1、专题 2 微生物的培养和应用知识结构网络 基础知识整合 一、微生物的实验室培养1.培养基的分类、特点及应用划分 标准 培养基种类 特点 用途 物质 性质 液体培养基 不加凝固剂(琼脂)(琼脂)工业生产 半固体培养基 加凝固剂(琼脂)(琼脂)观察微生物的运动、分类鉴定 固体培养基 微生物分类、鉴定、计数、保藏菌种 化学 成分 天然培养基 含化学成分不明确的天然物质 工业生产 合成培养基 培养成分明确(用化学成分已知的化学物质(用化学成分已知的化学物质配制而成)分类、鉴定 用途 选择培养基 允许特定的微生物生长，同时抑制或阻止其他微生物的生长 培养、分离特定的微生物(如培养酵母菌和霉菌，可在培养基
2、中加入青霉素；以尿素为唯一氮源的培养基用于分离分解尿素的细菌)(如培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入青霉素；以尿素为唯一氮源的培养基用于分离分解尿素的细菌)鉴别培养基 根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品 鉴别不同种类的微生物(如可用伊红美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌，若有，菌落呈黑色并带有金属光泽)(如可用伊红美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌，若有，菌落呈黑色并带有金属光泽)培养基的营养要素 一般都含有水、无机盐、碳源和氮源。此外还要满足不同微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求pH、特殊营养物质以及氧气的要求 固体培养基适合于分离、鉴定微
3、生物,并且对微生物的计数也适合用固体培养基。但液体培养基适合利用微生物进行发酵,因为液体状态下微生物与营养物质的接触面积大,微生物代谢活动较强。基础知识整合 2.无菌技术(1)消毒和灭菌的区别 条件结果常用的方法消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或化学药物消毒法灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物,包括芽孢和孢子灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌酒精消毒时,70%的酒精杀菌效果最好,原因是:浓度过高,使菌体表面蛋白质凝固成一层保护膜,乙醇分子不能渗入其中;浓度过低,杀菌力减弱。基础知识整合(2)无菌技术
4、具体操作对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。为避免周围环境中微生物的污染,实验操作应在酒精灯火焰附近进行。实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。基础知识整合 3.纯化大肠杆菌以及菌种的保藏(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基:计算、称量、熔化、灭菌、倒平板。(2)纯化大肠杆菌原理:在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞,使其长成单个的菌落,这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。方法:平板划线法、稀释涂布平板法。(3)菌种的保藏短期保存:固体斜面培养基上 4 保存,菌种易被污染或产生变异。长期保存:-20 甘油管在冷冻箱中
5、保藏。基础知识整合 平板划线法和稀释涂布平板法对大肠杆菌的纯化的比较(1)平板划线法中由于划线时,每次从上一次划线的末端开始,线条末端细菌的数目比线条起始处要少,能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少,最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。(2)稀释涂布平板法中,由于将菌液进行了一系列的梯度稀释和涂布培养,聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞,形成单个菌落。4.倒平板操作(1)培养基需冷却至 50 时开始倒平板。原因：琼脂是一种多糖，在 98 以上熔化，在 44 以下凝固，高于50 时倒平板会烫手，低于 50 时若不能及时操作，琼脂会凝固。估计培养基温度的方法：培养基从灭菌锅中取出冷却一段时
6、间后用手触摸，感觉以不烫手为准。(2)平板倒置的原因：培养基表面的温度也较高，培养皿盖上会凝结水珠，平板倒置后，即可避免培养中的水分过快地蒸发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。(3)注意事项：倒平板时不要将培养基溅上皿盖和皿底之间，否则此培养基容易引起污染，不能用来培养微生物。基础知识整合(2014全国新课标卷)为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题：(1)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是；然后，将 1 mL 水样稀释 100 倍，在
7、 3 个平板上用涂布法分别接入 0.1 mL稀释液；经适当培养后，3 个平板上的菌落数分别为 39、38 和 37。据此可得出每升水样中的活菌数为。(2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌，操作时，接种环通过灭菌。在第二次及以后划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是。基础知识整合（3）示意图 A 和 B 中，表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液中的含量，同时可以使菌体与培养液充分接触，提高的
8、利用率。基础知识整合 解析：本题考查细菌的分离、培养和计数过程。(1)为了确定培养基的灭菌是否合格，微生物学实验一般会设置空白对照：随机取若干灭菌后的空白平板培养一段时间，观察培养基上是否有菌落生成；利用平板菌落计数法的计算公式估算水样中的活菌数：vc M（接种体积接种计数结果平均值 稀释倍数）=mL1.0381003.8107/L。(2)接种时接种环需要灼烧灭菌；在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线，这样做的目的是：通过划线次数的增加，使每次划线时菌体的数目逐渐减少，以便得到单个菌落。(3)稀释涂布平板法是将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，以单个细胞
9、存在(否则一个菌落就不只是代表一个细胞)，再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基上。经培养后由单个细胞生长繁殖形成菌落，且菌落分布均匀，B 图符合这一特点。基础知识整合(4)振荡培养可以增加液体培养基的氧气含量，促进好氧型微生物的生长；另外振荡培养还可以使菌体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率。答案：(1)检测培养基平板灭菌是否合格3.8107(2)灼烧将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落(3)B(4)溶解氧营养物质基础知识整合 二、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1.选择合适的培养基分离分解尿素的细菌的培养基即为选择培养基，培养基中的氮源只有尿素，理论上
10、只有能合成脲酶的微生物才能在上面生长。2.统计菌落数目的方法(1)显微镜直接计数法原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。方法：用计数板计数。缺点：不能区分死菌与活菌。(2)间接计数法(活菌计数法)原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。基础知识整合 操作a.设置重复组，增强实验的说服力与准确性。b.为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300 的平板进行计数。计算公式：每克样品中的菌株数=C/VM，其中 C 代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，
11、V 代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M 代表稀释倍数。3.细菌分离与计数的实验流程土壤取样样品稀释取样涂布微生物培养观察并记录结果细菌计数基础知识整合 判断培养基中是否有杂菌污染,需将未接种的培养基同时进行培养;判断选择培养基是否具有筛选作用,需设立牛肉膏蛋白胨培养基进行接种后培养,观察两种培养基上的菌落数目,进行对比得出结论。基础知识整合 幽门螺杆菌(Hp)感染是急慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。在患者体内采集样本并制成菌液后，进行分离培养。实验基本步骤如下：请回答：(1)在配制培养基时，要加入尿素和酚红指示剂，这是因为 Hp 含有，它能以尿素作为氮源；若有 Hp，则菌落周围会
12、出现色环带。(2)下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是灭菌。A.高压蒸汽B.紫外灯照射C.70%酒精浸泡D.过滤基础知识整合(3)步骤X 表示。在无菌条件下操作时，先将菌液稀释，然后将菌液到培养基平面上。菌液稀释的目的是为了获得菌落。(4)在培养时，需将培养皿倒置并放在中。若不倒置培养，将导致。(5)临床上用 14C 呼气试验检测人体是否感染Hp，其基本原理是Hp 能将 14C标记的分解为 NH3和 14CO2。基础知识整合 解析：本题考查微生物的培养与应用。(1)幽门螺杆菌以尿素作为氮源，它必定含有分解尿素的酶，即脲酶，尿素分解产生NH3 和 CO2，而 NH3的水溶液显碱性，遇酚红指示剂变红
13、色。(2)高压蒸汽、紫外灯照射、酒精都能使尿素分解，只能用过滤的方法来除去微生物。(3)配制好培养基后，灭菌、倒平板，然后进行接种程序。(4)微生物培养时需保持恒温，为防止培养基被皿盖上的水珠污染而得不到单菌落，培养基必须倒置。(5)因为尿素中的 C 在分解时转移到CO2 中，所以根据14CO2 就能检测人体是否感染 Hp。答案：(1)脲酶红(2)D(3)接种涂布单(4)恒温培养箱无法形成单菌落(5)尿素基础知识整合 三、分解纤维素的微生物的分离1.纤维素酶是一种复合酶,它包括 C1 酶、Cx酶和葡萄糖苷酶,前两种酶使纤维素分解成纤维二糖,第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。2.纤维素分解菌的筛选
14、原理(1)刚果红可以与纤维素形成红色复合物,但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。(2)纤维素分解菌能产生纤维素酶分解纤维素,从而使菌落周围形成透明圈。基础知识整合 3.土壤中纤维素分解菌的筛选(1)方案土壤取样选择培养梯度稀释将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上挑选产生透明圈的菌落。(2)选择培养的目的:增加纤维素分解菌的浓度,确保能够从样品中分离到所需要的微生物。(3)涉及的微生物技术主要有:培养基的制作、无菌操作、稀释涂布平板法、选择培养基的作用、土壤取样等。基础知识整合(1)纤维素分解菌的选择培养基为液体培养基,培养基中无凝固剂,利用液体培养基以增加纤维素分解菌的浓度。(2)
15、选择培养基以纤维素作为碳源和能源,其他绝大多数微生物不能正常生长;鉴别培养基含琼脂,故为固体培养基,刚果红染色法就是应用的此培养基。(3)流程中的“选择培养”是为了扩大培养液中的微生物数量,具体需要与否要看土样中微生物的数量。基础知识整合(2014全国新课标卷)植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。回答下列问题：(1)分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由 3 种组分组成的复合酶，其中的葡萄糖苷酶可将分解成。(2)在含纤维素的培养基中加入刚果红(CR)时，CR 可与纤维素形成色复合物。用含有 CR 的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌落为中心的。基础知识整合(3)为从
16、富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基(成分见下表)：注：“+”表示有，“-”表示无。据表判断，培养基甲(填“能”或“不能”)用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是；培养基乙(填“能”或“不能”)用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是。基础知识整合 解析：本题考查纤维素的分解、纤维素分解菌的分离和鉴定。(1)纤维素是一种葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是含量最丰富的多糖类物质，能被土壤中某些微生物分解利用；分解纤维素的纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即 Cx酶、C1酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。
17、(2)刚果红与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。(3)根据有无琼脂成分可推知，培养基甲为液体培养基，培养基乙为固体培养基；纤维素分解菌分离和鉴别要用固体培养基，培养基甲不符合要求；培养基乙不含纤维素粉，不能形成特定的红色复合 物，培养基乙不符合题目要求。答案：(1)纤维二糖葡萄糖(2)红透明圈(3)不能液体培养基不能用于分离单菌落不能培养基中没有纤维素，不会形成 CR-纤维素红色复合物，即使出现单菌落也不能确定其为纤维素分解菌速效提升训练 1.(2015全国新课标卷)已知微生物A可以产
18、生油脂，微生物B可以产生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生产。回答有关问题：(1)显微观察时，微生物A菌体中的油脂通常可用 染色。微生物A产生的油脂不易挥发，可选用 (填“萃取法”或“水蒸气蒸馏法”)从菌体中提取。(2)为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物B的单菌落，可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样，并应选用以 为碳源的固体培养基进行培养。(3)若要测定培养液中微生物B的菌体数，可在显微镜下用 直接计数；若要测定其活菌数量，可选用 法进行计数。(4)为了确定微生物B产生的脂肪酶的最适温度，某同学测得相同时间内，在35、40、45 温度下降解10 g油脂所需酶量依次为4 mg、1 m
19、g、6 mg，则上述三个温度中，条件下该酶活力最小。为了进一步确定该酶的最适温度，应围绕 设计后续实验。速效提升训练 解析：(1)要用显微镜观察脂肪(油脂)通常是用苏丹染液或苏丹染液将脂肪(油脂)染色后再进行显微观察。对于微生物中不易挥发的油脂，我们可以用萃取法从菌体中提取。(2)从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样，应选用以油脂为碳源的固体培养基(选择培养基)进行培养，这样才能筛选出自然界中产生脂肪酶的微生物B的单菌落。(3)若要测定培养液中微生物菌体数，可在显微镜下用血球计数板直接计数，具体做法是取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数板的计数室内，用显微镜观察计数，由于计数室的容积是一定的
20、(0.1 mm3)，因而根据计数板刻度内的细菌数，可计算样品中的含菌数。若要测定其活菌数量，可选用稀释涂布平板法进行计数，根据培养出的菌落数，可算出培养物中的活菌数。(4)降解等量油脂所需酶量越多说明酶的活力越小，所需酶量越少说明酶的活力越大。所以在三个温度中，45 条件下该酶活力最小。为了进一步确定该酶的最适温度，应围绕三个温度中酶活力最大的40 设计后续实验。速效提升训练 答案：(1)苏丹(或苏丹)染液 萃取法 (2)油脂 (3)血细胞计数板 稀释涂布平板 (4)45 40 速效提升训练 2.现在大力提倡无纸化办公,但是每年仍然不可避免要产生大量的废纸,其主要成分是木质纤维,人类正努力将其
21、转化为一种新的资源乙醇。下图是工业上由微生物利用纤维素生产乙醇的基本工艺流程,请回答相关问题。速效提升训练(1)自然界中环节需要的微生物大多分布在的环境中。将从土壤中获得的微生物培养在以为碳源、并加入的培养基上筛选周围有的菌落。(2)如上所述的筛选中获得了三个菌落,对它们分别培养,并完成环节,且三种等量酶液中酶蛋白浓度相同,则你认为三种酶液的活性(填“一定相同”“不一定相同”或“一定不相同”),可以通过进行定量测定。(3)根据测定结果,环节常选择木霉,则中获得的酶是酶。该酶至少包括三个组分。速效提升训练(4)生产中可以满足环节的常见菌种是,为了确保获得产物乙醇,环节要注意,过程要注意避免。(5
22、)该技术虽然有广阔的前景,但存在酶的成本高等问题,为了降低成本主要从以下几方面入手改进该过程。首先要通过等技术手段对产酶微生物改造,提高酶的产量。其次,可利用等技术使酶能够重复利用。速效提升训练 解析:(1)题图中培养产纤维素的酶,需要的微生物大多分布在富含纤维素的环境中。在刚果红指示剂的培养基中筛选周围有透明圈的菌落,即可获得要分离的微生物。(2)酶的活性受多种因素的影响,等量的酶液中,即使酶蛋白浓度相同,酶的活性不一定相同,可以用纤维素酶分解纤维素后产生的葡萄糖进行定量分析。(3)木霉中获得的酶主要是纤维素酶,纤维素酶至少包括 C1 酶、Cx酶和葡萄糖苷酶。(4)发酵生产乙醇离不开酵母菌,
23、同时要提供无氧环境,保证酵母菌的无氧呼吸。(5)通过基因突变或基因工程等技术手段改造产酶微生物,提高酶的产量;同时可利用固定化酶等技术使酶重复利用。速效提升训练 答案:(1)富含纤维素(其他答案合理也可,如落叶较多等)纤维素 刚果红 透明圈(2)不一定相同 对纤维素酶分解纤维素后所产生的葡萄糖(3)纤维素 C1 酶、Cx 酶、葡萄糖苷酶(4)酵母菌 发酵装置密闭(或保证无氧条件等)杂菌污染(5)基因工程(基因突变)固定化酶速效提升训练 3.氯苯化合物是重要的有机化工原料,因其不易降解,会污染环境。某研究小组依照下列实验方案(图 1)筛选出能高效降解氯苯的微生物SP1 菌,培养基配方如下表。图
24、1速效提升训练 表培养基的组成液体培养基蛋白胨牛肉膏氯苯氯化钠硝酸铵无机盐(无碳)蒸馏水号10 g5 g5 mg5 g1 L号50 mg5 g3 g适量1 L号2080 mg5 g3 g适量1 L(1)配制号固体培养基时,除添加号液体培养基成分外,还应添加 1%的。(2)培养基配制时,灭菌与调 pH的先后顺序是。(3)从用途上来说,号培养基和号培养基分别属于培养基和培养基。在号培养基中,为 SP1 菌提供氮源的成分是。速效提升训练(4)将 SP1 菌接种在含不同浓度氯苯的号培养液中培养,得到生长曲线(如图 2)。从图 2 可知,SP1 菌在培养条件下最早停止生长,其原因是。图 2速效提升训练
25、解析:(1)固体培养基必须含有适量的琼脂。(2)配制培养基时应先调 pH 后灭菌。(3)号培养基是为了获得更多的菌株,属于通用培养基,号培养基是为选择出 SP1 菌株,属于选择培养基,号培养基成分中含 N 物质为硝酸铵,由它为 SP1 菌株提供氮源。(4)SP1 菌株以氯苯为碳源,当氯苯耗尽时,菌株因缺少碳源而不能继续生存,故氯苯含量越少,SP1 菌株越早停止生长。答案:(1)琼脂(2)先调 pH,后灭菌(3)通用 选择 硝酸铵(4)20 mg/L 氯苯 碳源最早耗尽速效提升训练 4.(2014四川卷)有机农药苯磺隆是一种除草剂，长期使用会污染环境。研究发现，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分
26、离降解苯磺隆的菌 株和探索其降解机制的实验过程如图甲、乙所示。(1)微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、水、四类，该 实 验 所 用 的 选 择 培 养 基 只 能 以 苯 磺 隆 作 为 唯 一 碳 源，其 原 因是 。(2)与微生物培养基相比，植物组织培养的培养基常需添加生长素和 ，这些植物激素一般需要事先单独配制成 保存备用。速效提升训练(3)纯化菌株时，通常使用的划线工具是。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其它划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有。(4)为探究苯磺隆的降解机制，将该菌种的培养液过滤离心，取上清
27、液做图乙所示实验。该实验的假设是，该实验设计是否合理？为什么？。速效提升训练 解析：(1)微生物的各种培养基配方一般都含有水、碳源、氮源和无机盐四类营养；选择培养基只允许特定种类的微生物生长，又要抑制或阻止其他种类微生物生长，因而必须以苯磺隆为唯一碳源只让目的菌株生长繁殖。(2)植物组培过程中启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键激素是生长素和细胞分裂素；为了避免每次配制时都要称量，可将激素类先配成母液保存备用。(3)纯化菌株时，通常使用的划线工具是接种环(或接种针)；接种环在平板内的每一次划线前，都要先灼烧灭菌冷却后划线，而且要从上一次划线末端而非空白处划线，不冷却会烫死上次划线末端菌株，从空白
28、处划线是不会有菌株的。(4)从图乙上清液中加入蛋白酶溶液可知是用于水解上清液中的某蛋白质的，由此可判定实验假设是目的菌株通过分泌某种蛋白质来降解苯磺隆，但是尚需设置不加入蛋白酶的对照组实验，否则没有说服力，因而不合理。速效提升训练 答案：(1)无机盐和氮源只有能利用苯磺隆的微生物才能正常生长繁殖形成菌落(2)细胞分裂素母液(3)接种环(或接种针)接种环在灼烧后未冷却；划线未从第一区域末端开始(4)目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白质不合理，缺乏少空白对照速效提升训练 5.尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类、数量繁多，同学们试图探究土壤中微
29、生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌(目的菌)。培养基成分如下表所示，实验步骤如图所示。请分析回答问题：将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到 1 000 mL速效提升训练(1)培养基中加入尿素的目的是筛选，这种培养基属于培养基。(2)“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的和，实验需要振荡培养，原因是。(3)转为固体培养时，常采用方法接种，获得单菌落后继续筛选。(4)下列材料或用具中：培养细菌用的培养基与培养皿；玻璃棒、试管、锥形瓶和吸管；实验操作者的双手。需要灭菌的是；需要消毒的是。(填序号)(5)在进行分离分解尿素的细菌的实验时，A 同学从培养基上
30、筛选出大约150 个菌落，而其他同学只选择出大约 50 个菌落。A 同学的实验结果产生的原因可能有。(填序号)由于土样不同由于培养基污染由于操作失误没有设置对照(6)简述土壤中可分解尿素细菌的鉴定方法及原理：。速效提升训练 解析：(1)该实验的目的是筛选到能高效降解尿素的细菌，因此培养基中加入尿素的目的是能筛选出高效降解尿素的细菌(目的菌)，而不能分解尿素的细菌将因缺少氮源无法生长繁殖，因此从功能上看，该培养基属于选择培养基。(2)目的菌生长繁殖需要的氮源来自尿素，碳源来自葡萄糖；由于分解尿素的菌是需氧微生物，因此需要震荡培养，为培养的目的菌提供必需的氧气。(3)图中将细菌转到固体培养基上时，
31、常采用涂布平板(划线)的方法接种，获得单菌落后继续筛选。(4)在实验中，培养细菌用的培养基与培养皿和玻棒、试管、锥形瓶和吸管需要灭菌，实验操作者的双手需要消毒。(5)该同学与其他同学获得的菌落数差异很大，可能的原因是采用的土样不同，培养基灭菌不彻底，培养基被污染或者是实验过程中没有进行无菌操作，而与是否设置对照无关。(6)尿素分解菌合成的脲酶可将尿素分解为氨，使培养基的碱性增强，pH 升高，可使加入培养基中的酚红指示剂变红，从而实现对分解尿素细菌的分离与鉴定。速效提升训练 答案：(1)目的菌选择(2)尿素葡萄糖为目的菌提供氧气(3)稀释涂布平板(或平板划线)(4)和(5)(6)在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，细菌合成的脲酶将尿素分解为氨，使培养基的碱性增强，pH 升高，使酚红指示剂变红