1、题组层级快练(四十一)1(2013海南)单纯疱疹病毒型(HSV)可引起水疱性口唇炎。利用杂交瘤技术制备出抗HSV的单克隆抗体可快速检测HSV。回答下列问题：(1)在制备抗HSV的单克隆抗体的过程中，先给小鼠注射一种纯化的HSV蛋白，一段时间后，若小鼠血清中抗_的抗体检测呈阳性，说明小鼠体内产生了_反应，再从小鼠的_中获取B淋巴细胞。将该B淋巴细胞与小鼠的_细胞融合，再经过筛选、检测，最终可获得所需的杂交瘤细胞，该细胞具有的特点是_。(2)若要大量制备抗该蛋白的单克隆抗体，可将该杂交瘤细胞注射到小鼠的_中使其增殖，再从_中提取、纯化获得。(3)通过上述方法得到的单克隆抗体可准确地识别这种HSV蛋
2、白，其原因是该抗体具有_和_等特性。解析(1)由题意可知，单纯疱疹病毒型可引起水疱性口唇炎，病毒蛋白HSV可以作为一种抗原刺激机体通过免疫反应产生特异性抗体。在单克隆抗体的制备过程中，首先应注射纯化的HSV蛋白作为抗原，一段时间后对小鼠血清进行检测，如果抗HSV蛋白的抗体检测为阳性，说明小鼠体内通过体液免疫产生了特异性抗体。此时可以从小鼠的免疫器官中，如脾脏、骨髓、淋巴结等部位获取已免疫的B淋巴细胞，与小鼠的骨髓瘤细胞融合，经过筛选检测获得能稳定的产生特异性抗体的杂交瘤细胞。已免疫的B淋巴细胞具有产生特异性抗体的特点，而骨髓瘤细胞能无限增殖，因此获得的杂交瘤细胞具有既能无限增殖又能产生特异性抗
3、体(抗HSV蛋白的抗体)的特点。(2)获得大量单克隆抗体的途径有两条：体外培养和体内培养。体外培养即通过动物细胞培养技术获得大量的杂交瘤细胞，进而产生大量的单克隆抗体；体内培养即将杂交瘤细胞注射到小鼠的腹腔中增殖，最后从小鼠的腹水中提取、纯化单克隆抗体。(3)单克隆抗体是通过细胞融合技术将单一的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合而获得的，因此融合后的细胞只能产生一种特异性抗体，所制备的单克隆抗体具有特异性强，灵敏度高的特点。答案(1)HSV蛋白体液免疫脾脏骨髓瘤无限增殖且产生专一抗体(2)腹腔腹水(3)纯度高(灵敏度高)特异性强2(2015山东)治疗性克隆对解决供体器官缺乏和器官移植后免疫排斥反应具有
4、重要意义。流程如下：(1)过程采用的是细胞工程中的_技术，过程采用的是胚胎工程中的_技术。(2)体细胞进行体外培养时，所需气体主要有O2和CO2，其中CO2的作用是维持培养液(基)的_。(3)如果克隆过程中需进行基因改造，在构建基因表达载体(重组载体)时必须使用_和_两种工具酶。基因表达载体上除目的基因外，还需有_基因，以便选出成功导入基因表达载体的细胞。(4)胚胎干细胞可以来自于囊胚中的_。在一定条件下，胚胎干细胞可以分化形成不同的组织器官。若将图中获得的组织器官移植给个体_(填“A”或“B”)，则不会发生免疫排斥反应。解析(1)图中过程采用体细胞核移植技术；过程为重组细胞经胚胎培养发育至早
5、期胚胎的过程，利用了(早期)胚胎培养技术。(2)动物细胞培养时，气体环境为95%的空气和5%的CO2，CO2作用是维持培养液的pH。(3)构建基因表达载体时，需用的工具酶为限制酶和DNA连接酶。基因表达载体上除目的基因外，还需要有标记基因、启动子、终止子等。标记基因的作用是鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。(4)囊胚中的内细胞团具有发育的全能性，可以作为胚胎干细胞的来源。通过核移植技术获得的组织器官若移植给核供体，则不会发生免疫排斥反应。答案(1)(体细胞)核移植(早期)胚胎培养(2)pH(或：酸碱度)(3)限制性核酸内切酶(或：限制酶)DNA连接酶(注：两空可
6、颠倒)标记(4)内细胞团B3科学家从某无限增殖的细胞中分离出无限增殖调控基因(prG)，该基因能激发细胞分裂，这为单克隆抗体的制备提供了更为广阔的前景。请回答下列问题：(1)利用_技术制备单克隆抗体，常用聚乙二醇、_、电激等诱导因素诱导细胞融合。再经多次筛选和细胞培养获得足够数量的能分泌所需抗体的_细胞。(2)有人提出用核移植技术构建重组细胞来生产单克隆抗体，请完成设计方案：取_细胞的细胞核，移植到去核的能够_的细胞中，构成重组细胞。(假定移植后细胞核中基因的表达状态不受影响)。将重组细胞在_条件下做大规模培养或注射到小鼠_内增殖，以获得大量单克隆抗体。(3)也有人提出，可以直接通过基因工程导
7、入该调控基因(prG)来制备单克隆抗体，其思路如图所示。酶A是指_，酶B是指_。图中表示_，对进行检测与鉴定的目的是_，具有的特点是_。解析(1)在利用动物细胞融合技术制备单克隆抗体的过程中，常用聚乙二醇、灭活的病毒、电激等方法诱导细胞融合，融合后的细胞经多次筛选和细胞培养，最终获得足够数量的能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。(2)产生单克隆抗体的细胞应具有两个特点：能无限增殖和产生特定抗体。若用核移植技术构建重组细胞首先取经特定抗原刺激的B淋巴细胞的细胞核，移植到去核的能够无限增殖的细胞中，构成重组细胞；然后将重组细胞进行动物细胞培养或注射到小鼠腹腔内增殖，以获得大量单克隆抗体。(3)基因工程中第
8、一步获取目的基因；第二步用限制性核酸内切酶和DNA连接酶处理供体DNA和质粒，获取基因表达载体(重组质粒)；第三步将重组质粒导入受体细胞；第四步检测目的基因是否导入和表达。答案(1)动物细胞融合灭活的病毒杂交瘤(2)经特定抗原刺激的B淋巴无限增殖体外腹腔(3)限制性核酸内切酶DNA连接酶目的基因(无限增殖调控基因或prG)检测目的基因是否导入和是否表达既能无限增殖，又能产生特定抗体4DHA对脑神经发育至关重要。以A、B两种单细胞真核藻为亲本，利用细胞融合技术选育高产DHA融合藻。两种藻特性如下表：亲本藻优势代谢类型生长速率(g/L天)固体培养基上藻落直径DHA含量()A藻自养0.06小0.7B
9、藻异养0.14大无据表回答：(1)选育的融合藻应具有A藻_与B藻_的优点。(2)诱导融合前需用纤维素酶处理两种藻，其目的是获得_。(3)通过以下三步筛选融合藻，步骤_可淘汰B藻，步骤_可淘汰生长速率较慢的藻落，再通过步骤_获取生产所需的融合藻。步骤a：观察藻落的大小步骤b：用不含有机碳源(碳源生物生长的碳素来源)的培养基进行光照培养步骤c：测定DHA含量(4)以获得的融合藻为材料进行甲、乙、丙三组试验，结果如下图。甲组条件下，融合藻产生H的细胞器是_；丙组条件下产生ATP的细胞器是_。与甲、丙两组相比，乙组融合藻生长速率较快，原因是在该培养条件下_甲、乙两组DHA产量均较高，但实际生产中往往采
10、用甲组的培养条件，其原因是_。解析(1)从题表中可以看到，A藻是自养型生物，能产生DHA，B藻生长快，故融合藻应具有这两种藻的优点。(2)植物细胞融合前需用纤维素酶处理，去掉细胞壁，得到原生质体。(3)由于B藻是异养型生物，自己不能制造有机物，在不含有机碳源的培养基上不能生存，可通过步骤b淘汰B藻；生长慢的A藻藻落小，可通过步骤a淘汰生长慢的藻落；通过测定剩余藻落的DHA含量，来筛选出高产的融合藻。(4)甲组是光照条件，线粒体进行细胞呼吸可产生H，叶绿体内进行光合作用也可产生H；丙组是黑暗条件，细胞只进行细胞呼吸，能合成ATP的细胞器是线粒体。乙组培养条件既提供光照条件又提供葡萄糖，融合藻可利
11、用光能自养，也可利用葡萄糖异养，故其生长较快。甲组培养条件不添加有机物，只提供无机物，利用此条件培养融合藻，可降低成本，也可防止异养型杂菌感染，故实际生产中常采用甲组培养条件。答案(1)可产生DHA、自养特性 快速生长(2)原生质体 (3)b a c(4)线粒体、叶绿体线粒体 融合藻既能利用光能自养又能利用葡萄糖异养 融合藻利用光能和简单的无机物就能生长，不需添加葡萄糖，可降低成本，也可防止杂菌生长52012年诺贝尔生理学或医学奖授予两位在细胞核重编程领域有重大贡献的科学家。科学家把cMyc等4个关键基因通过逆转录病毒载体转入小鼠的成纤维细胞，使其变成诱导多能干细胞iPS细胞，这意味着未成熟的
12、细胞能够发展成所有类型的细胞。(1)基因工程中经常使用的工具酶是_，常用的载体除了动植物病毒外还有_和_。(2)若想增强载体病毒颗粒的感染性，可利用_技术改造病毒外壳蛋白，直接对_进行操作。(3)应用_技术得到重组细胞，激活重组细胞发育成早期胚胎，使用从_中获得的胚胎干细胞，在培养中根据需要加入相应的小分子物质以促进其_得到各种组织器官，用于治疗某些疾病，这种技术称为_。(4)iPS细胞的获得不使用胚胎细胞或卵细胞，也不诱导发育成个体，因此不会像生殖性克隆一样引发_问题。(5)iPS细胞在体外已成功地被诱导分化为神经元细胞、神经胶质细胞、心血管细胞和原始生殖细胞等，究其本质原因是基因_的结果。
13、解析(1)基因工程中经常用到的是基因的“剪刀”和“针线”即限制酶和DNA连接酶，常用的运载体有质粒、噬菌体衍生物和动、植物病毒。(2)改造蛋白质的是蛋白质工程，可以通过对基因修饰或基因合成对现有蛋白质进行改造或制造一种新的蛋白质。(3)重组细胞必须运用核移植技术，可以从早期胚胎或原始性腺获得胚胎干细胞，诱导其实现定向分化，这种为治疗疾病进行的克隆称为治疗性克隆。(4)反对生殖性克隆的原因主要是会引发伦理问题。(5)细胞分化的实质是基因的选择性表达。答案(1)限制酶和DNA连接酶质粒噬菌体的衍生物(2)蛋白质工程基因(3)核移植早期胚胎或原始性腺定向分化治疗性克隆(4)伦理(5)选择性表达6某研
14、究小组进行药物试验时，以动物肝细胞为材料，测定药物对体外培养细胞的毒性。供培养的细胞有甲、乙两种，甲细胞为肝肿瘤细胞，乙细胞为正常肝细胞。请回答下列有关动物细胞培养的问题：(1)将数量相等的甲细胞和乙细胞分别置于培养瓶中培养，培养液及其他培养条件均相同。一段时间后，观察到甲细胞数量比乙细胞数量_。(2)细胞培养应在含5%CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用是_。(3)在两种细胞生长过程中，当乙细胞铺满瓶壁时，其生长_。药物试验需要大量细胞，两种细胞频繁传代，甲细胞比乙细胞可以传代的次数更_。若用动物的肝脏组织块制备肝细胞悬液，需用_消化处理。(4)已知癌基因X过量表达与肝肿瘤的发生密切相关，
15、要试验一种抗肿瘤药物Y对甲细胞生长的影响，可将甲细胞分为A、B两组，A组细胞培养液中加入_，B组细胞培养液中加入无菌生理盐水，经培养后，从A、B两组收集等量细胞，通过分别检测X基因在A、B两组细胞中的_或_合成水平的差异，确定Y的药效。解析(1)将数量相等的甲细胞和乙细胞分别置于培养瓶中培养，培养液及其他培养条件均相同。一段时间后，观察到甲细胞数量比乙细胞数量多，因为甲细胞有很强的分裂能力。(2)细胞培养应在含5%CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用是维持培养液pH。(3)在两种细胞生长过程中，当乙细胞铺满瓶壁时，其生长停止，正常细胞有接触抑制现象。药物试验需要大量细胞，两种细胞频繁传代，甲
16、细胞比乙细胞可以传代的次数更多。若用动物的肝脏组织块制备肝细胞悬液，需用胰蛋白酶或胶原蛋白酶消化处理。(4)已知癌基因X过量表达与肝肿瘤的发生密切相关，要试验一种抗肿瘤药物Y对甲细胞生长的影响，可将甲细胞分为A、B两组，A组细胞培养液中加入Y，B组细胞培养液中加入无菌生理盐水，保证单一变量。经培养后，从A、B两组收集等量细胞，通过分别检测X基因在A、B两组细胞中的mRNA或蛋白质合成水平的差异，确定Y的药效。答案(1)多(2)维持培养液pH(3)停止多胰蛋白酶(4)YmRNA蛋白质7下图表示利用胚胎干细胞获得转基因小鼠的流程。请回答下列问题：(1)过程所培养的细胞应取自囊胚的_。(2)过程中，
17、提取的DNA在水浴加热的条件下需用_试剂鉴定，基因转入前需要先构建_，其目的是_。(3)过程称为_。由于动物细胞生活的内环境还有一些成分尚未研究清楚，所以需要加入_。(4)过程所使用的是_技术，进行该操作前需要对受体雌鼠进行_。解析(1)胚胎干细胞是从早期胚胎或原始性腺中分离出来的一类细胞，如囊胚的内细胞团细胞。(2)DNA分子在水浴加热条件下需用二苯胺试剂鉴定，基因转入受体细胞前需先构建基因表达载体，其目的是使基因在受体细胞中稳定存在并表达。(3)过程是少量单个细胞经动物细胞培养(或早期胚胎培养)形成早期胚胎的过程；由于动物细胞生活的内环境还有一些成分尚未研究清楚，所以需要加入动物血清。(4
18、)过程表示胚胎移植，在该操作前为使受体生理环境适宜，需对受体雌鼠进行同期发情处理。答案(1)内细胞团(2)二苯胺基因表达载体使目的基因在受体细胞中稳定存在并表达(3)动物细胞培养(早期胚胎培养)动物血清(4)胚胎移植同期发情处理8(2015安徽)科研人员采用转基因体细胞克隆技术获得转基因绵羊，以便通过乳腺生物反应器生产人凝血因子医用蛋白，其技术路线如图。(1)由过程获得的A为_。(2)在核移植之前，必须先去掉受体卵母细胞的核，目的是_。受体应选用_期卵母细胞。(3)进行胚胎移植时，代孕母羊对移入子宫的重组胚胎基本上不发生_，这为重组胚胎在代孕母羊体内的存活提供了可能。(4)采用胎儿成纤维细胞进
19、行转基因体细胞克隆，理论上可获得无限个转基因绵羊，这是因为_。解析(1)根据题意可知，要将人凝血因子IX基因导入绵羊胎儿成纤维细胞，必须构建基因表达载体，所以由过程获得的A为基因表达载体。(2)为保证核遗传物质来自含目的基因的成纤维细胞，在核移植之前，必须先去掉受体卵母细胞的核。受体应选用减数第二次分裂中(M中)期的卵母细胞。(3)进行胚胎移植时，代孕母羊对移入子宫的重组胚胎基本上不发生免疫排斥反应，这为重组胚胎在代孕母羊体内的存活提供了可能。(4)采用胎儿成纤维细胞进行转基因体细胞克隆，理论上可获得无限个转基因绵羊，这是因为整合有目的基因的成纤维细胞可进行传代培养。答案(1)含目的基因的表达载体(2)保证核遗传物质来自含目的基因的成纤维细胞M中(减中期)(减数第二次分裂中期)(3)免疫排斥反应(4)整合有目的基因的成纤维细胞可进行传代培养