的微生物能大量繁殖，故AB正确；稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理，当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测
6、出样品中大约含有多少活细菌。为了保证结果准确，一般设置35个平板，选择菌落数在30300的平板进行计数，并取平均值。统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示，故C正确；有些微生物可以利用其它微生物的代谢产物来进行生长繁殖，所以在选择培养基上生长的微生物不一定是所选择的微生物，故D错误。6.下列叙述不正确的是 ( )A因为土壤中各类微生物的数量不同，所以，为获得不同类型的微生物，要按不同的稀释倍数进行分离B测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围不同C如果得到了多个菌落数目在30300的平板，则说明稀释操作比较成功D牛肉膏蛋白
7、胨培养基上的菌落数目明显少于选择培养基上的数目，说明选择培养基已筛选出一些细菌菌落【答案】D【解析】牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目明显多于选择培养基上的数目，说明选择培养基已筛选出一些细菌菌落，D错误 。7.选择培养基是根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对一些物理、化学抗性而设计的培养基。利用这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。为选择酵母菌和硝化细菌，应选用的培养基分别为()A.伊红美蓝培养基、含青霉素培养基B.含青霉素培养基、含氨的无机培养基C.含氨的无机培养基、含青霉素培养基D.含青霉素培养基、伊红美蓝培养基【答案】B【解析】酵母菌是真菌，通常可以用含青霉素的培养
8、基进行选择培养，因为青霉素抑制细菌生长，但不能抑制真菌生长。硝化细菌为自养型生物，能够利用氨转变为亚硝酸和硝酸所释放的能量，把无机物转变为有机物以维持自身生命活动，利用含氨的无机培养基可进行选择培养。8.用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是()A.未接种的选择培养基B.未接种的牛肉膏蛋白胨培养基C.接种了的选择培养基D.接种了的牛肉膏蛋白胨培养基【答案】D【解析】选择的目的是为了分离、筛选，对照遵循的原则是单一变量，因此用接种了的普通培养基和选择培养基进行对照，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目。9.下面从土壤中筛选纤维素分解菌的实验步骤，正确的是
9、()土壤取样称取10 g土壤加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中吸取0.1 mL进行平板涂布依次稀释至101、102、103、104、105、106、107稀释度A. B.C. D.【答案】C【解析】在分离土壤中某细菌时，应先选取土样(10 g)，然后加无菌水获得土壤浸出液，并进行不同倍数稀释，最后将稀释液涂布到培养基表面进行培养，并分离和计数。10.用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是()A涂布了一个平板，统计的菌落数是230B涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238C涂布了三个平板，统计的菌落数分别是
10、21、212和256，取平均值163D涂布了三个平板，统计的菌落数分别是210、240和250，取平均值233【答案】D【解析】在设计实验时，一定要涂布至少3个平板作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性，所以A、B不正确。C项虽涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另两个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，此时，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。11.人和哺乳动物的尿中含有尿素，大量尿素的存在会对环境造成污染。土壤中有些细菌含有脲酶，可通过降解尿素作为其生长的氮源。现对土壤中的这类细菌进行分离实验，请回答下列问题：（1）分离培养细菌时必须进行无菌操作，包括培养基和各种器
11、皿都必须是无菌的，培养基常用的灭菌方法有 。（2）将样液进行一系列的梯度稀释，然后接种培养。在稀释土壤溶液的过程每一步都要在 旁进行操作。接种后的培养皿 于37的 中培养。（3）用含有酚红指示剂的培养基筛选能分泌脲酶的细菌，从功能上划分该培养基属于 培养基。若培养基中存在有分解尿素的细菌，其菌落周围会出现红色环带，这是由于尿素被分解产生的 使pH升高，酚红指示剂产生的颜色变化，从而证明这一菌株可以尿素为氮源。变色区域越大，表明该菌株利用尿素的能力 。（4）与全营养培养基中的菌落相比，以尿素为氮源的培养基中菌落数 。A多 B少 C相等 D几乎为零【答案】（1）高压蒸汽灭菌（2）酒精灯火焰旁 倒置
12、 恒温培养箱（3）选择 氨 越强（4）B【解析】（1）培养基常用的灭菌方法为高压蒸汽灭菌，为彻底灭菌。（2）稀释土壤溶液的过程每一步都要在酒精灯火焰旁进行操作，消灭其他微生物。接种后的培养皿倒置于37的恒温培养箱中培养，倒置是防止水蒸气在培养皿盖凝结，恒温37保证繁殖适宜温度。（3）具有筛选微生物功能的培养基为选择培养基。尿素被分解产生的氨使pH升高，酚红指示剂变红。变色区域越大，表明该菌株分解尿素生成的氨越多，利用尿素的能力越强。（4）只有部分细菌会分解尿素，故以尿素为氮源的培养基中菌落数少。12.生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，为从土壤中微生物筛选到能分解尿素的细菌。培养基成分如下表所
13、示，实验步骤如图1所示。回答下列问题KH2PO4Na2HPO4MgSO47H2O葡萄糖尿素琼脂1.4 g2.1 g0.2 g10 g1 g15 g将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL，调pH为7.2（1）分解尿素的细菌能分泌_酶，能将尿素分解成_。（2）培养基中为“目的菌”生长提供氮源和碳源的物质分别来自_和_。为了满足图示锥形瓶中目的菌对氧气的需求，在培养时应采用的操作方法是_。（3）图中将细菌转到固体培养基上时，应采用_法接种以获得单个菌落。初步筛选出来的菌种还需要用生化的方法作进一步的鉴定，鉴定方法是检测初步筛选目的菌种培养基的pH，若pH_（降低/不变/升高），说明该菌种能够分
14、解尿素。（4）A同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。有同学认为造成A同学实验结果的原因是培养基被杂菌污染。为了证实该说法，则进一步实验的操作思路是_ 。【答案】(1) 脲 氨 （2）尿素 葡萄糖 振荡培养 （3）稀释涂布 升高 （4）将A同学的培养基在不加土样的情况下，设置空白对照【解析】（1）分解尿素的细菌能分泌脲酶，能将尿素分解成氨。（2）培养基中加入尿素和葡萄糖的目的是为目的菌提供氮源和碳源。为了满足图示锥形瓶中目的菌对氧气的需求，在培养时应振荡培养，增大溶氧量。（3）转入固体培养基常采用平板划线法或稀释涂布平板法。检测初步筛选目的菌种培养基的pH，若pH升高，说明该菌种能够分解尿素，因为尿素分解后产生的氨呈碱性。（4）为了确定培养基是否被杂菌污染，应将A同学的培养基在不加土样的情况下，设置空白对照，观察实验结果。
