1、助 学 园 地助 考 园地专 题 整 合助 学 园 地助 考 园地助 学 园 地助 考 园地常见的消毒灭菌方法归纳方 法操作过程应用范围煮沸消毒法100 煮沸56 min日常生活中广泛使用巴氏消毒法在7075 煮30 min或在80 煮15 min牛奶、啤酒、果酒和酱油等不宜进行高温消毒的液体化学药物消毒法用体积分数为70%75%的乙醇、碘酒涂抹，来苏水喷洒等用于皮肤、伤口、动植物组织表面消毒，空气、手术器械、塑料或玻璃器皿等助 学 园 地助 考 园地紫外线消毒法30 W紫外灯照射30 min接种室空间消毒灼烧灭菌法酒精灯火焰灼烧微生物接种工具如接种环、接种针或其他金属用具等，接种过程中试管口
2、或锥形瓶口等干热灭菌法干热灭菌箱160170 加热12 h玻璃器皿(如吸管、培养皿等)、金属用具等凡不适宜用其他方法灭菌而又能耐高温的物品高压蒸汽灭菌法 100 kPa、121 维持1530 min培养基及多种器材、物品助 学 园 地助 考 园地尿素分解菌和纤维素分解菌的分离与鉴定比较项目内容 尿素分解菌纤维素分解菌条件尿素为唯一氮源纤维素为唯一碳源鉴定方法及现象培养基中加入酚红指示剂，变红色在培养基上应用刚果红染色法，出现透明圈鉴定原理细菌等微生物生成脲酶，使尿素中肽键断裂产生NH3，使pH升高，加入酚红变红色微生物产生纤维素酶，将纤维素分解为纤维二糖或葡萄糖，使纤维素刚果红复合物降解而出现
3、透明圈助 学 园 地助 考 园地步骤差异土壤取样制备培养基样品梯度稀释涂布平板培养观察土壤取样制备培养基选择培养梯度稀释涂布培养刚果红染色挑取菌落进一步鉴定助 学 园 地助 考 园地自养微生物和异养微生物的营养比较微生物营养型碳源氮源生长因子举例自养型微生物CO2、NaHCO3NH3、铵盐硝酸盐等一般需要不硝化细菌异养型微生物 糖类、脂肪酸等铵盐、硝酸盐、蛋白质等有些种类需要乳酸菌助 学 园 地助 考 园地【典例1】下表是微生物培养基的成分。下列有关说法错误的是()。A.此培养基可用来培养自养型生物B此表中的营养成分共有三类，即水、无机盐、氮源C若除去，此培养基可培养圆褐固氮菌D培养基若加入氨
4、基酸，则它可充当碳源、氮源和生长因子编号成分(NH4)2SO4 KH2PO4 FeSO4 CaCl2H2O含量/g0.44.00.50.5100 mL助 学 园 地助 考 园地解析由题知，该培养基成分中含有水、无机盐、氮源，但不含含碳有机物，可用来培养自养型微生物，选项A、B均对；圆褐固氮菌同化类型为异养型，培养基中必须含含碳有机物，所以该培养基不能用来培养圆褐固氮菌，C错。答案 C助 学 园 地助 考 园地区分选择培养基与鉴别培养基概念用途实例选择培养基培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长培养、分离出特定的微生物培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入青霉
5、素；培养金黄色葡萄球菌，可在培养基中加入高浓度的食盐鉴别培养基根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品鉴别不同种类的微生物用伊红美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌(若有，菌落呈深紫色，并带有金属光泽)助 学 园 地助 考 园地【典例2】(2011郑州质检)请回答下列与大肠杆菌有关的问题。(1)从生态系统的成分上看，大肠杆菌属于_，它的同化作用类型是_。(2)下表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的培养基配方。成分含量/g蛋白胨10.0乳糖5.0蔗糖5.0K2HPO42.0显色剂0.2琼脂12.0溶质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL助 学 园 地助 考 园地根据用
6、途划分该培养基属于_(选择、鉴别)培养基。该培养基中的碳源是_。(3)在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行_(消毒、灭菌)，操作者的双手需要进行清洗和_。静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能_。通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的_。培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是_。若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过_处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。助 学 园 地助 考 园地解析(1)从生态系统的成分上看，大肠杆菌属于分解者，其同化作用类型是异
7、养型。(2)由于该培养基中含有显色剂，属于鉴别培养基；该培养基中的碳源是乳糖、蔗糖、蛋白胨。(3)注意灭菌和消毒的区别，在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行灭菌，操作者的双手需要进行清洗和消毒；紫外线不仅能使蛋白质变性，还能损伤DNA的结构；对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的鉴定(分类)；对于固体培养基应采用的检测方法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生；使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。助 学 园 地助 考 园地答案(1)分解者 异养型(2)鉴别 乳糖、蔗糖、
8、蛋白胨(3)灭菌 消毒 损伤DNA的结构 鉴定(分类)将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生 灭菌助 学 园 地助 考 园地【例1】(2012北京理综，5)高中生物学实验中，在接种时不进行严格无菌操作对实验结果影响最大的一项是()。A将少许干酵母加入到新鲜的葡萄汁中B将毛霉菌液接种在切成小块的鲜豆腐上C将转基因植物叶片接种到无菌培养基上D将土壤浸出液涂布在无菌的选择培养基上助 学 园 地助 考 园地解析本题主要考查几种常见生物学实验对无菌操作的要求。生产果酒和腐乳时对无菌的要求不是很高，接种不需要进行严格的无菌操作；土壤浸出液中含有多种杂菌，所以利用选择培养基
9、筛选土壤浸出液中特定微生物时，不进行严格无菌操作也不会影响实验结果；植物组织培养技术成功的关键是无菌条件，若接种时不进行严格无菌操作将可能导致实验失败，故C项符合题意。答案 C助 学 园 地助 考 园地助 学 园 地助 考 园地(2)下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是_灭菌。A高压蒸汽 B紫外灯照射C体积分数为70%酒精浸泡D过滤(3)步骤X表示_。在无菌条件下操作时，先将菌液稀释，然后将菌液_到培养基平面上。菌液稀释的目的是为了获得_菌落。(4)在培养时，需将培养皿倒置并放在_中。若不倒置培养，将导致_。(5)临床上用14C呼气试验检测人体是否感染Hp，其基本原理是Hp能将14C标记的_分解
10、为NH3和14CO2。助 学 园 地助 考 园地解析(1)幽门螺杆菌(Hp)含有脲酶，能以尿素为氮源，在加入尿素和酚红指示剂的培养基中培养Hp，由于尿素经脲酶的降解可产生碱性的NH3，NH3能使培养基中的酚红由红黄色变成红色，故菌落周围会出现红色环带。(2)由于尿素加热会分解，对尿素溶液进行灭菌最好用G6玻璃砂漏斗过滤。(3)微生物的分离和培养步骤是：配制培养基灭菌、倒平板接种培养。为获得单菌落，接种操作前应先将菌液稀释，然后将菌液涂布到培养基平面上即可。助 学 园 地助 考 园地(4)微生物培养时需将培养皿倒置并放在恒温培养箱中，若不倒置培养，则无法形成单菌落。(5)幽门螺杆菌能将14C标记的尿素分解为NH3和14CO2，故临床上常用14C呼气试验检测人体内幽门螺杆菌的存在。答案(1)脲酶红(2)D(3)接种涂布单(4)恒温培养箱无法形成单菌落(5)尿素助 学 园 地助 考 园地考情分析：微生物的利用在生物技术实践中占有比较重要的地位，包括微生物的分离和培养技术、特定微生物的数量的测定、培养基对微生物的选择作用和微生物的实验室培养等内容。近年课标试题中，对微生物的纯化培养操作与应用考查最为突出，共出现8次，如2011课标卷39题、2010山东理综34题等。
