1、(时间：30分钟)一、选择题1(2013东城区检测)欲从土壤中分离出能分解尿素的细菌，下列实验操作中不正确的是()。A将土壤用无菌水进行一系列的梯度稀释B同一浓度的土壤稀释液应至少涂布三个平板C可将未接种的培养基在相同条件下培养作为对照D用加入刚果红指示剂的培养基可筛选出分解尿素的细菌解析本题考查微生物的分离与培养，意在考查考生的实验分析能力。为了获得单个菌落，应将土壤用无菌水进行一系列的梯度稀释，A正确；为了使结果更加准确，同一浓度的土壤稀释液至少要涂布3个平板进行重复实验，然后计算平均值，B正确；加入刚果红的培养基用来筛选纤维素分解菌，D错误。答案D2(2013广东深圳一模，2)某学者欲研
2、究被石油污染过的土壤中细菌数量，并从中筛选出能分解石油的细菌。下列操作错误的是()。A利用平板划线法对细菌进行计数B用以石油为唯一碳源的培养基筛选C采用稀释涂布平板法分离菌种D称取和稀释土壤时应在火焰旁解析平板划线法能对细菌分离纯化，但不能对细菌进行计数，稀释涂布平板法可以分离菌种还可进行计数，A项错误。答案A3(2013成都模考)分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是()。加尿素不加尿素加琼脂不加琼脂加葡萄糖不加葡萄糖加硝酸盐不加硝酸盐A BC D解析土壤中分解尿素的细菌能够利用尿素作为氮源，因此若培养基中氮源只有尿素，分解尿素的细菌能生长，其他微生物不能生长；分离微生物要用固体培养基，
3、必须加入琼脂；土壤中分解尿素的细菌属于异养型微生物，需要加葡萄糖作为碳源。答案B4(2013成都模考)关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述错误的是()。A操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯C等培养基冷却至50 左右时进行倒平板D待平板冷却凝固510 min后将平板倒过来放置解析操作顺序为先灭菌再倒平板；牛肉膏会黏附在称量纸上，应该将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯；培养基冷却至50 左右既没有凝固，同时又不烫手，可以进行倒平板；为了防止冷却过程中培养皿盖上凝集的水珠对平板的污染，培养基冷却凝固后就要将平板倒过来放置。答案A5(2013淮阴期末质量调
4、研，14)如图是微生物平板划线示意图。划线的顺序为12345。下列操作方法正确的是()。A操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌B划线操作应在火焰上进行C在5区域中才可以得到所需菌落D在12345区域中划线前后都要对接种环灭菌解析本题考查平板划线操作方法。在每次划线前后都要对接种环进行灭菌，接种环的灭菌方法应是在火焰上灼烧，接种时划线操作是在火焰旁进行。在5个区域中，只要有单个活细菌，通过培养即可获得所需菌落。 答案D6(2012东城区检测)下列关于微生物分离和培养的叙述，错误的是()。A微生物培养前，需对培养基进行消毒B测定土壤样品中的细菌数目，常用菌落计数法C分离土壤中不同的微生物，要采用不同
5、的稀释度D分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中的唯一氮源解析微生物培养前，需对培养基进行灭菌，而不是消毒；测定土壤样品中的细菌数目，常用菌落计数法；分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度，因为不同的微生物在土壤中的含量不同；分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中的唯一氮源。答案A7(经典高考)下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是()。A用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板B取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于各组平板上C将实验组和对照组平板倒置，37 恒温培养2448 hD确定对照组无菌后，选择菌落数
6、在300以上的实验组平板进行计数解析本题以“检测土壤中细菌总数”实验为命题点，考查考生对基础知识的识记情况。在细菌计数时，为保证结果准确，一般选择菌落数目在30300的平板进行计数。答案D二、非选择题8饲养动物常用的植物饲料中含有难溶的植酸钙等物质，很难被动物吸收利用，还影响对其他营养物质的利用。若在饲料中添加植酸酶，则能催化其水解成为可以吸收利用的磷酸盐等。下图是学生们从作物根部土壤中分离产植酸酶的菌株的过程。(1)分离产植酸酶的菌株，需先配制合适的培养基。配制培养基时，在各成分都溶化后和分装前，要进行的是_和灭菌。对培养基进行灭菌的常用方法是_。倒平板时，一般需冷却至50 左右，在酒精灯火
7、焰附近操作。依物理性质，该培养基属于_培养基。依功能看，该培养基属于_培养基。(2)接种以前进行的一系列稀释操作，目的是在培养皿表面形成_，这种接种方法是_。根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的菌落数就能大致推测出样品中的活菌数。如果一培养基上有3个菌落，则1 g土壤中大致的活菌数量是_个。(3)由于植酸钙的不溶解性，可使培养基形成白色浑浊。产植酸酶的菌株会水解植酸钙，菌落的周围将形成透明的区域，根据透明区域的有无，可初步判断该菌是否产植酸酶。实验结果显示AE五种菌株中，_是产植酸酶的理想菌株。答案(1)调整pH高压蒸汽灭菌固体选择(2)单个菌落稀释涂布平板法3106(3)E
8、9(2013山东潍坊一模，34)某实验小组欲从土壤中筛选出能分泌淀粉酶的芽孢杆菌，设计实验步骤如下，请给予合理的补充。(1)采样与培养：将采集的土样混匀后称取1 g，置于经过_法灭菌处理的_(填“固体”或“液体”)培养基中，28 振荡培养。(2)接种与选择：为避免培养液中菌体浓度过高，需将培养液进行_处理之后，将菌液涂布接种于以_为唯一碳源的固体培养基上，30 条件下培养。为避免污染，需将培养皿呈_状态放置。(3)筛选与纯化：将适量的碘液滴加在平板中的菌落周围，如果菌落周围的现象是_，则说明此种菌能够_。从平板中挑取实验效果明显的目的菌株，采用_法接种于新的培养基平板，可对菌株进行进一步的纯化
9、。答案(1)高压蒸汽灭菌液体(2)系列稀释(或“梯度稀释”)淀粉倒置(3)出现透明圈分泌淀粉酶使淀粉发生水解 (平板)划线10(2013开封模拟)生物乙醇是以生物质为原料生产的可再生能源。我国利用农作物废弃物(秸秆)生产乙醇，其技术流程为纤维素酶分解酵母菌发酵蒸馏成品。纤维素酶可以从能分解纤维素的细菌培养液中提取。某同学设计了从土壤中分离纤维素分解菌的实验流程：土壤取样选择培养梯度稀释鉴别培养。请分析回答下列问题：(1)最好选择_的土壤采集土样。(2)配制培养基时，各种成分在溶化后分装前必须进行_，接种前要进行_。在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在无菌条件下进行。在制备牛肉膏蛋白胨固体培
10、养基的倒平板操作时，平板冷凝后，应将平板_放置，这样做的目的是_。(3)以下是两种培养基配方：A培养基配方：KH2PO4Na2HPO4MgSO47H2O纤维素酶葡萄糖尿素琼脂1.4 g2.1 g0.2 g1 g10.0 g1.0 g15.0 gB培养基配方：KH2PO4NaNO3Na2HPO47H2OMgSO47H2OKCl纤维素粉酵母膏水解因素0.9 g1 g1.2 g0.5 g0.5 g5 g0.5 g0.5 g如果要分离提纯土壤中的纤维素分解菌，应选择_(填编号)培养基配方，从功能看该培养基属于_培养基。(4)为了鉴别纤维素分解菌和进一步纯化菌种，可以在鉴别培养基中加入_，将筛选获得的菌
11、液稀释后用_法接种到鉴别培养基上，然后挑选产生_的菌落作为菌种进行扩大培养。答案(1)纤维素含量丰富(2)调整pH高压蒸汽灭菌倒过来防止冷凝水污染培养基(3)B选择(4)刚果红染液涂布平板透明圈11(2013山西四校联考)(1)为了获得耐高糖、耐酸特性的酵母菌菌种，可以对野生菌种进行_。然后在_(培养基的物理状态)培养基上进行培养，该培养基要比基本培养基额外添加_，并且将pH_。(2)某培养基的配方：NaNO3、KH2PO4、NaH2PO4、MgSO47H2O、KCl、H2O。若用于培养纤维素分解菌，应加入_，为检验纤维素分解菌的存在与否，还应加入_，若存在纤维素分解菌，则培养基上将出现_。获
12、得的菌种如果需要长期保存，可以采用_的方法。(3)安徽怀远盛产石榴，石榴酒也是当地的特产。利用石榴发酵制作石榴酒的过程中，发酵装置内加入石榴汁后要留出约的空间，目的是_。石榴汁发酵后，可用_来鉴定发酵液中的酒精，要使鉴定的结果更有说服力，应设置对照实验，对照组和实验组的区别在于_。(4)筛选乳酸菌时可选用_或_接种，培养基中的尿素可为乳酸菌生长提供_。答案(1)诱变处理(或紫外线照射或射线照射)固体高浓度糖调低(或调为酸性)(2)纤维素粉刚果红透明圈甘油管藏(3)有利于酵母菌有氧呼吸并进行快速繁殖；防止发酵过程中产生的CO2造成发酵液溢出酸性的重铬酸钾溶液用等量的蒸馏水代替发酵液(4)平板划线
13、法稀释涂布平板法氮源12苹果醋具有营养丰富，增加机体免疫力，护肤养肝等多种功效，以鲜苹果汁为原料利用发酵瓶制作果酒和果醋的过程简图如下，请分析并回答：(1)过程甲中使用的微生物是_。将鲜苹果汁装入发酵瓶时，要留有大约_的空间，经过1012天后，在酸性条件下用重铬酸钾检测样液，如果颜色变为_色，说明产生了酒精。(2)过程乙中使用的微生物是_，可以从食醋中分离纯化获得，步骤如下：第一步：配制_(填“固体”或“液体”)培养基。第二步：对培养基进行高压蒸汽灭菌。第三步：接种。微生物常用的接种方法有稀释涂布平板法和平板划线法。第四步：培养。温度控制在_范围内。第五步：挑选符合要求的_。(3)在_的条件下
14、，如果缺少糖源，乙中的微生物将甲过程的产物变为_，再将其变为醋酸。解析(1)制作果酒应选用酵母菌。将鲜苹果汁装入发酵瓶时，要留有大约的空间。重铬酸钾溶液与酒精反应呈灰绿色。(2)制作果醋应选用醋酸菌；分离纯化菌种需要固体培养基；醋酸菌生长的最适温度为3035 。(3)氧气充足时，如果缺少糖源，醋酸菌会将乙醇变为乙醛，再将其变为醋酸。答案(1)酵母菌灰绿(2)醋酸菌固体3035菌落(3)氧气充足(有氧)乙醛13(2013西安统考)35%40%的甲醛水溶液(福尔马林)可作为防腐剂，其防腐的原理是使蛋白质变性。自然界中有能分解甲醛的细菌和真菌。下图为分离和纯化分解甲醛细菌的实验过程。请分析回答：(1
15、)过程的目的是_，过程培养出的是_。(2)上述实验中，不需要进行灭菌处理的是_，培养基灭菌的常用方法为_。(3)由的接种可选用_法，通过培养能获得_。经过过程后，取样测定甲醛浓度，选出_，再分离、培养菌株。此菌种异化作用的类型是_。(4)为研究甲醛初始浓度对菌株降解甲醛能力的影响，进行了相应实验并得到如下结果。由图可知，当甲醛的初始浓度小于1 200 mg/L时，菌株_；当甲醛的初始浓度增高至1 600 mg/L时，48 h后菌株对甲醛的降解能力很弱，甚至失去降解能力，其原因可能是_。答案(1)增加目的菌的菌群数量(提高菌的种群密度)以甲醛为唯一碳源的细菌(2)活性污泥高压蒸汽灭菌法(3)平板划线(稀释涂布)单个菌落甲醛浓度最低的培养瓶需氧型(4)可以完全降解甲醛甲醛浓度过高会使菌体蛋白质变性，从而降低了细菌降解甲醛的能力(甲醛浓度过高会产生毒害作用，降低了细菌降解甲醛的能力)
