1、实验6 -淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测 导学案【学习目标】1. 尝试用吸附法制作固定化-淀粉酶。2. 应用固定化-淀粉酶进行淀粉水解的测定。3. 说明酶固定化的方法及制作原理。4. 通过此实验探讨固定化酶的应用价值。一、基础盘点：酶与固定化酶1酶：活细胞产生的具有催化作用的一类有机物，它是生物体内各种化学反应的催化剂。2固定化酶：将_的酶用_或_方法_，使之成为_而又有_的制剂。3将酶改造成固定化酶的原因是：由于酶_，且不利于_，所以要将酶改造成固定化酶。4酶固定化的方法有：_法、_法、_法和_法等。本实验用的是_法。5固定化酶作用的机理：将固定化酶_，当_时，在_的作用下_。二、自主探
2、究：-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测实验1. 实验目的：(1)制备 。(2)进行 的测试。2. 实验原理：用 法将-淀粉酶固定在 上。一定浓度的淀粉溶液经过 后，可使淀粉水解成 。用 （ ）测试，若流出物呈_色，表明有_生成。淀粉 葡萄糖遇碘显蓝色 遇碘显红色 遇碘不显色3本实验使用的酶及特性：本实验使用的酶是 的-淀粉酶，其作用的最适宜pH为_，最适宜温度为_。4 实验设备及用品：5 mL塑料注射器、50 mL烧杯、滴管、自行车用气门芯及夹子、注射器架、试管或微量离心管3支。5实验材料及其制备：淀粉酶的固定化：在烧杯中将5 mg 溶于4 mL 中 (由于 ，可能有些不溶物)； 再加入5g
3、_，不时搅拌30 min；然后将上述溶液装入1支注射器中 (该注射器的下端接有_并用_封住)，石英砂体积约4 mL用 倍体积的蒸馏水_此注射器以除去 ，流速为1 mL/min。可溶性淀粉溶液：取_mg可溶性淀粉溶于100 mL_中，搅拌均匀。可溶性淀粉溶液：称取0.127 g 和0.83 g 。加蒸馏水100 mL，完全溶解后装入滴瓶中。6 实验步骤： 固定化-淀粉酶，装入注射器中 以0.3mL/min的流速滴加 过柱 流出5mL的淀粉溶液后接收0.5mL流出液 滴加 溶液，观察颜色。用水稀释_倍后再观察颜色。 用_倍柱体积的蒸馏水洗涤固定化柱。放置在_冰箱中，几天后重复实验7预期实验结果：三
4、、我的困惑：四、实验优化方案：五、 最终实验结果样品水淀粉溶液淀粉滤液 KI-I2溶液稀释1倍结果 对照+-+-样品1-+-+-样品2-+-样品3-+你的实验达到预期实验结果了吗？若没有，请分析失败原因。六、真题感悟1、（2019浙江自选，17）利用紫甘薯制酒可提高其附加值。请回答：由于酶在水溶液中不稳定，因此常将酶固定在某种介质上制成 。紫甘薯匀浆流经-淀粉酶柱后，取适量流出的液体，经脱色后加入KI-I2溶液，结果液体呈红色。表明该液体中含有 。A. 淀粉 B. 糊精 C. 麦芽糖 D. 葡萄糖2、（2019浙江自选，17）(1)某兴趣小组欲利用固定化酶进行酶解淀粉的实验，分组见下表。组别固
5、定化酶柱长度(cm)淀粉溶液的流速(mLmin-1)甲100.3乙100.5丙150.3丁150.5将吸附了淀粉酶的石英砂装入柱中后，需用蒸馏水充分洗涤固定化酶柱，以除去_。按上表分组，将配制好的淀粉溶液加入到固定化酶柱中，然后取一定量的流出液进行KII2检测。若流出液呈红色，表明有_生成；若各组呈现的颜色有显著差异，则流出液中淀粉水解产物浓度最高的是_组。(2)下列关于上述固定化酶实验的叙述，错误的是_。A固定化酶柱长度和淀粉溶液流速决定了酶柱中酶的含量B淀粉溶液流速过快会导致流出液中含有淀粉C各组实验所用的淀粉溶液浓度应相同D淀粉溶液的pH对实验结果有影响3、（2019浙江自选，17）某工
6、厂为了生产耐高温植酸酶饲料添加剂，开展了产该酶菌株的筛选、酶的固定化及其特性分析研究，其流程如下图所示。请回答下列问题。（4）在合适条件下，将提纯的植酸酶与海藻酸钠混合后，滴加到一定浓度的钙离子溶液中，使液滴形成凝胶固体小球。该过程是对酶进行。A.吸附 B.包埋 C.装柱 D.洗涤（5）温度与植酸酶相对酶活性的关系如图所示。下列叙述错误的是。A.测试温度中，固定化与非固定化植酸酶的最适温度分别为60 和45 B.测试温度范围内，固定化植酸酶的相对酶活性波动低于非固定化植酸酶C.固定化与非固定化植酸酶相比，相对酶活性在80%以上时的温度范围较宽D.65 时固定化与非固定化植酸酶的相对酶活性因蛋白
7、质变性而位于最低点七、巩固练习1、下列各项中属于固定化酶优点的是（ ）A. 有利于增加酶的活性 B. 有利于产物的纯化C. 有利于提高反应速度 D.有利于酶发挥作用2、下列关于淀粉酶的固定化过程的叙述中错误的是()A首先要在烧杯中将淀粉酶溶于4 mL蒸馏水中B再将5 g石英砂加入上述烧杯中，不时搅拌30 minC随后将烧杯中的物质装入1支下端接有气门芯但并不封住的注射器中D最后用10倍体积的蒸馏水洗涤此注射器，除去那些未吸附的游离淀粉酶3、（2019金华十校联考）请回答与“固定化酶”实验有关的问题：（1）淀粉酶可以通过培养枯草杆菌来生产，是筛选高表达量菌株的最简便方法之一。筛选出的菌株在发酵生产之前还需利用培养基进行扩大培养。（2）利用物理或化学的方法将淀粉酶固定后，成为且又有酶活性的制剂。若用吸附法固定时，在装柱后需要用 缓慢冲洗，直至流出液不使淀粉碘混合液发生为止。（3）将淀粉溶液以一定流速从反应柱上端滴入，再在下端接取少量流出液进行KII2颜色测试，结果不呈现红色。对此现象的解释错误的是A.反应柱中没有淀粉酶被固定 B.流速过快淀粉未被水解C.接取的流出液是蒸馏水 D.流速过慢淀粉被水解成葡萄糖
