1、课题1微生物的实验室培养1.以下关于无菌技术的叙述,错误的是()A.对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行灭菌B.将用于微生物培养的培养皿、接种用具和培养基等进行灭菌C.为避免周围环境中微生物的污染,实验操作应在酒精灯火焰附近进行D.实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触解析对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行消毒处理,A项错误;用于微生物培养的培养皿、接种用具和培养基都应进行灭菌操作,B项正确;实验过程中为了避免周围环境中微生物的污染,实验操作应在酒精灯火焰附近进行,C项正确;实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触,D项正确。答案A2.煮沸消毒法与巴氏消毒法
2、的主要区别是()A.温度不同B.时间不同C.前者适用于固体消毒,后者适用于液体消毒D.没有区别解析煮沸消毒法是指在100 条件下煮沸56 min,而巴氏消毒法则是在7075 条件下煮30 min或在80 条件下煮15 min,二者的关键区别是温度不同。答案A3.细菌培养基常在121 高压蒸汽灭菌锅中灭菌。如果只是在100 温度下将细菌培养基灭菌,下列生物仍会存活的是()A.大肠杆菌B.一种青霉菌C.枯草芽孢杆菌的芽孢D.沙门氏菌解析芽孢是细菌为了抵御外界不良环境而形成的一种休眠体,100 的温度不能将其杀死。答案C4.产生标准形态菌落的细菌的最初数目和培养基分别是()A.一个细菌、液体培养基B
3、.许多细菌、液体培养基C.一个细菌、固体培养基D.许多细菌、固体培养基解析菌落是一个细菌或几个细菌的子细胞群体,形成于固体培养基上,有一定的形态结构,肉眼可见。由一个细菌形成的菌落,形态结构是一定的。由许多细菌形成的菌落,可能不会有比较标准的形态。答案C5.下列操作属于灭菌的是()A.接种前用火焰灼烧接种环B.接种前用酒精擦拭双手C.将平板倒置,放入培养箱中培养D.接种在酒精灯的火焰旁完成解析A属于灭菌,B属于消毒,C、D都是实验操作过程中防止杂菌污染的措施,与灭菌无关。答案A6.稀释涂布平板法是微生物培养中常用的一种接种方法。下列相关叙述错误的是()A.操作中需要将菌液进行一系列的浓度梯度稀
4、释B.需将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基表面C.不同浓度的菌液均可在培养基表面形成单个的菌落D.操作过程中对培养基和涂布器等均需进行严格的灭菌处理解析若菌液浓度过大,形成的菌落连在一起,则得不到单个的菌落。答案C7.为了保持菌种的纯净,需要进行菌种的保藏,下列有关叙述不正确的是()A.对于频繁使用的菌种,可以采用临时保藏的方法B.临时保藏的菌种一般是接种到试管的斜面培养基上C.临时保藏的菌种容易被污染或产生变异D.对于需要长期保存的菌种,可以采用低温-4 保藏的方法解析对于需要长期保存的菌种,可以采用甘油管藏的方法,保存于-20 的冷冻箱中。答案D8.下表是某微生物培养基成分,请据此回答
5、下列问题。编号成分含量粉状硫10 g(NH4)2SO40.4 gK2HPO44.0 gMgSO49.25 gFeSO40.5 gCaCl20.5 gH2O100 mL(1)上表培养基可培养的微生物类型是。(2)若除去成分,加入(CH2O),该培养基可用于培养。(3)表中营养成分共有类。(4)不论何种培养基,在各种成分都溶化后分装前,要进行的是。(5)若上表培养基用于菌种鉴定,应该增加的成分是。解析(1)由题表可知,该培养基中没有碳源,说明培养的微生物是从外界环境中获取碳源的,因此培养的微生物是自养型微生物。(2)该培养基若加入(CH2O),培养基中就有了碳源,但除去成分,培养基中就没有了氮源,
6、该培养基就只能用于培养固氮微生物。(3)题表中的营养物质有水、无机盐、无机氮源三类,缺乏碳源和特殊营养物质。(4)微生物生长需要一定的pH,所以培养基分装前需要调节pH。(5)该培养基中无凝固剂,为液体培养基。菌种的纯化和鉴定通常利用固体平板培养基以获得单细胞菌落,因此需要加入凝固剂,如琼脂,将液体培养基转变成固体培养基。答案(1)自养型微生物(2)固氮微生物(3)3(4)调节pH(5)琼脂(或凝固剂)能力素养提升9.利用稀释涂布平板法纯化的大肠杆菌,经培养后发现培养基上出现了多种菌的菌落,不可能的原因是()A.培养基制备过程中被杂菌污染B.接种过程中,无菌操作不符合要求C.系列稀释时,无菌操
7、作不符合要求D.由大肠杆菌的种类不同造成的解析大肠杆菌培养基中出现了多种菌的菌落,说明被杂菌污染了,杂菌可能来自培养基,也可能是因为操作过程中无菌操作不符合要求。答案D10.下列关于倒平板及对菌种纯化的说法,正确的是()A.倒平板时左手将灭过菌的培养皿盖完全打开,右手将锥形瓶中培养基倒入培养皿(1020 mL),左手立即盖上培养皿盖B.使用已灭菌的接种环及培养基之后不需要再灭菌C.平板冷凝后要将平板倒置,以防皿盖上的冷凝水流入培养基D.涂布器用火焰灼烧灭菌解析倒平板时用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙,而不是直接将盖完全打开;使用灭过菌的接种环及培养基之后仍需进行灭菌处理,以免
8、污染环境或感染操作者;涂布器灭菌时需沾少量酒精引燃。答案C11.在生产、生活和科研实践中,经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。回答下列问题。(1)在实验室中,玻璃和金属材质的实验器具(填“可以”或“不可以”)放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。(2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法,与煮沸消毒法相比,这两种方法的优点是。(3)密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒,其原因是紫外线能。在照射前,适量喷洒,可强化消毒效果。(4)水厂供应的自来水通常是经过(填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”)消毒的。(5)某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时,若压力达到设定要求,而锅内并没有达到相应温度,最可能的原因是。解
9、析(1)玻璃和金属材质的实验器具可以通过干热灭菌的方法来灭菌。(2)巴氏消毒法是在7075 下煮30 min或在80 下煮15 min,可以杀死牛奶中的微生物,并使牛奶的营养成分不被破坏;高温瞬时消毒是在较短的时间内利用高温杀死微生物,由于时间较短,营养物质损失较少。(3)紫外线能破坏DNA结构,有消毒、灭菌的作用,在照射前,适量喷洒消毒液,可以强化消毒效果。(4)自来水消毒通常采用“氯气”或“紫外线”等方法。(5)使用高压蒸汽灭菌锅时,若压力达到设定要求,但没有达到相应温度,最可能的原因是锅内冷空气没有排尽。答案(1)可以(2)在达到消毒目的的同时,营养物质损失较少(3)破坏DNA结构消毒液
10、(4)氯气(5)未将锅内冷空气排尽12.下面是有关微生物的培养与应用的问题,请分析作答。(1)图中是利用法进行微生物接种,把聚集的菌种逐步分散到培养基的表面。为达到这一目的,操作上应注意(答出一点即可)。 (2)菌落形成的根本原因是。将乳酸菌接种到彻底灭菌的固体培养基上,要使其正常生长必须给予的条件是。(3)纯化菌株时,通常使用的划线工具是。划线的某个平板培养后,第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌,第二划线区域所划的第一条线上无菌落,其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有。解析(1)根据图示可知,图中利用的是平板划线法接种。操作时应注意每次划线前要灼烧接种环,冷却后从上一区划线末
11、端开始划,首尾区不重叠等。(2)乳酸菌是厌氧菌,要在无氧条件下培养。(3)纯化菌株时,通常用接种环进行划线操作;第二区域划第一条线时,接种环灼烧后未冷却,致使所划第一条线上无菌落。若第二区域划第一条线时未从第一区域末端开始,则也会导致第二划线区域第一条线上无菌落。答案(1)平板划线稀释每次划线前要灼烧接种环;冷却后从上一区划线末端开始划线;首尾区不重叠(答出其中一点即可)(2)由单个细菌繁殖成为群体无氧条件(3)接种环接种环灼烧后未冷却;划线未从第一区域末端开始13.下表为牛肉膏蛋白胨培养基的成分列表,据此回答下列问题。成分牛肉膏/g蛋白胨/gNaCl/g蒸馏水含量0.510.5加蒸馏水定容至
12、100 mL(1)蛋白胨在培养基中的主要作用是。(2)要用此材料配制观察细菌菌落状况的培养基,还需添加的成分是。(3)从配制培养基直到培养完成,所采用的预防杂菌污染的方法有(答出三点即可)。(4)在培养基凝固前要搁置斜面,其目的是。解析蛋白胨中有大量的蛋白质水解而成的多肽类等物质,在培养基中提供碳源、氮源和生长因子。微生物菌落的形成是在固体培养基上,所以此培养基还需加琼脂。答案(1)提供碳源和氮源(2)琼脂(3)高压蒸汽灭菌、灼烧接种环、酒精擦手、在火焰旁接种等(4)扩大接种面积14.空气中的微生物在重力等作用下,可以一定程度地沉降。某研究小组欲用平板收集教室空气中的微生物,以了解教室内不同高
13、度空气中微生物的分布情况。实验步骤如下:配制培养基(成分:牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O); 制作无菌平板;设置空白对照组和若干实验组,进行相关操作;将各组平板置于37 恒温箱中培养一段时间,统计各组平板上菌落的平均数。回答下列问题:(1)该培养基中微生物所需的氮来源于。若要完成步骤,该培养基中的成分X通常是。(2)步骤中,实验组的操作是。(3)若在某次调查中,某一实验组平板上菌落平均数为36个/平板,而空白对照组的一个平板上出现了6个菌落,这种结果说明在此次调查中出现了现象。若将30(即36-6)个/平板作为本组菌落数的平均值,该做法(填“正确”或“不正确”)。解析本题考查微生物的培养
14、。解题的切入点是微生物的培养基的成分和制作及菌落的计数。(1)培养基中的牛肉膏、蛋白胨为微生物的生长既提供了碳源也提供了氮源。微生物培养所采用的培养基是固体培养基,故题中X应是琼脂,在培养基中起凝固剂的作用。(2)本实验是为了了解教室不同高度空气中微生物的分布情况,所以应选择不同的高度放置平板,并使之暴露在空气中一段时间(各组时间相同),以利于空气中微生物沉附在平板上。(3)空白对照实验的设计是不暴露在空气中,不应出现菌落,若出现了菌落说明在此次实验中平板被污染。用实验组获取的菌落的平均值减去污染产生的菌落数,作为实验的结果,这种做法不正确,应在防止污染的情况下重新实验,以获得较准确的数据。答
15、案(1)牛肉膏、蛋白胨琼脂(2)将各实验组平板分别放置在教室不同高度的位置上,开盖暴露相同的一段时间(3)污染不正确15.回答下列与细菌培养相关的问题。(1)在细菌培养时,培养基中能同时提供碳源、氮源的成分是(填“蛋白胨”“葡萄糖”或“NaNO3”)。通常,制备培养基时要根据所培养细菌的不同来调节培养基的pH,其原因是。硝化细菌在没有碳源的培养基上(填“能够”或“不能”)生长,原因是。(2)用平板培养细菌时一般需要将平板(填“倒置”或“正置”)。(3)单个细菌在平板上会形成菌落,研究人员通常可根据菌落的形状、大小、颜色等特征来初步区分不同种的微生物,原因是 。(4)有些使用后的培养基在丢弃前需
16、要经过处理,这种处理可以杀死丢弃物中所有的微生物。解析本题以细菌培养为依托,考查处理实验材料的能力和环境保护意识。(1)能同时提供碳源、氮源的成分必须同时含有碳和氮两种元素,蛋白胨、葡萄糖和NaNO3中,只有蛋白胨同时含有这两种元素。不同细菌生长繁殖所需的最适pH不同,所以在配制培养基时,在各种成分溶化后分装前必须调节pH。硝化细菌能够进行化能合成作用,即能够利用化学反应产生的化学能固定外界的CO2,所以能够在没有碳源的培养基上生长。(2)用平板培养细菌时,为防止培养基冷凝后形成的水滴滴落在培养基上污染培养基,要将平板倒置。(3)通常根据菌落的形状、大小、颜色等特征初步区分不同种的微生物,因为不同微生物的菌落的形状、大小、颜色、凹凸情况等不同,且在一定的培养条件下微生物的菌落特征是稳定的。(4)为防止污染环境,使用后的培养基在丢弃前需进行灭菌处理,这种处理可以杀死丢弃物中所有的微生物。答案(1)蛋白胨不同细菌生长繁殖所需的最适pH不同能够硝化细菌可以利用空气中的CO2作为碳源(2)倒置(3)在一定的培养条件下,不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征(4)灭菌