1、课题课题2 2 月季的花药培养月季的花药培养专题3 植物的组织培养技术专题3 植物的组织培养生物选修1花的结构课题背景植物的花药培养在育种上有什么意义？花粉粒（1N）单倍体植株（1N）二倍体纯合子植株（2N）缩短了育种周期，为新品种的培育开辟了新途径。一、被子植物的花粉发育花粉：花丝花药雄蕊囊状结构，内有很多花粉粒雄蕊花粉囊当花粉囊的壁组织逐步发育分化时，会形成大量的花粉母细胞（小孢子母细胞）。花粉花粉粒是由花粉母细胞经过减数分裂而形成，因此，花粉粒是单倍体的生殖细胞。被子植物花粉的发育要经历：四分体时期、单核期和双核期等阶段。花粉发育花药横切花粉囊小孢子母细胞 1 个小孢子单核居中期 1 个
2、小孢子单核靠边期 4 个小孢子减数分裂有丝分裂花粉管细胞核生 殖细胞核萌发有丝分裂花粉管2 个精子小孢子母细胞花粉母细胞小孢子减数分裂有丝分裂花粉管细胞核生殖细胞核有分丝裂精子1个营养细胞生殖细胞4个4个4个4个4个8个（小孢子四分体时期单核居中期单核靠边期双核期）花粉粒类型一个成熟的花粉粒即为雄配子体，有两种情况：成熟的花粉粒中，只含花粉管细胞核和生殖细胞核。（精子在花粉管中形成）有些植物的花粉，在成熟前，生殖细胞进行一次有丝分裂，形成两个精子，这样的花粉在成熟时，含有一个营养核和两个精子。二核花粉粒:三核花粉粒:被子植物的雌蕊二、产生花粉植株的两种途径快速阅读P38页有哪两种途径？原因是什
3、么？花药胚状体愈伤组织丛芽生根植株abcde1形成原因：主要取决于培养基中种类及其浓度配比。2植株的特点：植株，植株弱小，。激素单倍体高度不育1.为什么胚状体和愈伤组织到丛芽分别称为分化和再分化？思 考2.花粉植株弱小，高度不育，是否就没有利用价值？用于单倍体育种技术，可明显缩短育种周期，培育纯合新品种。胚状体就像种子，有胚芽、胚轴、胚根等结构。胚状体到丛芽就是由原始的分化状态继续生长和分化完成的。而愈伤组织形成丛芽的过程是从脱分化状态进入再分化形成丛芽的过程。三、影响花药培养的因素阅读P38-39思考：诱导花粉植株能否成功及成功率的高低，主要影响因素是和。培养基的组成使用顺序脱分化培养基：M
4、S培养基加入2,4-D、KIN、IAA生芽培养基:MS培养基加入GA、IBA生根培养基：MS培养基各成分用量减半，添加IAA顺序：先用脱分化再用生芽培养基然后用生根培养基培养基的组成材料的选择材料的选择：从花药来看，应当选择初花期的花药；从花粉来看，应当选择单核期的花粉；从花蕾来看，当选完全未开放的花蕾。阅读思考v 为什么选择花粉发育时期是提高诱导成功率的重要因素？因为花粉的发育过程中，只有某一时期对离体刺激敏感。一般来说，在单核期，细胞核由中央移向细胞一侧的时期，培养成功率最高。一般选择完全未开放的花蕾。v为什么选择单核期以前和以后的花药接种，不易获得成功？因为单核期以前的花药质地幼嫩，极易
5、破碎；单核期以后的花药，花瓣已有些松动，会带来材料消毒的困难。v为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，从而给材料的消毒带来困难。（一）材料的选取:染色镜检2.针对不易着色的花粉细胞核，采用的方法是：。花粉细胞核被染成色。1.确定花粉发育时期的最常用的方法有。机理：醋酸洋红为性染色剂，易被碱性染料着色染成红色。四、实验操作醋酸洋红法焙花青-铬矾法蓝黑碱染色体碱性染料不是通常所说的酸碱性，而指染料中着色基团是阴离子/阳离子，若为阳离子则为碱性染料。（二）材料的消毒将花蕾用体积分数70%的酒精浸泡约30秒立即取出后在无菌水清洗取出后用无菌纸吸干花蕾表面水分放入0.
6、1%的氯化汞溶液中24分钟或1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液取出后再用无菌水冲洗23次（三）接种和培养将消过毒的花蕾在无菌的条件下除去花萼和花瓣将花药710个接种到锥形瓶内的培养基上（剥离花药时尽量不损伤花药，且彻底除去花丝）在20OC左右（免光照）培养2030天至花药开裂长出愈伤组织释放出胚状体及时转移到分化培养基上分化出再生植株将幼小植株分开，分别移植到新的培养基上（四）鉴定和筛选通过愈伤组织形成的植株，常常会出现染色体倍性的变化，原因是接种花粉过程中混有小孢子母细胞；在双核期，生殖细胞核和花粉管细胞核并没有形成两个细胞，而是两个核发生融合。（五）移栽和栽培五、结果分析与评价1、选材是否恰当选材是否成功是花药培养成功的关键。应学会通过显微镜观察处于适宜发育期的花粉。2、无菌技术是否过关如果出现了污染现象，说明某些操作步骤，如培养基灭菌、花蕾消毒或接种等有问题。3、接种是否成功如果接种的花药长出愈伤组织或释放出胚状体，花药培养的第一步就成功了。要适时转换培养基，以便愈伤组织或胚状体进一步分化成再生植株。二者都是快速、大量繁殖花卉的技术手段。菊花茎的组织培养月季花药培养不同点外植体细胞类型体细胞生殖细胞培养结果正常植株单倍体植株光的要求每日照射12 h幼苗形成后才需要照光相同点理论依据、培养基的配制方法、无菌技术及接种操作等基本相同菊花茎的组织培养与月季花药培养技术的异同
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