1、1(2018湖北武汉调研)应用植物组织培养技术，不仅可实现种苗的快速繁殖、培育无病毒植株，也可加快作物及苗木育种。下面是培育柑橘耐盐植株的实验流程：茎段耐盐植株回答下列问题：(1)愈伤组织是由离体的茎段经_过程形成的，此时愈伤组织细胞_(填“具有”或“不具有”)细胞的全能性。(2)对愈伤组织进行了两次处理，处理1中射线照射的目的是_，用射线不直接处理茎段而是处理愈伤组织，原因是_；处理2中添加的物质X为_。(3)植物组织培养技术也被广泛应用于其他作物的育种中。在培育白菜甘蓝、三倍体无子西瓜、农杆菌转化法获得的抗虫棉中，必须用到植物组织培养技术的是_。解析：(1)离体的茎段经过脱分化过程可形成愈
2、伤组织，此时愈伤组织具有未分化的特点，细胞依然具有较高的全能性。(2)图中对愈伤组织进行了两次处理，第一次处理是用射线照射诱发愈伤组织细胞发生基因突变。愈伤组织细胞分裂能力强，易受到培养条件和外界压力的影响而发生基因突变。第二次处理是抗盐接种实验，即在培养基中加入氯化钠，适应一定浓度盐的愈伤组织才可以生长，不适应的愈伤组织死亡。(3)作物育种研究中常用农杆菌转化法将含抗虫基因的Ti质粒导入到植物体细胞中，再利用植物组织培养技术获得抗虫的农作物。运用细胞工程培育白菜甘蓝杂种植株，需要采用植物组织培养技术将杂种细胞培养成杂种植株。答案：(1)脱分化具有(2)诱发基因突变愈伤组织细胞分裂能力强，易诱
3、发基因突变NaCl(或盐)(3)白菜甘蓝、抗虫棉2(2018安徽芜湖质检)下图为A、B两种二倍体植物体细胞杂交过程示意图，请据图回答：(1)步骤的方法是_。步骤常用的化学试剂是_，之后_(填“是”或“否”)需要筛选。(2)在利用杂种细胞培育成为杂种植物的过程中，运用的技术手段是_，其中步骤是_。植物体细胞杂交的目的是获得新的杂种植物，与A、B两种植物相比，该杂种植物是新物种的原因是_。(3)培育该杂种植物的过程中，遗传物质的传递是否遵循孟德尔遗传规律？为什么？_。解析：(1)图为植物体细胞杂交过程示意图，其中表示去壁获取原生质体的过程，常用酶解法，即用纤维素酶和果胶酶处理；表示人工诱导原生质体
4、融合，常用的化学试剂是聚乙二醇(PEG)，诱导后形成的两两融合的原生质体有三种，所以需要进行筛选。(2)图中表示再生出新细胞壁的过程，杂种细胞通过植物组织培养技术培育成为杂种植物，过程表示脱分化；表示再分化过程。图中获得的杂种植物与A、B两种植物间均存在生殖隔离，所以是新物种。(3)图示为植物体细胞杂交过程，没有经过不同配子的结合，所以不属于有性生殖，因此该过程中遗传物质的传递不遵循孟德尔遗传规律。答案：(1)酶解法聚乙二醇是(2)植物组织培养技术脱分化该杂种植株与A、B两种植物间均存在生殖隔离(3)不遵循，该过程不属于有性生殖3动物细胞培养是其他动物细胞工程技术的基础。回答下列与动物细胞培养
5、有关的知识。(1)利用幼龄动物的组织进行动物细胞培养时，需剪碎，用_处理分散成单个细胞。在培养过程中，分散的单个细胞贴附瓶壁生长，称为_。(2)当贴壁生长的细胞生长到彼此相互接触时停止生长，这种现象叫做_。培养的细胞一般传至_代后不易传下去。继续传代培养的细胞，某些细胞会克服细胞寿命，获得_。(3)动物细胞培养所用的培养基是_培养基，通常需加入_等天然成分。在细胞培养时，为了防止污染，常在培养基中加入一定量的_。细胞培养所需的气体主要有_。解析：(1)动物细胞培养时，用胰蛋白酶或胶原蛋白酶将组织分散成单个细胞。细胞贴着瓶壁生长的现象叫细胞贴壁。(2)动物细胞生长存在接触抑制。传代培养的细胞一般
6、传到10代就不易传下去了。继续传代培养时，少部分细胞会克服细胞寿命的自然极限，获得不死性。(3)动物细胞培养所用的培养基属于合成培养基，常需加入动物血清、血浆等天然成分。在细胞培养时，为了防止杂菌污染，常在培养基中加入一定量的抗生素。细胞培养所需气体主要有氧气和二氧化碳。答案：(1)胰蛋白酶或胶原蛋白酶细胞贴壁(2)接触抑制10不死性(3)合成动物血清、血浆抗生素O2和CO24如图表示细胞工程的流程图(a、b表示过程)，请据图回答下列问题：(1)若图示为动物细胞融合的过程，则a特有的诱导剂是_。以动物细胞融合为基础发展起来的杂交瘤技术为制造单克隆抗体开辟了新途径，通过把能产生抗体的_细胞与能在
7、体外大量增殖的_细胞进行融合，得到既能迅速大量繁殖，又能产生专一抗体的杂交瘤细胞。(2)若图示为植物体细胞杂交过程，则在甲、乙融合之前，需要用_(填工具酶)制备_。这项工程的意义是_。(3)由甲乙融合得到丙细胞的基本原理是_。解析：(1)若a是诱导动物细胞融合，则特有的诱导剂是灭活的病毒。在单克隆抗体的制备过程中，利用已免疫的B细胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞，该细胞既可以迅速大量增殖，又可以产生专一性抗体。(2)在植物体细胞杂交过程中，需要对甲乙细胞先用纤维素酶和果胶酶去壁，然后再诱导甲乙的原生质体融合。该技术可以克服有性杂交远缘不亲和障碍，扩大亲本组合的范围。(3)甲乙细胞融合形成丙细
8、胞，利用了细胞膜的流动性。答案：(1)灭活的病毒B淋巴(浆)骨髓瘤(2)纤维素酶和果胶酶原生质体克服有性杂交远缘不亲和障碍，扩大亲本组合的范围(3)细胞膜的流动性5利用细胞工程技术制备抗人绒毛膜促性腺激素 (HCG)单克隆抗体，其主要流程如下：回答下列问题：(1)制备抗HCG单克隆抗体过程中，用到的动物细胞工程技术有_和_。(2)细胞DNA合成有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。在HAT培养基中加入了氨基嘌呤，杂交瘤细胞能连续增殖，未融合细胞以及同种融合细胞因不能增殖而死亡。由此可判断骨髓瘤细胞DNA合成存在_(填“D”、“S”或“D和S”)途径。(3)步骤需对选择培养的杂交瘤细胞进
9、行克隆化培养及抗体检测，该过程一般在多孔细胞培养板上进行。先将细胞悬液稀释到710个细胞/mL，再在每个培养孔中滴入0.1 mL细胞稀释液，其目的是_。(4)用抗HCG单克隆抗体作为诊断试剂，能在妊娠初期即可作出诊断，主要是因为该抗体具有_的优点。解析：(1)制备单克隆抗体过程中，用到的动物细胞工程技术有动物细胞融合和动物细胞培养。(2)免疫后的B淋巴细胞不能分裂增殖，鼠骨髓瘤细胞能不断分裂增殖。在HAT培养基中加入氨基嘌呤，阻断了细胞DNA合成的D途径，但DNA合成的S途径没有被阻断，结果未融合的细胞(包括骨髓瘤细胞和淋巴细胞)以及同种融合细胞(包括骨髓瘤细胞与骨髓瘤细胞融合、淋巴细胞与淋巴
10、细胞融合)因不能增殖而死亡，由此可判断骨髓瘤细胞DNA合成存在D途径。(3)在多孔细胞培养板上对选择培养的杂交瘤细胞进行培养时，先将细胞悬液稀释到710个细胞/mL，再在每个培养孔中滴入0.1 mL细胞稀释液的目的是使每个孔内不多于一个细胞，从而实现单克隆培养。(4)单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高的优点。答案：(1)动物细胞融合动物细胞培养(2)D(3)使每个孔内不多于一个细胞，达到单克隆培养的目的(4)特异性强、灵敏度高6(2018湖南长郡中学模拟)动植物细胞工程在农业生产、医药卫生等领域有着广泛的用途。回答下列问题。(1)在将两种植物细胞进行杂交之前，需要用_酶进行处理，若将处理后的细胞
11、放入较高浓度的蔗糖溶液中，会发生_。诱导两种植物细胞融合可以采用物理或化学的方法进行，常用的物理方法有_(写2种即可)。(2)融合的细胞形成愈伤组织，在愈伤组织的培养过程中，当生长素和细胞分裂素的比值_(填“高”或“低”)时，有利于丛芽的分化；通过上述过程获得杂种植株依据的原理是_。(3)在制备单克隆抗体的过程中，融合的结果是出现多种不同的杂交细胞，需要在特定的培养基上进行筛选，从而得到_细胞。单克隆抗体与传统方法获得的抗体相比，具有_的特点，因此广泛用于疾病的诊断等方面。解析：(1)植物体细胞杂交过程有两个关键，一个是在将植物细胞进行杂交之前，必须去除细胞壁，该过程需要用到纤维素酶和果胶酶；
12、另外一个是诱导原生质体的融合，方法包括物理法(离心、振动、电刺激)和化学法(聚乙二醇)。将处理后的细胞放入较高浓度的蔗糖溶液中，会发生渗透作用。(2)在愈伤组织的培养过程中，当生长素和细胞分裂素的比值低时，有利于丛芽的分化；通过题述过程获得杂种植株依据的原理是细胞膜具有一定流动性和植物细胞具有全能性。(3)用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞，该杂种细胞既能够大量增殖又能产生特异性抗体。与传统方法获得的抗体相比，单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高、可大量制备的特点。答案：(1)纤维素酶和果胶渗透作用离心、振动、电激(2)低细胞膜的流动性、植物细胞具有全能性(3)杂交瘤特异性强、灵敏度高、可大量制备
