1、第六章蛋白质和DNA技术第一节蛋白质的提取和分离1.下列关于蛋白质的分离方法的叙述,错误的是()A.分离主要是根据蛋白质以及蛋白质与其他物质之间的理化性质的差异进行的B.透析技术可去除小分子化合物杂质,原理是不同分子所携带净电荷不同C.通过控制离心速率可使分子大小、密度不同的蛋白质沉降分层,从而分离不同的蛋白质D.不同的物质在同一电场中的泳动速度不同,因此可用电泳法分离蛋白质解析:透析技术分离蛋白质是因为蛋白质分子大,不能透过半透膜。答案:B2.离心技术是分离蛋白质的方法之一,在这一过程中蛋白质会分层,这一现象与蛋白质的何种性质有关?()A.酸碱性B.所带电荷多少C.分子大小和密度D.种类解析
2、:根据蛋白质之间或蛋白质与其他分子之间在分子大小和密度上的不同,采用离心技术,使其分层而分离。答案:C3.下列有关电泳现象的叙述,错误的是()A.相同蛋白质的溶液,经过同一个电场电泳后,会在支持物凝胶上形成相同的带纹B.不同蛋白质的混合溶液,经过同一个电场电泳后,会在支持物凝胶上形成不同的带纹C.每一种带纹可能就是一种蛋白质D.每一种带纹一定不是一种蛋白质解析:不同蛋白质的混合溶液,在经过同一个电场电泳后,会在支持物凝胶上形成不同的带纹,每一种带纹可能是一种蛋白质,也可能是多种蛋白质,还须洗脱确定。答案:D4.下列关于聚丙烯酰胺凝胶电泳的叙述,错误的是()A.是最早使用的电泳技术B.是区带电泳
3、的一种C.凝胶上层加浓缩胶可提高分离效果D.分离血清蛋白质可以得到20种以上的组分解析:聚丙烯酰胺凝胶电泳是最近开始使用的。答案:A5.电泳过程中,什么样的分子迁移速度最快?()A.纤维状、大分子B.纤维状、小分子C.球状、大分子D.球状、小分子解析:电泳就是利用了连续分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状的不同。一般来说,球形分子比纤维状分子易移动,小分子比大分子易移动。答案:D6.在血清蛋白的提取和分离过程中,所使用的染色液是()A.新制血清5 LB.质量浓度为0.4 g/mL的蔗糖溶液C.质量分数为0.05%的考马斯亮蓝R250染色液D.质量分数为0.1%的溴酚蓝指示剂
4、解析:染色液用质量分数为0.05%的考马斯亮蓝R250染色液。答案:C7.下面说法不正确的是()A.分离胶和浓缩胶单独存在时具有神经毒性,应避免接触皮肤B.电泳需要支持物,常用的是聚丙烯酰胺凝胶C.电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程D.蛋白质是两性电解质,不带电荷解析:蛋白质是两性电解质,在一定pH条件下带有电荷。答案:D8.电泳法分离蛋白质时,应保证凝胶的pH()A.不断降低B.不断升高C.先降低后升高D.不变且适宜解析:pH的变化会使蛋白质的电泳速度发生改变,因此,为了使蛋白质匀速迁移,应保证凝胶的pH不变且适宜,可用缓冲溶液稳定pH。答案:D9.下面说法不正确的是()A.在一定
5、范围内,缓冲溶液能够抵制外界的酸、碱对溶液pH的影响,维持pH基本不变B.缓冲溶液通常由12种缓冲剂溶解于水中配制而成C.电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程D.透析袋能使大分子自由进出,而将小分子保留在袋内解析:透析袋一般是用硝酸纤维素(又叫玻璃纸)制成的。透析袋能使小分子自由进出,而将大分子保留在袋内。透析可以除去样品中相对分子质量较小的杂质。答案:D10.有一混合蛋白质溶液,各种蛋白质的pH分别为4.5、5.2、6.6、7.2,电泳时欲使其中三种泳向正极,缓冲液的pH应该是()A.2.0B.5.0C.6.0D.7.0解析:在缓冲液的pH为7.0的溶液中,pH分别为4.5、5.2、
6、6.6的蛋白质均带负电荷,在电泳时移向正极。答案:D11.下列关于“血清蛋白的提取和分离”的活动顺序正确的是()染色电泳点样脱色制干胶板A.B.C.D.解析:血清蛋白的提取和分离的过程,第一步是用微量加样器吸取样品加到电泳样品槽的胶面上,即点样。第二步是打开电泳仪的电源,进行电泳。第三步是用考马斯亮蓝R250染液进行染色。第四步是用醋酸溶液脱色。第五步是将已脱色的凝胶板浸泡后,自然干燥即获得血清蛋白的电泳谱带。答案:D12.各种动物血清内乳酸脱氢酶同工酶的组成是不同的。可以通过比较各种动物乳酸脱氢酶同工酶差异的大小来判断动物之间亲缘关系的远近。下列各种实验方法中,不能采用的方法是()A.测乳酸
7、脱氢酶同工酶的氨基酸序列B.测控制乳酸脱氢酶同工酶合成的基因碱基序列C.用电泳法比较各种动物乳酸脱氢酶同工酶的电泳带D.检测不同动物的乳酸脱氢酶同工酶的pH解析:生物是由共同的原始祖先进化而来的。各种生物之间具有或近或远的亲缘关系。亲缘关系越近,则其对应的基因的碱基序列相似程度就越高,而基因控制蛋白质的合成,故其对应的蛋白质的氨基酸序列相似程度也高。因此,可以采用测定基因或蛋白质序列的方法进行判断。若蛋白质的相似程度高,则进行电泳时,电泳带的相似程度也高。不同动物的乳酸脱氢酶同工酶组成虽不同,但不能说明其pH就一定不同。答案:D13.下图为某些氨基酸在pH=6时进行电泳的结果,请回答下列问题。
8、(1)由图示可知,pH=6时带正电荷的氨基酸是,带负电荷的氨基酸是。请说明理由:。(2)假设谷氨酸和赖氨酸所带电荷数相同,它们到达两极的速度一样吗?,为什么?。(3)若把氨基酸换成蛋白质,会出现什么现象?。解析:氨基酸是一种两性电解质,在一定pH条件下带电荷,作为带电粒子,氨基酸向与其自身所带电荷相反的电极运动,即向正极运动的氨基酸带负电荷,向负极运动的氨基酸带正电荷,在原点不动的氨基酸,所带正电荷和负电荷相等。蛋白质也是一种两性电解质。答案:(1)赖氨酸谷氨酸氨基酸是一种两性电解质,在一定pH条件下带电荷,作为带电粒子,在进行电泳时氨基酸向与其自身所带电荷相反的电极方向运动(2)不一样进行电
9、泳时,若氨基酸带相同的电荷数,相对分子质量越小,则移动越快。由于两者相对分子质量不相等,因此到达两极的速度不同(3)蛋白质同氨基酸一样,在一定pH条件下带电荷,也会向与其自身所带电荷相反的电极方向运动14.我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验,来提取和分离血红蛋白。根据材料回答下列问题。(1)实验前取新鲜血液,要在采血器中预先加入柠檬酸钠,取血回来,马上进行离心,收集血红蛋白溶液。加入柠檬酸钠的目的是。(2)在对样品进行处理时,主要包括红细胞的洗涤、血红蛋白的释放、分离血红蛋白溶液、透析等步骤。其中透析技术的原理是。(3)同学甲利用琼脂糖凝胶电泳技术将得到的蛋白质进行分离,在电泳
10、过程中,影响蛋白质迁移速率的因素包括蛋白质分子的以及分子的、形状等。(4)SDS凝胶电泳主要取决于蛋白质分子量的大小,与电荷无关。图一、图二分别是某同学利用同一种样品分离得到的结果,则图二中与图一中蛋白质P对应的是。图一SDS凝胶电泳结果图二SpephadexG75凝胶色谱分离结果解析:(1)加入柠檬酸钠的目的是防止血液凝固。(2)透析的原理是小分子可以透出透析袋(半透膜),而大分子不能通过。(3)电泳时,影响蛋白质迁移速率的因素有蛋白质分子的带电性质及分子的大小、形状等。(4)SDS凝胶电泳主要取决于蛋白质分子量的大小,与电荷无关,同时加样在“-”极,通电后,样品蛋白质向“+”极移动,分子量相对小的,移动距离大,因此从图一的电泳结果分析,P比N、M移向“+”距离大,符合图二中的丙。答案:(1)防止血液凝固(2)小分子可以透出透析袋(半透膜),而大分子不能通过(3)带电荷数多少大小(4)丙
