1、衡中作业(三十四)微生物的培养和利用1下列有关微生物培养与应用的说法，正确的是()A天然培养基是指直接取自自然界不需加工的培养基B接种前需对培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手等进行严格的灭菌处理C大肠杆菌的纯化培养过程包括培养基的配制和纯化大肠杆菌两个阶段D分离分解尿素的细菌时，尿素是培养基中唯一的氮源和碳源解析天然培养基是指用天然物质制成的培养基，但也需要加工；实验操作者的双手应消毒，不能灭菌；分离分解尿素的细菌时，尿素是培养基中唯一的氮源，不是碳源，需加入不含氮元素的有机物(如葡萄糖)作为碳源。答案C2平板划线法和稀释涂布平板法是接种微生物的两种常用方法，下列描述正确的是()A都要将
2、菌液进行一系列的梯度稀释B平板划线法是将不同稀释度的菌液通过接种环连续划在固体培养基表面C稀释涂布平板法是将不同稀释度的菌液倒入液体培养基中进行培养D都会在培养基表面形成单个的菌落解析平板划线法不需要进行梯度稀释，稀释涂布平板法需要将不同稀释度的菌液涂布到固体培养基的表面。平板划线法和稀释涂布平板法都能在培养基表面形成单个的菌落。答案D3下列关于“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验的叙述，错误的是()A土壤取样时应选取距地表约38 cm的土壤层B测定细菌的数量，一般选用104、105和106倍的稀释液C土壤中能合成脲酶的细菌能分解尿素D向以尿素为唯一氮源的培养基中加入刚果红溶液可以鉴定出分
3、解尿素的细菌解析测定细菌数量，一般选用104、105和106倍稀释液进行平板培养；测定真菌的数量，一般选用102、103和104倍稀释液；测定放线菌的数量，一般选用103、104和105倍稀释液。鉴定分解尿素的细菌时需向以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。答案D4做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述正确的是()A高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖B倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上C为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落D用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上解析在高压灭菌的操作过程中，加热结束后应让灭菌锅内温度自然下降，
4、待压力表的指针指到零时，打开放气阀，旋松螺栓，打开盖子。倒平板时，用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，而不是完全取下放到一边。接种环经火焰灼烧灭菌后应在火焰旁冷却后，再用其挑取菌落。在微生物的培养中，一般将培养皿倒置，在皿底上用记号笔做标记。答案D5某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。下列叙述正确的是()A培养基分装到培养皿后进行灭菌B转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线C接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养D培养过程中每隔一周观察一次解析培养基灭菌后再分装到培养皿中；转换划线角度后要灼烧接种环，冷却后再从上次划线的末端开始进行划线；接种后的培养皿必须放在恒温箱中进行培养；培养过
5、程中一般每隔12 h或24 h观察一次。答案B6某实验小组欲从豆油污染的土壤中筛选出高效降解脂肪的菌株。请回答：(1)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以_为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于_培养基。(2)为避免培养基污染，需将培养皿呈_状态放置。为避免培养液中菌体浓度过高，需将培养液进行_处理。为了排除_，需设置接种等量无菌水的培养基作为空白对照。(3)为了筛选出菌株，可将适量的_试剂滴加在平板中的菌落周围，洗去浮色后，如果菌落周围的现象是_，则说明此种菌能够分泌脂肪酶。(4)纯化菌种时，为了得到菌落，可采用_法接种于新的培养基平板上。(5)实验操作应在酒精灯火焰附近进行
6、的原因：_。解析(1)欲筛选出能降解豆油的菌株，培养基中应只含有豆油而无其他碳源，不能降解豆油的细菌在此培养基上不能生存，从功能上讲，这类培养基属于选择培养基。(2)为避免培养皿污染，需将培养皿呈倒置状态放置。为避免培养液中菌体浓度过高，需将培养液进行梯度稀释处理。为了排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，需设置接种等量无菌水的培养基作为空白对照。(3)由于脂肪遇苏丹试剂会出现红色，所以为了筛选出菌株，可将适量的苏丹试剂滴加在平板中的菌落周围，洗去浮色后，如果菌落周围的现象是出现透明圈、不出现红色圈，则说明此种菌能够分泌脂肪酶。(4)分离纯化菌种时，需采用平板划线法接种于新的培养基以得到单菌
7、落。(5)实验操作应在酒精灯火焰附近进行，从而避免周围环境中微生物的污染。答案(1)豆油选择(2)倒置系列稀释(或梯度稀释)实验组中非测试因素对实验结果的影响(培养基被污染)(3)苏丹(或苏丹)出现透明圈(不出现红色圈或橘黄色圈)(4)平板划线(5)避免周围环境中微生物的污染7利用微生物转化胆固醇在医药生产上有重要作用。实验人员从土壤中筛选胆固醇转化菌株的过程如图所示。请分析回答下列问题：(1)实验人员将土壤样品接种到富集培养液中培养时，需要将其置于摇床上不断振荡，其主要的作用有_。(2)培养一段时间后，从中取适量培养液转移接种到选择培养液中培养36 h后，再转移到相同的选择培养液中培养。与培
8、养液不同，培养液成分的主要特点是_。在相同的培养液中转移培养主要是为了避免原培养液中_的干扰，同时，又可以_。(3)从中取适量的培养液涂布到之前，需要_，涂布前需将涂布器_。(4)根据中菌落的形态特征，选取所需的菌种接种到_培养基中临时保藏。解析(1)分解胆固醇的微生物属于需氧型微生物，所以将土壤样品接种到富集培养液中培养时，需要将其置于摇床上不断振荡以增加溶解氧。(2)据图分析，培养液的作用是选择培养，筛选胆固醇转化菌株需要使用以胆固醇为唯一碳源的选择培养基。在相同的培养液中转移培养主要是为了避免原培养液中碳源的干扰，又可以筛选纯化获得可转化胆固醇的菌种。(3)选择培养后的培养液需要进行梯度
9、稀释才能进行涂布培养，涂布前需将涂布器在酒精灯火焰上进行灼烧灭菌并冷却。(4)筛选出目的菌株后，将菌种接种到培养基中临时斜面保藏。答案(1)增加溶解氧(2)以胆固醇为唯一碳源碳源筛选纯化获得可转化胆固醇的菌种(3)梯度稀释灼烧并冷却(4)斜面8莠去津是一种含氮农药，在土壤中不易降解，为修复被其污染的土壤，可按下面程序选育能降解莠去津的细菌(目的菌)。请据图回答：(已知莠去津在水中溶解度低，含过量莠去津的固体培养基不透明)(1)由图推断，从A瓶到C瓶液体培养的过程称为_，目的是_。(2)在将C瓶菌种接种到固体培养基之前通常要进行_，将菌种接种到固体培养基的方法有平板划线法和_法，从图中看本实验采
10、用的是_(填“前者”或“后者”)。(3)一段时间后，培养基出现无透明圈和有透明圈两种菌落，我们筛选的目的菌是_菌落中的细菌，该菌落生长所需的氮元素主要来源于_。(4)为弄清固体培养基中的非目的菌来自C瓶菌种还是培养基，应如何设置对照组？_。解析(1)图中从A瓶到C瓶液体培养过程为选择培养，目的是初步选择能降解莠去津的细菌(目的菌)并增加其数量。(2)将菌种接种到固体培养基的方法有平板划线法和稀释涂布平板法两种，由图中固体培养基上的菌落分布比较均匀可知，该接种方法是稀释涂布平板法，包括梯度稀释操作和涂布平板操作。(3)根据题目信息“莠去津在水中溶解度低，含过量莠去津的固体培养基不透明”可知，能够
11、降解莠去津的目的菌分解莠去津，使菌落周围出现透明圈，因此可以选择菌落周围存在透明圈的细菌。由于培养基中只有莠去津一种氮源，因此分解莠去津的微生物所需的氮源主要由莠去津提供。(4)为弄清固体培养基中的非目的菌来自C瓶菌种还是培养基，应设置灭菌后不接种菌种的空白培养基，与实验组放在相同条件下培养，若培养基上无菌落出现，则非目的菌一定来自C瓶菌种，若培养基上出现菌落，则说明非目的菌可能来自培养基。答案(1)选择培养初步选择能降解莠去津的细菌(目的菌)并增加其数量(2)梯度稀释稀释涂布平板后者(3)有透明圈莠去津(4)配制的培养基灭菌后不接种菌种，与实验组放在相同条件下培养9某污水池中含有一种有害的、
12、难于降解的有机化合物A。现有研究人员欲探究污水净化处理的方案，进行了如图所示的实验，请据图回答下列问题：(1)在进行初选时，将污泥样品接种于以_为唯一碳源的固体培养基上；在利用锥形瓶进行培养时，需要振荡培养，因此可推测“目的菌”的细胞呼吸方式为_。(2)在接种前需要对培养基进行灭菌处理，常用的灭菌方法是_；而在接种时利用的无菌技术要求实验操作应在_附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。(3)纯化菌种时，为了获得单菌落，常采用的接种方法有_和_；接种后应将培养基进行_(填“正放”或“倒置”)培养。(4)培养若干天后，应将有机化合物A含量较_的培养液转移至新的培养液中进行连续培养；转移至新培养液
13、中培养的目的是使“目的菌”的数量_；在实验结束时，将使用过的培养基进行_处理后才能倒掉。解析(1)本实验的目的是选择出能分解有机化合物A的微生物，因此，在初选时，选择培养基中的唯一碳源应该是有机化合物A；在培养时进行振荡处理，说明“目的菌”应该是需氧型的，其细胞呼吸方式为有氧呼吸。(4)本实验的目的是选择出能分解有机化合物A的微生物，因此应选择有机化合物A含量少的锥形瓶，该锥形瓶中分解有机化合物A的微生物应多于其他瓶中的；转移至新的培养液中，是为了给“目的菌”提供更多的营养、更好的生存环境，从而增加“目的菌”的数量；在实验结束后，使用过的培养基中仍有微生物残留，因此需要进行灭菌处理。答案(1)
14、有机化合物A有氧呼吸(2)高压蒸汽灭菌法酒精灯火焰(3)平板划线法稀释涂布平板法倒置(4)少增加灭菌10醋酸菌是食品工业中常用的微生物，不仅可用于生产醋酸，某些类型还可用于生产细菌纤维素。回答下列问题：(1)醋酸菌在缺少糖源的情况下，可将乙醇氧化为_，进而生成醋酸。进行醋酸发酵时，为了维持醋酸发酵培养液pH的相对稳定，可向培养液中加入_。(2)筛选接种时，为了避免环境中微生物的污染，实验操作应在_附近进行；某同学采用平板划线法进行接种，在适宜条件下培养一段时间后，发现一个培养皿中某部位的菌落分布呈沟槽状，与其他部位的菌落分布有明显差异，其原因最可能是划线时该部位_。(3)鉴定菌种的依据通常包括
15、菌落的形状、大小、_等菌落特征。将鉴定的菌种进行临时保存时，可在低温下使用试管斜面保存，但该方法除保存时间短外，菌种还易_；若需较长时间保存菌种，可用的方法是_。(4)利用筛选出的优质菌种进行生产时，研究人员测得培养过程中的细菌纤维素产量、培养液中的残糖量和残氮量。如图所示，图中代表培养液中残氮量的是_曲线。与B曲线相比，A曲线下降更快的主要原因是_。解析(1)醋酸菌在缺少糖源的情况下，可将乙醇氧化为乙醛，进而生成醋酸。醋酸发酵时，可向培养液中加入缓冲物质来维持培养液pH的相对稳定。(2)为避免环境中微生物的污染，筛选接种时应在酒精灯火焰附近进行；平板划线法接种后，培养皿中的菌落分布呈沟槽状，最可能是划线时培养基表面被划破所致。(3)通常通过菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等菌落特征鉴定菌种。低温下试管斜面保存菌种时，保存时间短，且菌种易被污染或产生变异，甘油管藏可较长时间保存菌种。(4)由题图曲线可知，培养过程中的细菌纤维素产量逐渐升高，而合成纤维素需要大量糖源，故培养液中残糖量下降较快，如曲线A所示，曲线B表示残氮量的变化。答案(1)乙醛缓冲物质(2)酒精灯火焰培养基表面被划破(3)隆起程度和颜色被污染或产生变异甘油管藏(4)B该细菌合成纤维素需要大量糖源