1、1(2018成都龙泉二中月考)幽门螺杆菌简称 Hp，主要寄生在胃幽门、胃窦等附近的黏膜上，是人类至 21 世纪初唯一的已知胃部细菌。Hp 可产生高活性的脲酶，可将尿素分解成氨和 CO2。(1)制备幽门螺杆菌培养基时，需将培养基的 pH 调至_性。培养皿进行灭菌的常用方法是_。倒平板时要待平板冷凝后，将平板倒置，其主要原因是_。(2)图表示的是用_法接种培养后得到的结果。图是在纯化过程中通过_法分离培养的结果，在培养基上接种时接种环需通过灼烧灭菌，完成图中划线操作，至少需要灼烧接种环_次。(3)为检测某人体内是否感染了 Hp，可让其服用 14C 标记的_，定时收集呼出的气体，通过分析呼气中 14
2、C 标记的 CO2 的含量即可判断。该检测方法和卡尔文研究光合作用的方法一样可称为_法。答案(1)酸 干热灭菌 防止培养皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染(2)稀释涂布平板 平板划线 4(3)尿素 同位素标记(或同位素示踪)答案 解析(1)因为幽门螺杆菌生活在胃部，所以其培养基的 pH 应偏酸性。对培养皿玻璃器皿可以采用干热灭菌法。平板冷凝后，将平板倒置的目的是防止培养皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染。(2)由图分析可知菌落均匀分布，所以是利用稀释涂布平板法接种的，而图是利用平板划线法接种的，在每次接种前和最后接种后都要对接种环进行灭菌，由图可知划线 3 次，所以至少需要灼烧 4 次。(3)因为
3、 Hp 可产生高活性的脲酶，所以可以让病人服用 14C 标记的尿素，尿素会被分解为二氧化碳和氨，定时收集呼出的气体，通过分析呼气中14C标记的 CO2 的含量即可判断。该方法利用了同位素标记法。解析 2(2018四川双流中学月考)莠去津是一种含氮的有机除草剂，在土壤中不易降解。为修复被莠去津污染的土壤，科研人员通过如图所示过程选育可高效降解莠去津的细菌(目的菌)。结合所学知识，回答下列问题：(1)培养皿中的培养基比培养瓶中的培养基多添加了_作为凝固剂，从功能上讲，这两种培养基都属于_培养基。若过程使用的是平板划线法，则对接种环常用的灭菌方法是_。(2)分解莠去津的微生物属于_(填“自养”或“异
4、养”)微生物，培养若干天后，应选择培养液中莠去津含量_的培养瓶进行过程。为了避免杂菌污染，接种操作需要在_附近进行。图中培养过程重复多次的主要目的是_。(3)若要获得更高效分解莠去津的微生物，常用的方法是_。答案(1)琼脂 选择 灼烧灭菌法(2)异养 最少 酒精灯火焰 选择最高效的目的菌(3)诱变育种答案 解析(1)琼脂是固体培养基中的凝固剂，从功能上讲，这两种培养基都属于选择培养基，对培养基灭菌常用的方法是高压蒸汽灭菌法，对接种环常用的灭菌方法是灼烧灭菌法。解析(2)莠去津是一种含氮的有机除草剂，只能利用现成的有机物作为碳源和能源的微生物属于异养型微生物。在选育过程中，因为目的菌能够分解莠去
5、津，所以应该选择培养液中莠去津含量最少的培养瓶进行下一步接种，为了防止杂菌污染，接种操作应在酒精灯火焰旁进行，因为初选出来的培养瓶中可能不止一种微生物能够分解莠去津，所以要通过固体培养基进行纯化，而多次重复培养过程的目的就是选育最高效的目的菌。(3)若要获得更高效分解莠去津的微生物，常用的方法是用诱变处理使其发生基因突变，即诱变育种。解析 3(2018安徽马鞍山质检)为了获得耐热耐辐射微生物资源，某生物兴趣小组在新疆库木塔格沙漠某区域取样，利用常规平板分离方法进行分离培养，定向筛选出耐高温耐辐射菌株，实验流程如下，分析并回答下列问题：(1)生 物 兴 趣 小 组 选 择 在 该 区 域 取 样
6、 的 原 因 是_。(2)配 制 LB 肉 汤 培 养 基 需 添 加 一 定 量 的 NaCl，其 目 的 是_，对 LB 肉汤培养基一般采用_灭菌；驯化培养过程中，对活菌纯化并计数的方法是_，测得的活菌数往往比实际值_，原因是_。(3)某同学为探究已纯化的菌株能否分解纤维素，他将此菌株接种在以纤维素为唯一碳源的培养基上，一段时间后，培养基上出现了菌落，该同学认为此菌株能分解纤维素，但其他的同学并不认同他的观点，你认为他们的理由是_。答案(1)该区域温度较高、遭受辐射较强(2)为微生物提供无机盐(或为微生物提供无机盐，调节渗透压)高压蒸汽 稀释涂布平板法 低 当两个或多个细胞连在一起时，平板
7、上只能观察到一个菌落(3)实验缺少空白对照；操作不规范答案 解析(1)根据筛选目的菌株的特点，生物兴趣小组之所以选择在该区域取样是因为该区域温度较高、遭受辐射较强。(2)培养基中添加一定量的 NaCl，其作用是为微生物提供无机盐，调节渗透压；对培养基一般采用高压蒸汽灭菌法灭菌；驯化培养过程中，对活菌纯化并计数的方法是稀释涂布平板法，这种方法测得的活菌数往往比实际值低，是因为涂布培养时常常存在两个或多个细胞连在一起，而平板上只能观察到一个菌落。解析(3)为探究已纯化的菌株能否分解纤维素，将此菌株接种在以纤维素为唯一碳源的培养基上，一段时间后，培养基上出现了菌落。结合实验设计要遵循对照实验的原则分
8、析，该同学的实验设计中缺乏空白对照组，即不接种该筛选菌株，培养基中是否会出现菌落产生。此外，该同学未设置重复组，也可能会由于操作不规范等偶然因素导致培养基上出现菌落。解析 4(2018齐鲁名校二联)大肠埃希菌，俗称大肠杆菌。是人和动物肠道中的正常栖居菌。自来水一旦被它污染，就有可能引发肠道传染病，甚至流行病。因此，必须对自来水进行严格的检测，以确保饮水安全。我国规定 1000 mL 自来水中的大肠杆菌数不得超过 3 个。某同学欲对家中自来水中大肠杆菌含量是否达标，对饮用水中大肠杆菌进行了培养、计数和鉴定。回答下列问题：(1)实验前应进行无菌处理。将漏斗、培养皿、三角瓶和镊子等进行_灭菌。培养基
9、进行_灭菌。对自来水龙头进行_灭菌。(2)为测定大肠杆菌的数目，将已知_的水过滤后，将滤膜放在培养基上培养，注意滤膜与培养基完全贴紧，不能有_。可根据培养基上_的数目，计算出水样中大肠杆菌的数目。(取三份样品求平均值)(3)为了鉴定大肠杆菌，在培养基中应加入_。在该培养基上，大肠杆菌的菌落呈现_色。答案(1)干热(或高压蒸汽)高压蒸汽 灼烧(2)体积 气泡 菌落(3)伊红美蓝 黑答案 解析(1)微生物培养过程中要注意防止杂菌污染，培养基常用高压蒸汽灭菌法进行灭菌，漏斗、培养皿、三角瓶和镊子等进行干热或高压蒸汽灭菌，而对自来水龙头进行灼烧灭菌。(2)(3)欲测定饮用水中大肠杆菌数目，将已知体积的
10、水过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养基上，大肠杆菌的菌落呈现黑色，注意滤膜与培养基完全贴紧，不能有气泡；可根据培养基上菌落的数目，计算出水样中大肠杆菌的数目。解析 5(2018湖南师大附中模拟)聚乙烯醇(PVA)是存在于化工污水中的一种难以降解的大分子有机物，PVA 分解菌能产生 PVA 酶分解 PVA，PVA 与碘作用时能产生蓝绿色复合物，当 PVA 被分解时蓝绿色复合物消失，形成白色透明斑，请回答下列问题：(1)下表是筛选能高效分解 PVA 的细菌的培养基配方，X 物质最可能为_。实验中还应设置完全培养液对照组，将菌液稀释相同的倍数，通过比较菌落数目，说明选择培养基具有筛选作用。(2)若将10
11、0 mL含有PVA分解菌的土壤样品溶液稀释104倍后，取0.1 mL稀释液均匀涂布在选择培养基表面，测得菌落数的平均值为 160 个，空白对照组平板上未出现菌落，则 100 mL 原菌液中有 PVA 分解菌_个，该方法的测量值与实际值相比一般会_(填“偏大”“偏小”或“相等”)。(3)要鉴定分离出的细菌是否为 PVA 分解菌，培养 PVA 分解菌的培养基中除了加入必需的营养物质外还需要加入_，用于鉴别 PVA 分解菌。若用上述培养基比较不同菌株降解 PVA 能力的大小，请用简洁的语言写出设计思路：_。(4)对于挑选出的 PVA 分解菌，应当接种在_培养基上培养，长成菌落后，置于_冰箱中做临时保
12、藏。若要长期保藏，则需采用_法。答案(1)琼脂(2)1.6109 偏小(3)碘 配置相同 PVA 浓度的培养基来培养不同菌株，一定时间后通过测定白色透明圈大小来确定不同菌株降解 PVA 能力的大小(4)固体斜面 4 甘油管藏答案 解析(1)分析题意可知，表格是筛选出能高效分解 PVA 的细菌的培养基配方，应该是固体培养基，所以 X 物质最可能是琼脂；由于完全培养液中任何微生物都可以生长，因此对照组培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，从而说明选择培养基具有筛选作用。(2)若将100 mL含有 PVA分解菌的土壤样品溶液稀释104倍后，取0.1 mL稀释液均匀涂布在选择培养基表面，
13、测得菌落数的平均值为 160 个，空白对照 组 平 板 上 未 出 现 菌 落，则 100 mL 原 菌 液 中 PVA 分 解 菌 有：1600.11041001.6109 个；由于两个或多个细菌聚集在一起只能观察到一个菌落，因此该方法的测量值与实际值相比一般会偏小。解析(3)根据题意可知，“PVA 与碘作用时能产生蓝绿色复合物，当 PVA 被分解时蓝绿色复合物消失，形成白色透明斑”，因此要鉴定分离出的细菌是否为 PVA 分解菌，可在培养 PVA 分解菌的培养基中加入碘用于鉴别 PVA 分解菌；若用上述培养基比较不同菌株降解 PVA 能力的大小，可以用含相同PVA 浓度的上述培养基来培养不同
14、菌株，一定时间后，通过测定白色透明斑的大小(或直径)来确定不同菌株降解 PVA 能力的大小。(4)对于挑选出的 PVA 分解菌，应当接种在固体斜面培养基上培养，长成菌落后，置于 4 冰箱中做临时保藏。若要长期保藏，则需要采用甘油管藏法。解析 6(2018哈三中模拟)回答下列有关土壤中微生物分离的问题：(1)为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择_(填“尿素”“NH4NO3”或“尿素NH4NO3”)作为氮源，不选择其他两组的原因是_。(2)用来筛选分解尿素细菌的培养基含有 KH2PO4 和 Na2HPO4，其作用有_(答出两点即可)。(3)为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单
15、菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基(成分见下表)：注：“”表示有，“”表示无。据表判断，培养基甲_(填“能”或“不能”)用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是_；培养基乙_(填“能”或“不 能”)用 于 分 离 和 鉴 别 纤 维 素 分 解 菌，原 因 是_。答案(1)尿素 其他两组都含有 NH4NO3，能分解尿素的细菌和不能分解尿素的细菌都能利用 NH4NO3，不能起到筛选作用(2)为细菌生长提供无机营养，作为缓冲剂保持细胞生长过程中 pH 稳定(3)不能 液体培养基不能用于分离单菌落 不能 培养基中没有纤维素，不会形成 CR纤维素红色复合物，即使出现单菌落也不能确定其为纤维素分解菌答案 解析
16、(1)为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择尿素作为唯一氮源。不选择其他两组的原因是：其他两组都含有 NH4NO3，能分解尿素的细菌和不能分解尿素的细菌都能利用 NH4NO3，不能起到筛选作用。(2)用来筛选分解尿素细菌的培养基含有 KH2PO4 和 Na2HPO4，其作用有：KH2PO4 和 Na2HPO4，可构成缓冲对维持培养基中的 pH 稳定，同时可作为无机营养提供给细菌(或为细菌生长提供无机营养，作为缓冲剂保持细胞生长过程中 pH 稳定)。解析(3)培养基甲中没有凝固剂琼脂，为液体培养基，而液体培养基不能用于分离单菌落，因此培养基甲不能用于分离和鉴别纤维素分解菌。培养基乙中没
17、有纤维素，不会形成 CR纤维素红色复合物，即使出现单菌落也不能确定其为纤维素分解菌，所以培养基乙不能用于分离和鉴别纤维素分解菌。解析 7(2018安徽六安一中三模)石油是人类重要的化工原料之一，其在给人类生产生活带来便利的同时也对陆地和海洋造成污染，下图是科研工作者分离能分解石油污染物的假单孢杆菌的过程。请根据流程图回答下列问题：土壤取样A梯度稀释涂布到培养基上筛选目的菌株(假单孢杆菌)(1)A 过程为_，目的是增加假单孢杆菌的浓度，该培养基中应当以_为唯一碳源。该实验过程中需要设置完全培养液对照组，将菌液稀释相同的倍数，对照组培养基上生长的菌落数目应明显_(填“多于”或“少于”)选择培养基上
18、的菌落数目，从而说明选择培养基具有筛选作用。(2)实验中需要用_对菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同浓度的菌液分别滴加到固体培养基的表面，用_(器具)涂布均匀并进行培养，以便获得单个菌落。(3)若实验中用 103 倍的 0.1 mL 的稀释液分别涂布三个平板，培养后分别形成了 98、100 和 102 个菌落，则每毫升原样液中含有假单胞杆菌_个，实 际 值 一 般 要 比 该 测 量 值 偏 大 的 原 因 是_。答案(1)扩大培养(或选择培养)石油 多于(2)无菌水 涂布器(3)1106 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落答案 解析(1)图中 A 过程为扩大培养(或选择
19、培养)，以增加假单胞杆菌的浓度；由于要分离能分解石油污染物的假单孢杆菌，所以该培养基中应当以石油为唯一碳源。由于完全培养液中任何微生物都可以生长，因此对照组培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的菌落数目，从而说明选择培养基具有筛选作用。(2)根据流程图可知本实验采用稀释涂布平板法接种，包括系列稀释和涂布平板两个过程，涂布平板之前需要用无菌水将菌液进行一系列的浓度梯度稀释，然后将不同浓度的菌液分别滴加到固体培养基的表面，用涂布器涂布均匀并进行培养。解析(3)根据题意可知，三个平板上生长的平均菌落数 C(98100102)3100 个，涂布平板时所用的稀释液的体积 V0.1 mL，稀释倍数
20、 M103倍，所以每毫升原样液中含有假单胞杆菌数(CV)M(1000.1)1031106 个；当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，所以实际值一般要比该测量值偏大。解析 8(2018黑龙江大庆二模)某生物兴趣小组想通过以下两种方法来检测自来水中大肠杆菌的含量。请根据图中信息回答下列问题：(1)方法一是通过_(方法)、方法二是通过_(方法)来测定自来水中大肠杆菌的含量。(2)方法一中从不同稀释液中分别取 0.1 mL 菌液滴加到_培养基表面，通过统计培养基上_的数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。该方法理论上统计值比实际值_(填“偏高”或“偏低”)，理由是_。(3)方法二中大肠杆
21、菌大小要_(填“大于”或“小于”)滤膜的孔径。因此对血浆(某些不耐高温的试剂)可以怎样除菌？_。答案(1)稀释涂布平板法 滤膜法(2)伊红美蓝 黑色菌落 偏低 两个或多个细胞(大肠杆菌)连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落(3)大于 用滤膜过滤答案 解析(1)据图所示，方法一是用移液管吸取 1 mL 的菌液注入 101倍稀释的试管中，然后从 101 倍稀释液中吸取 1 mL 稀释液，注入 102 倍稀释的试管中、再将 102 倍稀释液中吸取 1 mL 稀释液，注入 103 倍稀释的试管中，此法为稀释涂布平板法；方法二是首先将一定量的水体样本注入滤膜过滤，经过过滤，水中的细菌则被留在滤膜上，将
22、滤膜贴于伊红美蓝培养基上培养，通过统计培养基上的菌落数进而计算出单位样本中的大肠杆菌的数量，该办法为滤膜法。解析(2)大肠杆菌在伊红美蓝培养基上培养，当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色，再与美蓝结合形成黑色菌落。方法一中从不同稀释液中分别取 0.1 mL 菌液滴加到伊红美蓝培养基表面，通过统计培养基上的黑色菌落数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。如果两个或多个大肠杆菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此该方法理论上统计值比实际值偏低。(3)滤膜法是让水中大肠杆菌留在滤膜上，不能从孔中漏下去，故方法二中大肠杆菌要大于滤膜的孔径；因此对血浆(某些不耐高温的试剂)可以用滤膜法除菌。解析