1、第2讲 微生物的利用 考纲扫描 1.微生物的分离和培养。2.某种微生物数量的测定。3.培养基对微生物的选择作用。核心考点突破 考点一 微生物的实验室培养1培养基(1)概念：人们按照微生物对_的不同需求，配制出供其生长繁殖的_。(2)营养成分：水、_、_、无机盐四类营养物质，另外还需要满足微生物生长对_、特殊营养物质以及_的要求。(3)培养基的分类按物理状态分类培养基种类特点用途_培养基不加凝固剂工业生产半固体培养基加凝固剂(如琼脂)观 察 微 生 物 的_、分类鉴定_培养基加凝固剂(如琼脂)微 生 物 分 离、_，活菌计数，菌种保藏按功能分类种类制备方法原理用途举例选择培养基培养基中加入某些化
2、学物质依据某些微生物对某些物质的特殊需求或抗性而设计从 众 多微 生 物 中_ 所 需的微生物加入_分离得到酵母菌和霉菌鉴别培养基培养基中加入某种_产生特定的颜色或其他变化鉴 别 不 同 种类的微生物用_培养基鉴别大肠杆菌2无菌技术条件结果常用方法应用范围_日常用品_不耐高温的液体消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部的对人体有害的微生物化学药剂消毒法用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源_接种工具干热灭菌法玻璃器皿、金属工具灭菌强烈的理化因素杀死物体内外的微生物，包括芽孢和孢子_培养基及容器的灭菌3.纯化大肠杆菌及菌种的保藏(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基：步骤：计算_溶化_倒平板。倒平板
3、的过程：a在火焰旁右手拿锥形瓶，左手_。b右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过_。c左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基倒入培养皿，左手立刻盖上_。d待平板冷却凝固后，将平板_放置，使皿盖在下、皿底在上。(2)纯化大肠杆菌：平板划线法(图中_)；通过_在琼脂固体培养基表面_的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。稀释涂布平板法(图中_)；将菌液进行一系列的梯度 稀 释，然 后 将 _ 的 菌 液 分 别 涂 布 到_的表面，进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的_。(3)菌种的保藏对于频繁使用的菌种，可以采用_法。对于需要长期保存的菌种，可以采用_法。自 我 校 对1(
4、1)营养物质 营养基质(2)碳源 氮源 pH 氧气(3)液体 运动 固体 鉴定 分离 青霉素 指示剂或化学药品 伊红美蓝2煮沸消毒法 巴氏消毒法 灼烧灭菌法 高压蒸汽灭菌法3(1)称量 灭菌 拔出棉塞 火焰 培养皿的皿盖 倒过来(2)A 接种环 连续划线 B 不同稀释度 琼脂固体培养基 菌落(3)临时保藏 甘油管藏过关训练1连线：消毒和灭菌的常用方法及适用对象。2连线以下几种选择培养基和鉴别培养基及其应用。自 我 校 对1c d e a b f2d a b c g h e 培养基及应用1甲、乙两同学学习完微生物的实验室培养后，要利用所学知识研究水中微生物的情况。.甲为了检测饮用水中是否会有某种
5、细菌，配制如下培养基进行培养：蛋白胨10 g乳糖5 g蔗糖5 gK2HPO42 g蒸馏水1 000 mL将 pH 调到 7.2(1)该 培 养 基 所 含 有 的 碳 源 有 _，其 功 能 是_。(2)该 培 养 基 所 含 有 的 氮 源 有 _，其 功 能 是_。(3)该培养基除含碳源、氮源外，还有微生物需要的营养物质，是_。(4)用该培养基培养微生物时，还需要控制哪些理化条件？_。.乙同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察。请回答与此实验相关的问题。(1)乙同学培养基为_(物理性质)培养基，其中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了
6、_和_。(2)对培养基进行灭菌，应该采用的方法是_。(3)为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于_中培养，培养的温度设定在 37。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种_作为对照进行实验。解析本题考查微生物的基本营养、培养条件和培养基的有关知识。应从微生物的代谢特征入手分析培养所需的碳源、氮源的种类和应给予的温度、气体等环境条件。.对异养微生物来说，含 C、H、O、N 的化合物既是碳源，又是氮源，因此蛋白胨既可作为碳源，又可作为氮源。培养微生物需要控制的理化条件有温度、氧气浓度和 pH 等。.调查湖水细菌的污染情况，就要计数，用固体培养基；蛋白胨来源于动物原
7、料，含有维生素、糖和有机氮等营养物质，在培养基中主要是作为氮源。实验室的灭菌方法一般有：灼烧灭菌法(适用于接种工具的灭菌)、干热灭菌法(适合于耐高温的、需要保持干燥的物品的灭菌)、高压蒸汽灭菌法(适用于培养基等物体的灭菌)。要想使微生物快速地繁殖，就要置于适宜的条件下，特别是温度，所以要置于恒温培养箱中，对照实验就要设置一个无菌的实验加以比较进行观察。答案.(1)蔗糖、乳糖、蛋白胨 主要用于构成微生物的细胞物质和代谢产物(2)蛋白胨 主要用于合成蛋白质、核酸及含氮的代谢产物(3)水、无机盐(或 K2HPO4)(4)温度、氧气浓度等.(1)固体 氮源 碳源(2)高压蒸汽灭菌(3)恒温培养箱 无菌
8、水无菌技术2(2018课标全国)在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。回答下列问题：(1)在实验室中，玻璃和金属材质的实验器具_(填“可以”或“不可以”)放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。(2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是_。(3)密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒，其原因是紫外线能_，在照射前，适量喷洒_，可强化消毒效果。(4)水厂供应的自来水通常是经过_(填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”)消毒的。(5)某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而 锅 内 并 没 有 达 到 相 应 温 度，最 可 能 的 原
9、 因 是_。解析(1)能耐高温的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿(吸管、培养皿)和金属用具等可以放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。(2)煮沸消毒法即在 100 时煮沸 56 min 可以杀死微生物细胞和一部分芽孢；巴氏消毒法即在 7075 时煮 30 min 或在 80 时煮 15 min，可以杀死微生物，并且保证营养物质不被破坏。因此，与煮沸消毒法相比，牛奶消毒常采用的巴氏消毒法或高温瞬时消毒法的优点是达到消毒目的的同时，营养物质损失较少。(3)因紫外线能破坏 DNA 结构，所以密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒。在照射前，适量喷洒消毒液，可强化消毒效果。(4)通常乙醇消毒是 75%的酒精，有
10、气味，影响水质，不适宜消毒自来水；高锰酸钾本身有颜色，消毒后溶液呈紫红色，无法使用；因此水厂供应的自来水通常是经过氯气消毒的。(5)采用高压蒸汽灭菌时，锅内的水加热煮沸，将其中原有的冷空气彻底排除后才能将锅密闭。如果未将锅内冷空气排尽，则会出现压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度的现象。答案(1)可以(2)在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少(3)破坏 DNA 结构 消毒液(4)氯气(5)未将锅内冷空气排尽微生物的纯化培养3为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题：(1)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接
11、种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是_。(2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时，接种环通过_灭菌，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是_。(3)示意图 A 和 B 中，_表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液中_的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高_的利用率。解析(1)在涂布接种前，随机选取若干灭菌后的空白平板先行培养一段时间，目
12、的是检测培养基平板灭菌是否合格，不能留有杂菌。(2)用平板划线法分离水样中的细菌，操作时，接种环通过灼烧灭菌，在第二次及以后的划线时，从上一次划线末端开始划线，目的是将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落。(3)稀释涂布平板法接种培养后得到的结果应为图 B。(4)振荡可以使细菌分散，更有利于细菌利用培养液中的营养物质，并且可以使培养液中的溶解氧增多。答案(1)检测培养基平板灭菌是否合格(2)灼烧 将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落(3)B(4)溶解氧 营养物质考点二 微生物的筛选与计数1土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(1)筛选菌株自然界中目的菌株筛选的依据：根据它对_的要求，到相应的环境中去
13、寻找。实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于_生长的条件(包括营养、温度、pH 等)，同时_其他微生物生长。选择培养基：允许特定种类的微生物生长，同时_和_其他种类微生物生长的培养基。(2)统计菌落数目常用方法：_法。统计依据当样品的_足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个_。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。活菌计算方法：每克样品中的菌株数(CV)M其中 C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V 代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M 代表稀释倍数。其他方法：还可利用_计数。(3)设置对照设置对照的主要目的是排除实验组中_对实验结果的
14、影响，提高实验结果的_，例如为了排除培养基被杂菌污染的可能性，需以_的培养基培养作为空白对照。(4)实验设计项目内容实验原理(1)能合成_的细菌才能分解尿素(2)配制以_为唯一氮源的培养基，能够生长的细菌就是能分解尿素的细菌实验流程土壤取样(富含_)配制土壤溶液和制备培养基_涂布平板与培养菌落_ 鉴定(1)方 法：在 以尿 素为唯 一氮 源的 培养 基中加 入_指示剂培养分解尿素的细菌(2)原理：细菌分解尿素的反应中，细菌合成的脲酶将尿素分解成了_，其会使培养基的_增强，pH 升高 2.分解纤维素的微生物的分离(1)纤维素酶纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括_、_和_三种组分。作用：纤维
15、素C1酶CX酶 _ 葡萄糖苷酶_。(2)纤维素分解菌的筛选方法：_法。原理：刚果红纤维素 纤维素分解菌 纤维素酶红色消失，出现 。培养基：以_为唯一碳源的选择培养基。实验流程土壤取样：富含_的环境选择培养：用_培养，以增加纤维素分解菌的浓度_：制备系列稀释液涂布平板：将样品涂布到_的培养基上挑选产生_的菌落自 我 校 对1(1)生存环境 目的菌株 抑制或阻止 抑制 阻止(2)稀释涂布平板 稀释度 活菌 显微镜直接(3)非测试因素 可信度 未接种细菌(4)脲酶 尿素 有机质 样品梯度稀释 观察 酚红 氨 碱性2(1)C1 酶 CX 酶 葡萄糖苷酶 纤维二糖 葡萄糖(2)刚果红染色 红色复合物 透
16、明圈 纤维素 纤维素 选择培养基 梯度稀释 鉴别纤维素分解菌透明圈微生物计数1自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一般要将它们分离提纯，然后进行数量的测定。下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题。实验步骤：(1)制备稀释倍数为 102、103、104、105、106的系列稀释液。(2)为了得到更加准确的结果，你选用_法接种样品。(3)适宜温度下培养。结果分析：(1)测定大肠杆菌数量时，在对应稀释倍数为 106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确可信的是_，其理由是_。A一个平板，统计的菌落数是 230B两个平板，统计的菌落数是 220 和 260，取平均值 240
17、C三个平板，统计的菌落数分别是 210、50 和 520，取平均值 260D四个平板，统计的菌落数分别是 210、300、240 和 250，取平均值 250(2)一同学在稀释倍数为 105的培养基中测得平板上菌落数的平均值为 234，那么每毫升样品中的菌落数是_(涂布平板时所用稀释液的体积为 0.1 mL)。(3)用这种方法测定的大肠杆菌比实际活菌数量_，因为_。解析实验步骤：为了得到更加准确的结果，应用稀释涂布平板法接种样品。结果分析：(1)选取多个菌落数相差不大的平板计数，一般选择菌落数在 30300 的平板进行计数，取其平均值。(2)2340.11052.34108。(3)因为菌落可能
18、由两个或多个细菌连在一起生长而成，所以实际活菌数量要比测得的数量多。答案实验步骤：(2)稀释涂布平板结果分析：(1)D 在设计实验时，一定要涂布至少三个平板作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性；在分析实验结果时，要考虑所设置的重复组的结果是否合理(2)2.34108(3)少 当两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落土壤中分解尿素细菌的分离2(2017课标全国)某些土壤细菌可将尿素分解成 CO2 和NH3，供植物吸收和利用。回答下列问题：(1)有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生_。能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物 CO2作为碳源，原因是_，但可用葡萄糖作为
19、碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是_(答出两点即可)。(2)为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择_(填“尿素”“NH4NO3”或“尿素NH4NO3”)作为氮源，不选择其他两组的原因是_。(3)用 来 筛 选 分 解 尿 素 细 菌 的 培 养 基 含 有 KH2PO4 和Na2HPO4，其作用有_(答出两点即可)。解析(1)细菌分解尿素是由于细菌体内合成脲酶的结果，尿素是有机物，分解尿素的细菌是分解者，而不是生产者，只有生产者才能利用 CO2 作为碳源合成有机物。葡萄糖通常既作为碳源，也可作为能源。(2)筛选分解尿素的细菌，通常只能用尿素作为唯一氮源，对于“NH4NO3”或“尿
20、素NH4NO3”均含有无机氮源。(3)KH2PO4 和 Na2HPO4 为微生物提供 P 元素和无机盐离子如钾离子和钠离子，还可作为缓冲剂保持细胞生长过程中 pH稳定。答案(1)脲酶 分解尿素的细菌是异养型生物，不能利用CO2 来合成有机物 为细胞生物生命活动提供能量，为其他有机物的合成提供原料(2)尿素 其他两组都含有 NH4NO3，能分解尿素的细菌和不能分解尿素的细菌都能利用 NH4NO3，不能起到筛选作用(3)为细菌生长提供无机营养，作为缓冲剂保持细胞生长过程中 pH 稳定精要点拨统计菌落数目的两种方法(1)显微镜直接计数法：原理利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的
21、样品中微生物的数量方法用计数板计数缺点不能区分死菌与活菌(2)间接计数法(活菌计数法)：原理当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌计算公式每克样品中的菌株数(CV)M，其中，C 代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V 代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M 代表稀释倍数操作设置重复组，增强实验的说服力与准确性。同时为了保证结果准确，一般选择菌落数在 30300 的平板进行计数分解纤维素的微生物的分离3(2014课标全国)植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。回答下列问题：(1)分解秸秆中
22、纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由 3种组分组成的复合酶，其中的葡萄糖苷酶可将_分解成_。(2)在含纤维素的培养基中加入刚果红(CR)时，CR 可与纤维素形成_色复合物。用含有 CR 的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的_。(3)为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基(成分见下表)：成分酵母膏无机盐淀粉纤维素粉琼脂CR 溶液水培养基甲培养基乙注：“”表示有，“”表示无。据表判断，培养基甲_(填“能”或“不能”)用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是_；培养基乙_(填“能”或“不能”)用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是_。解
23、析本题以纤维素分解菌的分离为背景，考查了相关酶的作用，纤维素的鉴定和微生物的分离。(1)葡萄糖苷酶可将纤维二糖分解成葡萄糖。(2)刚果红与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。(3)纤维素分解菌分离和鉴别培养基属于固体培养基，而培养基甲中没有琼脂，是液体培养基；要分离和鉴别纤维素分解菌，需要以纤维素为唯一碳源的培养基，培养基乙不具有选择的作用。答案(1)纤维二糖 葡萄糖(2)红 透明圈(3)不能 液体培养基不能用于分离单菌落 不能 培养基中没有纤维素，不会形成 CR纤维素红色复合物，即使出
24、现单菌落也不能确定其为纤维素分解菌精要点拨微生物的筛选与鉴别方法(1)微生物的筛选方法：单菌落挑取法利用平板划线法或稀释涂布平板法接种到固体平板培养基表面，直接根据微生物菌落的特征利用单菌落挑取的方法获得目的微生物选择培养法利用选择培养基对微生物进行选择培养，直接获得目的微生物鉴定培养法利用鉴别培养基使目的微生物菌落呈现特有的特征，然后筛选目的微生物(2)微生物的鉴别方法：菌落特征鉴别法根据微生物在固体平板培养基表面形成的菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等特征进行鉴别指示剂鉴别法如培养基中加入酚红指示剂，培养某种微生物后，培养基变红说明该种微生物能够分解尿素染色鉴别法如利用刚果红染色法，根据培
25、养基中出现以纤维素分解菌为中心的透明圈来筛选分解纤维素的微生物根据微生物特征，筛选特定微生物4(2018江苏)酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半，可作为饲料蛋白的来源。有些酵母可以利用工业废甲醇作为碳源进行培养，这样既可减少污染又可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母，并进行大量培养。下图所示为操作流程，请回答下列问题：(1)配制培养基时，按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，调节培养基的_，及时对培养基进行分装，并进行_灭菌。(2)取步骤中不同梯度的稀释液加入标记好的无菌培养皿中，在步骤中将温度约_(在 25、50 或 80 中选择)的培养基倒入培养皿混匀，冷凝后倒置培
26、养。(3)挑取分离平板中长出的单菌落，按步骤所示进行划线。下列叙述合理的有_。a为保证无菌操作，接种针、接种环使用前都必须灭菌b划线时应避免划破培养基表面，以免不能形成正常菌落c挑取菌落时，应挑取多个菌落，分别测定酵母细胞中甲醇的含量d可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度，获得甲醇高耐受株(4)步骤中，为使酵母数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和_供应。为监测酵母的活细胞密度，将发酵液稀释 1000 倍后，经等体积台盼蓝染液染色，用 2516 型血细胞计数板计数 5 个中格中的细胞数，理论上_色细胞的个数应不少于_，才能达到每毫升 3109个活细胞的预期密度。解析(1)配制培养基的操作步骤
27、为称量溶化定容调pH培养基的分装包扎灭菌，因此微生物的培养基配制好后应该先调节 pH，再分装。常见的灭菌方法有：干热灭菌、高压蒸汽灭菌、灼烧灭菌。培养基适宜用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。(2)在步骤中，待培养基冷却至 50 左右时进行倒平板。(3)在划线过程中，接种针、接种环使用前都必须灭菌，以防止杂菌污染，a 正确；划线时应避免划破培养基表面，否则将不能形成正常菌落，b 正确；该实验的目的是获得利用工业废甲醇作为碳源的酵母菌，不需要测定酵母菌中的甲醇含量，c 错误；培养基中的甲醇浓度越高，此种培养基中得以生存的酵母菌利用甲醇的能力越强，因此可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度，获得甲醇高耐受株，d
28、 正确。(4)酵母菌通过有氧呼吸大量繁殖，因此为使酵母数量迅速增加，培养过程中须保证充足的营养和氧气供应；台盼蓝是大分子物质，不能将活细胞染色，再根据 2516 型的血球计数板：1 毫升悬液中待测标本(菌体)总数80 小方格内菌体数/80400104稀释倍数。而台盼蓝与菌液等体积加入，因此要达到每毫升 3109个活细胞的预期密度，理论上无色细胞数应该不少于(3109)(1 000210440080)30 个。答案(1)pH 高压蒸汽(湿热)(2)50(3)a、b、d(4)氧气 无 30高考真题精选 1(2018课标全国)将马铃薯去皮切块，加水煮沸一定时间，过滤得到马铃薯浸出液。在马铃薯浸出液中
29、加入一定量蔗糖和琼脂，用水定容后灭菌，得到 M 培养基。回答下列问题：(1)M 培养基若用于真菌的筛选，则培养基中应加入链霉素以抑制_的生长，加入了链霉素的培养基属于_培养基。(2)M 培养基中的马铃薯浸出液为微生物生长提供了多种营养物质，营养物质类型除氮源外还有_(答出两点即可)。氮源进入细胞后，可参与合成的生物大分子有_(答出两点即可)。(3)若在 M 培养基中用淀粉取代蔗糖，接种土壤滤液并培养，平板上长出菌落后可通过加入显色剂筛选出能产淀粉酶的微生物。加入的显色剂是_，该方法能筛选出产淀粉酶微生物的原理是_。(4)甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定某一土壤样品中微生物的数量，在同一稀释倍
30、数下得到以下结果：甲同学涂布了 3 个平板，统计的菌落数分别是 110、140 和149，取平均值 133；乙同学涂布了 3 个平板，统计的菌落数分别是 27、169 和 176，取平均值 124。有人认为这两位同学的结果中，乙同学的结果可信度低，其原因是_。解析(1)M 培养基若用于真菌的筛选，说明 M 培养基能满足真菌的生长，而能抑制其他微生物的生长，链霉素是一种抗生素，可以抑制细菌的生长。加入了链霉素的培养基能筛选出真菌，该培养基属于选择培养基。(2)微生物生长需要多种营养物质，除氮源外，还需要碳源、无机盐、水以及特殊营养物质等。氮元素是蛋白质和核酸等生物大分子的组成元素，因此氮源进入细
31、胞后，可参与合成的生物大分子有蛋白质和核酸。(3)淀粉遇碘液会变成蓝色，筛选产淀粉酶的微生物，依据淀粉遇碘液显蓝色，产淀粉酶的菌落周围淀粉被水解，形成透明圈，再根据透明圈，来 筛选产淀粉酶的微生物。(4)乙同学结果不合理，因为 1 个平板的计数结果与另 2 个相差悬殊，结果的重复性差，不能简单地用其平均数作为最终结果。答案(1)细菌 选择(2)碳源、无机盐 蛋白质、核酸(3)碘液 淀粉遇碘液显蓝色，产淀粉酶的菌落周围淀粉被水解，形成透明圈(4)乙同学的结果中，1 个平板的计数结果与另 2 个相差悬殊，结果的重复性差2(2016课标全国)空气中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。某研究小
32、组欲用平板收集教室空气中的微生物，以了解教室内不同高度空气中微生物的分布情况。实验步骤如下：配制培养基(成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O)；制作无菌平板；设置空白对照组和若干实验组，进行相关操作；将各组平板置于 37 恒温箱中培养一段时间，统计各组平板上菌落的平均数。回答下列问题：(1)该培养基中微生物所需的氮来源于_。若要完成步骤，该培养基中的成分 X 通常是_。(2)步骤中，实验组的操作是_。(3)若在某次调查中，某一实验组平板上菌落平均数为 36 个/平板，而空白对照组的一个平板上出现了 6 个菌落，这种结果说明在此次调查中出现了_现象。若将 30(即 366)个/平板作为本组
33、菌落数的平均值，该做法_(填“正确”或“不正确”)。解析(1)依据配制培养基的成分可知：该培养基中微生物所需的氮来源于牛肉膏、蛋白胨。因为该实验是“用平板收集教室空气中的微生物”，所使用的培养基应为固体培养基，配制时，需加入凝固剂，据此推知：该培养基中的成分 X 通常是琼脂。(2)依题意可知，该实验的目的是：用平板收集教室空气中的微生物，以了解教室内不同高度空气中微生物的分布情况。所以步骤中，实验组的操作是：将各实验组平板分别放置在教室不同高度的位置上，开盖暴露一段时间，以收集教室不同高度空气中的微生物。(3)设置的空白对照组，在整个实验过程中没有用来收集空 气中的微生物，若空白对照组的一个平
34、板上出现了 6 个菌落，说明培养基的配制是不成功的，在此调查中出现了污染现象，所以若将 30(即 366)个/平板作为本组菌落数的平均值，该做法不正确。答案(1)牛肉膏、蛋白胨 琼脂(2)将各实验组平板分别放置在教室不同高度的位置上，开盖暴露一段时间(3)污染 不正确3(2015课标全国)已知微生物 A 可以产生油脂，微生物 B可以产生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生产。回答有关问题：(1)显微观察时，微生物 A 菌体中的油脂通常可用_染色。微生物 A 产生的油脂不易挥发，可选用_(填“萃取法”或“水蒸气蒸馏法”)从菌体中提取。(2)为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物 B 的单菌落，
35、可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样，并应选用以_为碳源的固体培养基进行培养。(3)若要测定培养液中微生物 B 的菌体数，可在显微镜下用_直接计数；若要测定其活菌数量，可选用_法进行计数。(4)为了确定微生物 B 产生的脂肪酶的最适温度，某同学测得相同时间内，在 35、40、45 温度下降解 10 g 油脂所需酶量依次为 4 mg、1 mg、6 mg，则上述三个温度中，_ 条件下该酶活力最小。为了进一步确定该酶的最适温度，应围绕_ 设计后续实验。解析(1)脂肪可被苏丹()染液染成橘黄色(红色)；题干中说明微生物 A 产生的油脂不易挥发，则可以采用萃取法提取微生物 A 中的脂肪。(2)油脂为有
36、机化合物，富含 C 元素，故为了从自然界获得能够分解油脂的单菌落，应以油脂为唯一碳源来配制培养基。在该培养基上，能分解油脂的微生物可以正常生长，其他微生物不能正常繁殖。(3)可利用血球计数板计数法测定菌液中的微生物数量，计数时，活菌和死亡的细菌都会被计数，所以测定培养液中的活菌数应采用稀释涂布平板法。(4)在 45 时，降解 10 g 油脂所需酶的数量最大，则该温度下酶活性最低；由题干可知，40 时分解 10 g 油脂所需的酶的数量最少。应在 40 左右范围内设置不同温度梯度来探究酶的最适温度。答案(1)苏丹(或苏丹)萃取法(2)油脂(3)血细胞计数板 稀释涂布平板(4)45 40请做：题组层级快练（三十九）