1、课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、选择题1发酵工程的第一个重要工作是选择优良的单一纯种，消灭杂菌、获得纯种的方法不包括()A根据微生物对碳源需要的差别，使用含不同碳源的培养基B根据微生物需要的生长因子的种类，在培养基中增减不同种类的生长因子C根据微生物遗传组成的差异，在培养基中加入不同比例的核酸D根据微生物对抗生素敏感性的差异，在培养基中加入不同种类的抗生素解析：选C由于不同的微生物对碳源、氮源、无机盐、生长因子的需求不同，可以根据微生物的生长需求来配制特殊的培养基，以获得单一的纯种；也可以根据其对抗生素的敏感性不同，加入不同的抗生素来获得单一的纯种。2分离土壤中分解尿素的细菌时，对培
2、养基的要求是()加尿素不加尿素加琼脂不加琼脂加葡萄糖不加葡萄糖加硝酸盐不加硝酸盐ABC D解析：选C土壤中分解尿素的细菌能够合成脲酶，将尿素分解生成氨，利用尿素中的氮合成自身有机物。培养基中尿素作为唯一氮源，分解尿素的细菌能生长，其他微生物不能生长；分离微生物要用固体培养基，需要加琼脂；土壤中分解尿素的细菌属于异养微生物，需要加葡萄糖作为碳源。3下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是()A用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板B取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL分别涂布于各组平板上C将实验组和对照组平板倒置，37 恒温培养244
3、8 hD确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数解析：选D采用稀释涂布平板法统计菌落数目时，一般选择菌落数在30300的实验组平板进行计数。4下列操作需要在火焰旁进行的是()土壤取样称取土壤稀释土壤溶液涂布平板微生物的培养A BC D解析：选D实验操作过程要进行严格的无菌操作，除实验空间必须消毒外，每个操作步骤都必须在无菌区进行。土壤的称取、溶液的稀释、涂布平板都需要在酒精灯火焰旁的无菌区(或接种箱内的酒精灯火焰旁)完成，以防止杂菌污染。5通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物。在缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可抑制细菌和放线
4、菌的生长；在培养基中加入10%酚可以抑制细菌和霉菌的生长。利用上述方法不能从混杂的微生物群体中分离出的是()A大肠杆菌 B霉菌C放线菌 D固氮细菌解析：选A固氮微生物的生长不需要从培养基上获得氮源，可在缺乏氮源的培养基上正常生长；加入青霉素的培养基上不能生长细菌和放线菌，则可收获霉菌；加入酚的培养基使细菌和霉菌不能正常生长，而放线菌却能利用酚作为原料合成自身产物。6在做分离分解尿素的细菌实验时，一同学从对应稀释倍数为106的培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只筛选出大约50个菌落。该同学的结果产生的原因可能有()土样不同培养基被污染操作失误没有设置对照A BC D解析：选A实验结果不同
5、，最可能的原因是土样不同，其次是操作失误或培养基被污染，而与是否设置对照没有关系。7(2019郑州期中)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的过程中，关于倒平板的描述正确的是()等培养基冷却至40 左右时，在酒精灯火焰附近倒平板将灭过菌的培养皿放在桌面上，左手拔出棉塞右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙右手将锥形瓶中培养基倒入培养皿，左手立即盖上皿盖等待平板冷却510 s，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上A BC D解析：选A等培养基冷却至50 左右时，在酒精灯火焰附近倒平板，防止杂菌污染，错误；不能将灭过菌的培养皿放在桌面上，因为桌面上可能有杂菌，错误；右手拿锥
6、形瓶，使瓶口迅速通过火焰，高温可防止杂菌污染，正确；用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，而不能打开皿盖，正确；右手将锥形瓶中培养基倒入培养皿，左手立即盖上皿盖，并通过酒精灯火焰，正确；等待平板冷却510分钟，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上，错误。8苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如下图所示，为土壤样品。下列相关叙述错误的是()A图中培养目的菌株的选择培养基中应加入苯酚作为碳源B如果要测定中活细菌数量，常采用稀释涂布平板法
7、C若图中为对照实验，则其中应以苯酚作为唯一的碳源D使用平板划线法可以在上获得单菌落解析：选C培养能降解苯酚的微生物，培养基中应以苯酚为唯一碳源。测定培养液中细菌数目常采用稀释涂布平板法。若为对照实验，则中应含除苯酚外的其他碳源，以苯酚作为唯一碳源。使用稀释涂布平板法或平板划线法都可以在上获得单菌落。9关于土壤中细菌的分离，下列正确的操作步骤是()土壤取样称取10 g土壤，加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中吸取0.1 mL进行平板涂布依次稀释至101、102、103、104、105、106、107倍的稀释液A BC D解析：选C在分离土壤中某种细菌时，应先选取土样(10 g)，然后加无菌水获得土
8、壤浸出液，并进行不同倍数稀释，最后将稀释液涂布到培养基表面进行培养，并分离和计数。10下列关于微生物分离和培养的叙述，错误的是()A可采用干热灭菌法对微生物培养基进行灭菌B测定土壤样品中的细菌数目，常用菌落计数法C分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度D分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源解析：选A培养基灭菌通常用的是高压蒸汽灭菌法，而干热灭菌法通常适用于玻璃器皿、金属用具等耐高温且不适合其他方法的物品；分离能分解尿素的细菌，用的选择培养基里尿素是唯一的氮源，这样才能分离出分解尿素的细菌。二、非选择题11某些土壤细菌可将尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用。回答下列问
9、题：(1)有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生_。能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源，原因是_。但可用葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是_(答出两点即可)。(2)为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择_(填“尿素”“NH4NO3”或“尿素NH4NO3”)作为氮源，不选择其他两组的原因是_。(3)用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有_(答出两点即可)。解析：(1)土壤中的某些细菌之所以能够分解尿素，是因为它们能产生脲酶。尿素分解菌是异养生物，不能利用CO2来合成有机物，必须利用现成的有机物(如葡萄糖)作为碳
10、源；葡萄糖通过呼吸作用被分解时，能为细胞生命活动提供能量，同时，葡萄糖还可以转化成脂肪、某些氨基酸等物质，所以进入细菌体内的葡萄糖能为其他有机物的合成提供原料。(2)选择培养基是只允许特定种类的微生物(目的微生物)生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。本实验的目的菌是可分解尿素的细菌，因此，配制的培养基应只允许尿素分解菌生长，NH4NO3可以作为所有细菌的氮源，培养基中如含有NH4NO3，将不能起到筛选作用。(3)KH2PO4和Na2HPO4能为细菌生长提供钾盐、钠盐和磷酸盐，而H2PO/HPO可以使培养基中pH保持相对稳定。答案：(1)脲酶分解尿素的细菌是异养生物，不能利用CO2来
11、合成有机物为细胞生命活动提供能量，为其他有机物的合成提供原料(2)尿素其他两组都含有NH4NO3，能分解尿素的细菌和不能分解尿素的细菌都能利用NH4NO3，不能起到筛选作用(3)为细菌生长提供无机营养；作为缓冲剂保持细胞生长过程中pH稳定12(2019云浮质检)在肉牛产业中，常在饲料中加入一定量的尿素，因其有瘤胃，在瘤胃中生活着多种微生物，其中许多微生物以尿素作为唯一氮源。某同学设计了如下实验，对能分解尿素的细菌进行分离和计数。(1)图中弧线箭头上“？”的具体操作是_。(2)纯化菌种时为了得到单一菌落，常采用的接种方法是_。(3)在以尿素为唯一氮源的培养基中加入_，培养后，若出现_色，说明其中
12、含有能够分解尿素的细菌。 (4)在实验中，当菌落数目稳定时，应选取_法计数；研究者每隔24小时统计一次菌落数目，并选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以防止_。答案：(1)挑出菌落(2)平板划线法、稀释涂布平板法(3)酚红指示剂红(4)平板计数因培养时间不足导致遗漏细菌菌落数目13日前微博传言手机细菌比马桶多。如图，央视和北京卫视通过实验展示调查结果。回答下列相关问题：(1)该实验需制备_(填“固体”或“液体”)培养基，在液体培养基中加入_可配制成固体培养基。(2)据图，两电视台均采用_法接种，接种前需要采用_法对培养基进行灭菌。(3)通过观察菌落的_以初步鉴定手机屏幕和马桶按钮上的生物类
13、群。两电台实验操作均正确且完全一致，但报道结果截然不同，你认为原因是_。(4)按图操作取样面积，实验员测定某手机屏幕的细菌数量，将10 mL菌悬液进行梯度稀释，分别取0.1 mL稀释倍数为100倍的样品液接种到三个培养基上，培养一段时间后，统计菌落数分别为98、100、102，则该手机屏幕的细菌数为_个/cm2。该实验对照组要取培养基涂布_进行培养。答案：(1)固体琼脂(2)稀释涂布平板高压蒸汽灭菌(3)形状、大小、隆起程度和颜色等手机的取样和马桶的取样都不相同(4)41040.1 mL无菌水14苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中，对环境有严重危害。小明同学准备依据下图操作步骤，从处理废水的活
14、性污泥中分离筛选酚降解高效菌株。请回答下列问题：(1)酚降解菌富集培养基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水，其中可作为碳源的有_。(2)将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐_，以达到富集酚降解菌的目的。若上图平板中菌落过于密集，应进一步_，以便于菌落计数与分离。制备平板培养基时除了需要水、营养物质外，还必须添加_。(3)下图为连续划线法示意图，在图中_(填图中序号)区域更易获得单菌落。(4)采用比色测定法(使用苯酚显色剂)检测降解后的废水中苯酚残留量。先制作系列浓度梯度并进行显色反应，下表中15号比色管的苯酚浓度应分别为_。管号123456苯酚浓度(mg/L)1如
15、果废水为50 mg/L苯酚溶液，降解后约有21%的苯酚残留，则需将残留液稀释_(填序号：51020)倍后，再进行比色。解析：(1)富集培养基中蛋白胨、苯酚都是含C的有机物，可作为碳源。(2)欲富集酚降解菌，需随转接次数增加逐渐增加培养基中苯酚的含量；若接种培养后平板上菌落过于密集，则应进一步稀释后再进行涂布，以降低平板上菌落密度，便于菌落计数与分离；平板培养基是固体培养基，除含有水、营养物质(碳源、氮源、无机盐等)外，还需添加琼脂作为凝固剂。(3)利用连续划线法接种时，最后的划线区域()中，菌体的密度较小，容易获得单菌落。(4)因系列浓度梯度中6号比色管中苯酚浓度为1 mg/L，故15号比色管中的苯酚浓度应分别为0 mg/L、0.2 mg/L、0.4 mg/L、0.6 mg/L、0.8 mg/L；根据题意，废水为50 mg/L苯酚溶液，降解后约有21%的苯酚残留，要使稀释后的苯酚残留液浓度介于01 mg/L，需将残留液稀释20倍左右。答案：(1)蛋白胨、苯酚(2)增加稀释涂布凝固剂(3)(4)0、0.2、0.4、0.6、0.8