1、浙科版2019版总复习选择性必修三第一节 体液调节是通过化学信号实现的调节 第一节 体液调节是通过化学信号实现的调节 第二节 神经系统通过下丘脑控制内分泌系统 第二节 神经系统通过下丘脑控制内分泌系统 第31课时 植物细胞工程第十单元 生物技术工程1.细胞工程（1）概念：是按照一定的设计方案，借助工程学的方法或技术，以生物组织、细胞和细胞器为对象进行操作，在细胞水平上改造生物遗传特性，以获得（目的）特定的细胞产物、细胞、组织、器官或新生物体的技术。考点一 植物组织培养技术 原生质体融合涉及包括：原生质体培养、外源基因导入（基因工程）、原生质体融合（细胞融合）、植物组织培养等多种技术，培养具有特
2、定性状的新植株的全过程。（2）类型：按技术类型可分为细胞和组织培养、细胞融合、核移植技术等；按生物类型可分为植物细胞工程和动物细胞工程等。（3）基础：动物细胞工程的基础技术：动物细胞培养植物细胞工程的基础技术：植物组织培养2植物细胞的全能性发育的全能性：可以分化为任何一种组织细胞（胚胎干细胞就具有发育的全能性）（无菌）分化程度低的细胞分化程度高的细胞。受精卵配子体细胞。植物细胞动物细胞。例题1下列关于植物细胞全能性的描述错误的是（）.植物细胞的全能性比动物细胞更容易表达 .不同种类的植物之间细胞全能性的表达程度不相同 .同种植物的不同基因型个体之间细胞全能性的表达程度相同 .某些植物的再生植株
3、，多次继代培养后会丧失细胞全能性的表达能力 C3植物组织培养技术（细胞培养）培养过程：接种外植体诱导产生愈伤组织诱导生芽诱导生根移栽成活脱分化：离体条件下已分化的细胞经过诱导，失去特有的结构和功能（去掉分化的状态），重新获得分裂能力称为脱分化。（不需要光）愈伤组织：脱分化的细胞不断分裂增殖，产生无组织结构、松散的薄壁细胞团。（相对未分化的细胞）再分化：愈伤组织细胞在一定条件下，可重新分化为各种类型细胞，进而形成芽或根等，再生出新的植株。（需要光照）再分化属于细胞的分化过程,脱分化不属于细胞分化的过程,而是摆脱分化恢复未分化状态。当同时使用生长素和细胞分裂素时，二者用量的比例影响植物细胞的发育方
4、向（影响细胞分化的因素：营养物质和植物生长调节剂的种类和比例）例题2下图是利用三倍体香蕉的茎尖培养脱毒香蕉植株的过程示意图，下列叙述正确的是（）过程中发生了有丝分裂和减数分裂 阶段需要生长素而阶段仅需要细胞分裂素 阶段细胞增殖能力强，细胞分化速度快 阶段的细胞高度液泡化，排列疏松而无规则 D形成完整植株途径：途径1：茎尖或带芽（叶）的茎段幼苗因腋芽或顶芽已分化出分生组织可不经愈伤组织阶段，直接生成一株幼苗；当培养基中细胞分裂素浓度较高时，则有利于腋芽或顶芽形成丛状苗。由愈伤组织再分化形成完整植株途径2：（器官发生途径）：外植体分生细胞愈伤组织再分化组织器官（先在一种培养基上诱导生芽，再在另一种
5、培养基上形成根）完整植株途径3：（体细胞胚发生途径）：外植体分生细胞愈伤组织胚状体（类似种子胚的结构）完整植株例 3.幼 苗 茎 段 带 叶，就 会 带 有 _，也 就 有 了 分 生 组 织，所 以 不 通 过_阶段就可直接形成丛状苗。过程应在_(从具体功能角度)培养基中进行，全过程对光照的要求是_(A.早期每天24 h光照，后期每天24 h黑暗 B.每天一定时长的光照 C.早期每天24 h黑暗，后期每天24 h光照 D.每天24 h黑暗)。腋芽(或芽)愈伤组织(或脱分化)发芽解析 幼苗茎段带叶，就会带有腋芽，也就有了分生组织，所以不通过脱分化阶段就可直接形成丛状苗。过程应在发芽培养基中进行
6、，全过程需要每天一定时长的光照。B例4.2017浙江11月（二）回答与植物克隆和动物克隆有关的问题:(1)利用植物愈伤组织获得再生植株主要有两条途径：一是由愈伤组织的细胞先分化产生芽和根后再形成一个完整植株的_途径，二是由愈伤组织细胞产生胚状体后再萌发形成完整植株的胚胎发生途径。另外也可不通过愈伤组织阶段而直接采用腋芽带的茎段培养成丛状苗，再诱导生根获得再生植株，其原因是腋芽中存在_。(2)利用植物克隆培育新品种，一方面可利用带有目的基因的_侵染植株，或通过_的方法导入植物细胞、组织或器官获得转基因，另一方面利用异源植株的_ 进行融合产生杂种植株，或利用异源植株在试管内进行_，对其产生的胚进行
7、培养产生杂种植株。(3)下列属于植物克隆和动物克隆共有培养方法是（）A悬浮培养、器官培养B贴壁培养、传代培养C器官培养、愈伤组织培养D原生质体培养、传代培养器官发生分生组织农杆菌显微注射原生质体受精A小思考：种子发育成植株体现了全能性吗？【答案】没有。植物种子中的胚已完成了早期发育，相当于新植物体的幼体，没有体现出细胞具有发育成完整植株的潜能。植物进行有性生殖时，亲本产生的精子和卵细胞结合形成合子（受精卵）。在种子形成过程中，合子经细胞分裂、分化，从球形胚、心形胚、鱼雷胚到成熟胚，由合子发育成的胚称为合子胚。在种子萌发过程中，合子胚发育成完整的植株。有性生殖增加了后代的变异性。体细胞胚虽经历了
8、与合子胚相似的发育过程，但其来源不是合子。体细胞胚可由体细胞分裂分化而来，也可由生殖细胞不受精（如花粉细胞）直接分裂、分化而来；可由外植体经愈伤组织再分化产生，也可不经愈伤组织阶段直接在外植体上发生。培养条件：适应的温度、无菌条件、培养基中适宜浓度和配比的植物激素、充分而全面的营养物质。（1）植物组织培养是在严格的无菌条件下进行的。外植体表面消毒：一定浓度的次氯酸钠（钙）、氯化汞和酒精是较常用的消毒剂。多种药剂配合使用消毒外植体，往往具有良好的效果。外植体经消毒后，需要用无菌水多次冲洗，以避免消毒剂长时间作用产生毒害作用。接种器具和培养基的灭菌：一般用高压蒸汽灭菌。培养基中若需要添加在高温灭菌
9、条件下容易被破坏分解的活性物质，则需要将该物质过滤除菌后再在无菌条件下加入已灭菌的培养基中。接种室和操作台的灭菌：常利用紫外灯照射灭菌。在超净工作台中进行外植体的消毒、切割和接种。植物组织培养所需要提供的条件（2）.培养基能为离体植物材料提供适宜的营养条件水,无机盐，有机营养成分，琼脂，植物激素（3）.植物激素调控细胞脱分化和再分化过程（生长素和细胞分裂素）思考：实验用人工合成的激素，而不用植物中存在的天然激素，为什么？天然植物激素在植物体内都有相应的使之分解的酶，所以作用的时间短。而人工合成的植物激素类似物，在植物体内没有使之分解的酶，作用的时间长，效果显著，生产成本低。（1）生长素和细胞分
10、裂素的用量 生长素和细胞分裂素的比值 作用效果 大 促进根的分化,抑制芽的形成 小 促进芽的分化,抑制根的形成 适中 促进愈伤组织的形成 原理：通过调节激素的比例可控制菊花外植体的生长发育发芽培养基：含细胞分裂素相对较多和生长素相对较少：MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L生根培养基：含有一定浓度生长素的培养基：MS+NAA0.1mg/L4.活动：菊花的组织培养及幼苗的移栽例题5将无根的非洲菊幼苗转入无植物激素的培养基中，在适宜的温度和光照等条件下培养一段时间后，应出现的现象是 答案：B（2）程序：首先用含细胞分裂素相对较多和生长素相对较少的发芽培养基培养菊花茎段，使其长出较多的
11、丛状苗。然后将丛状苗用含有一定浓度生长素的培养基分株培养，使其生根，再将生根的试管植株移至草炭土或蛭石中继续生长，苗健壮后可移栽定植。炼苗移栽目的要求（1）.探究植物激素在菊花的组织培养中的作用。（2）.接种培养菊花外植体使其长出丛状苗，接种菊花试管苗进行生根培养。（3）.尝试用无土栽培技术培养菊花试管苗。材料用具盆栽菊花，已灭菌的发芽培养基和生根培养基，75%酒精，无菌水，10%次氯酸钠(或0.1%氯化汞)，0.5mg/mL的NAA母液，0.5mg/mL的6-BA母液，洗涤灵稀释液，酒精灯，培养瓶，橡皮筋，记号笔，火柴，内装75%酒精的广口瓶，小块纱布，镊子，剪刀，解剖刀，灭菌的培养皿或无菌
12、纸，200mL及 50mL烧杯，废物缸，无土栽培育苗盘，报纸，喷壶，一定量的珍珠岩和蛭石，高压灭菌锅等。用于接种的无菌纸的制作方法：用报纸或牛皮纸将若干张适当大小的纸包起来，经高压灭菌锅灭菌后，放入干燥箱中烘干备用。（分割外植体在无菌纸上）洗涤灵稀释液（去污、乳化可除掉水果蔬菜表面上农药中的油性成分）母液：将大量元素、微量元素和有机成分分别配成浓度为配方的5-10倍的溶液即为母液，用时稀释。（减少每次配制培养基的麻烦及减少称量微量试剂的误差。）1.菊花外植体的接种与培养（1）提前打开接种室和超净工作台的紫外灯，2030min后关闭，打开超净工作台的风机，510min后进入接种室。（2）洗手（3
13、）75%酒精擦拭双手、台面及实验用具。（4）准备无菌纸（分割外植体在无菌纸上），点燃酒精灯，镊子灼烧灭菌后，用其夹取包在牛皮纸中的无菌纸，平铺工作台面上。（5）外植体消毒：将带芽的菊花枝条剪成一定大小，在洗涤灵稀释液中浸泡2min，用流水冲洗干净后，在75%酒精中消毒30s，再用流水冲洗后置于10%次氯酸钠溶液中消毒10min，或者在0.1%氯化汞溶液中消毒57min，然后用无菌水多次冲洗。消毒后的材料应放在无菌纸或灭菌培养皿中，待接种。方法步骤(6)分割外植体。如图2-11A和2-11B所示，取已在火焰灭菌后冷却的镊子和剪刀等器具在无菌纸上将菊花枝条切割为1cm左右的茎段，每一茎段至少带有一
14、个芽。也可根据自己的设计选择菊花的其他器官如叶片为外植体。(7)接种。装有培养基的瓶口用酒精擦拭消毒后，打开封口膜，让瓶口旋转通过火焰。如图2-11C所示，用灼烧后冷却的镊子夹取茎段插入培养基中，每瓶可放入13个茎段。接种后，瓶口过火焰，封上封口膜，标注接种日期和其他相关信息。(8)培养。将接种后的材料置于1825的条件下培养，每天光照1012h观察记录外植体的生长状况，直至得到菊花小植株。在愈伤组织的诱导阶段往往要避光培养,有利于细胞脱分化产生愈伤组织(如果是在光照条件下,容易分化产生维管等组织,不利于产生大量的愈伤组织)。当愈伤组织分化出芽和叶时,一定要有光照,有利于叶片内叶绿素的合成。2
15、.菊花试管苗的生根培养。(1)将装有试管苗培养瓶的瓶口用酒精擦拭消毒，打开瓶盖，瓶口过火焰，用灼烧后冷却的镊子夹取试管苗。(2)在无菌纸上将试管苗分割成单株后，接种在生根培养基中，每瓶培养基插苗45棵。(3)培养。将试管苗置于培养室培养。保持温度为2028，每天光照1012h，一星期后，观察试管苗生长情况。23星期后，试管苗长出健壮根系。3.菊花试管苗的移栽。(1)炼苗。将生根的组培苗从培养室取出，打开瓶口，放置12天，以提高试管苗对外部环境的适应能力。(2)培养基质的灭菌。将蛭石和珍珠岩分别用聚丙烯塑料袋装好，在高压灭菌锅中灭菌20min，冷却后备用。(3)育苗盘的准备。将蛭石和珍珠岩按1：
16、1的比例混合，倒入干净的育苗盘中，用木板刮平，喷水浸透基质，备用。(4)试管苗的清洗。用镊子将试管苗轻轻取出，去掉褐化部分，在清水中洗掉根部琼脂（以免琼脂发霉引起烂根），注意不要伤害根系。(5)试管苗的栽种。用镊子在基质上插孔，将试管苗有序地移栽至育苗盘中，轻轻覆盖、压实，待盘穴栽满后，喷水至培养基质处于水饱和状态。(6)培养及管理。将育苗盘置于温室中，覆盖保鲜膜以保湿，并定期打开保鲜膜通气。初期避免强光直射，待幼苗成活后除去保鲜膜。培养后期定期浇灌稀释的MS或其他营养液，为促其快速生长提供营养。定期观察和记录幼苗生长状况。5植物组织培养通过多种途径有效地提高生产效率（1）.组织培养可快速繁殖
17、植物（短时间可获得大量培养物）。根据培养过程，植物组织培养可以分为初代培养和继代培养。初代培养：是指从植物体上分离下来的外植体的第一次培养。初代培养获得的芽、胚状体等数量都不多，需要进一步增殖培养。继代培养：将初代培养获得的培养物转移到新的培养基上继续扩大培养。继代培养物可以不断继代培养，所以离体繁殖速度比常规方法通常要快数万倍。离体繁殖主要以营养器官为外植体，快速繁殖的过程就是植物克隆的过程，因此其本质是无性繁殖。优点：保持品种的优良性状为什么快速繁殖可以保持优良品种的遗传特性?提示 植物组织培养过程中细胞只进行有丝分裂,因此是一种无性繁殖的技术,无性繁殖的后代其遗传物质组成与亲代一致。（2
18、）.组织培养技术可用于植物脱毒原理：植物生长点附近的病毒浓度很低甚至无病毒。利用组织培养方法，取一定大小的植物茎尖 进行培养，再生的植株有可能不带病毒，从而获得脱病毒苗，再用脱病毒苗进行繁殖，则种植的作物就不会或极少发生病毒。（不带病毒而不是抗病毒）方法：将植物离体培养产生的体细胞胚、芽、愈伤组织等包埋在含有营养成分和保护功能的物质中制成的。结构：包括体细胞胚、人工胚乳和人工种皮三部分。人工胚乳含体细胞胚萌发所需的营养成分和植物激素，除草剂优点：（1）生产过程不受季节限制。（2）可以大量、快速繁殖优良品种。（3）对于生育周期长、育性不良且难于有性繁殖的植物，具有重要意义。（3）.植物培养技术可
19、用于生产人工种子原理：通过植物细胞、组织的培养来提取有价值的天然产物。实例：生产药物、食品、调料、香料、颜料等。（紫草素，人参皂甙）（4）.植物培养技术可用于细胞代谢产物的工业化生产细胞代谢产物的工业化生产需要将细胞培养成完整个体吗?提示 不需要。细胞产物的工业化生产往往需要将组织培养进行到愈伤组织阶段,然后对愈伤组织细胞进行悬浮培养。液体培养基具有进行通气培养、振荡培养的优点。由于在通气或在振荡的条件下，可消除养分吸收的阻碍以及增加供氧量，所以有利于细胞生长，提高细胞数量。往往用于将愈伤组织培养成单细胞。胚性细胞（P22-9）：将含有愈伤组织培养物的试管放在摇床上，通过液体悬浮培养分散成单细
20、胞，这些单细胞的细胞质丰富、液泡小而细胞核大，这就是胚性细胞 例6.紫草素是紫草细胞的代谢产物，可作为生产治疗烫伤药物的 原料。研究人员欲用植物组织培养技术通过培养紫草细胞生产紫草素。下列相关操作不合适的是（）.对作为外植体的紫草叶片进行消毒处理既保证其活性也可减轻污染 .培养基中要加入植物激素以保证已分化的植物细胞脱分化形成愈伤组织 .调节植物激素的种类和比例以保证愈伤组织再分化为胚状体 .在培养细胞的过程中要不断通入无菌空气以保证氧气的充足供应 C（5）.植物培养技术可用于作物新品种的培育细胞突变体的筛选：在组织培养过程中，培养物的细胞处于不断分裂状态，易受培养条件和外界压力的影响（如射线
21、，化学物质）而发生变异，筛选出有利个体。如：在培养基中加入不同浓度的NaCl或病原体的毒蛋白，诱发和筛选 了抗盐或抗病突变体。（不断提高NaCl溶液浓度筛选出抗盐能力强的突变体。）在培养基中加入不同浓度的赖氨酸类似物，筛选出抗赖氨酸类似物突变体。单倍体育种：花药（花粉）离体培养后获得单倍体，用秋水仙素处理单倍体体植株，使染色数目加倍，可获得纯合的可育育植株，大大缩短育种周期。转基因植物的克隆：将植物组织培养与基因工程技术相结合，将外源基因导入离体植物细胞，可以培育出抗逆、高产及优质的转基因植株。株植物体细胞杂交：下一节讲述例7.如图表示利用植物细胞工程对棉花进行改良的过程，表示实验过程，请据图
22、回答，下列说法正确的是（）.外源基因能够导入并大量复制的物质基础是所有的生物共用一套密码子 .过程能定向改变原生质体的遗传特性 .过程只能通过液体悬浮培养技术实现 .基因工程技术与花药离体培养技术相结合可快速获得纯合棉花植株 B过程脱分化用的是固体培养基考点二 植物体细胞杂交技术 1.获得原生质体的具体方法（1）自然界的材料，先进行消毒处理，酶溶液用G6玻璃砂漏斗过滤灭菌。将材料放入0.50.6 molL1的甘露醇溶液环境中，用纤维素酶和果胶酶处理，前者目的是使细胞处于微弱的质壁分离状态，以利于完整的原生质体的释放，后者主要目的是消化除去细胞壁，获得球形的原生质体。（2）原生质体活性的鉴定方法
23、：观察是否有胞质环流；染色法；以氧的摄入为指标，表示呼吸强度。不能用质壁分离？（3）影响原生质体分离的数量和质量的因素：材料的种类和生理状态；酶的种类、酶解时间（吸水）和温度；酶液的浓度；分离与纯化的方法等。（4）原生质体培养时的培养基渗透压应低于原生质体分离时的渗透压，原生质体培养时，其再生出细胞壁是其能进行有丝分裂的前提。原生质体与原生质层的区别(1)原生质体：细胞中有代谢活性的原生质部分，包括质膜、细胞质和细胞核。例如，去掉细胞壁的植物细胞等。(2)原生质层：包括质膜、液泡膜，以及两层膜之间的细胞质(细胞核、细胞液除外)，原生质层具有选择透性。一般成熟的植物细胞才具有原生质层。（二）回答
24、与基因工程和植物克隆有关的问题：（1）为了获取某植物叶片无菌的原生质体，先将叶片经表面消毒并去除下表皮，再将其置于经_处理的较高渗透压的混合酶液中。酶解后，经多次离心获得原生质体。然后测定该原生质体的活性，可采用的方法有_（答出2点即可）。然后将原生质体制成悬浮液，滴加在_上，用显微镜观察并计数。要判定原生质体是否已形成细胞壁，可用_法鉴别。(2)欲通过原生质体培养得到愈伤组织，从培养基的成分(除琼脂外)考虑，配制培养基时需要注意的主要方面是_。过滤灭菌红墨水染色法、渗透吸水法例8.真题2020浙江1月改编血细胞计数板质壁分离营养物质和植物生长调节剂的适当配比（3）若要获得已知序列的抗病基因，
25、可采用_或PCR的方法。为了提高目的基因和质粒重组的成功率，选择使用_，对含目的基因的DNA片段进行处理，使其两端形成不同的粘性末端，对质粒也进行相同的处理，然后用DNA连接酶连接形成重组质粒。通过在大肠杆菌中_，以获得大量的重组质粒，最终将其导入原生质体中。（4）原生质体在培养过程中，只有重新形成_后，才可进行有丝分裂。多次分裂形成的小细胞团可通过_或器官发生的途径再生植株。化学合成两种限制性核酸内切酶扩增细胞壁体细胞胚发生途径2.植物体细胞杂交技术(1)概念：将不同来源的植物体细胞，在一定条件下融合成一个杂种细胞，并把杂种细胞培育成新的植物体的技术。(2)原理：体细胞杂交利用了细胞膜的流动
26、性，杂种细胞培育成杂种植株利用了植物细胞的全能性。杂交的两个细胞用纤维素酶、果胶酶混合液处理细胞壁（酶解法）原生质体、经离心、振动、电刺激用聚二乙醇（PEG）诱导融合后的原生质体杂种细胞脱分化细胞分裂愈伤组织杂种植株再分化原生质体融合 植物组织培养 过程去壁 再生细胞壁（植物体细胞融合完成的标志，细胞才能分裂）过程(1)用酶解法获得原生质体。(2)通过一定的技术手段如电刺激、离心、振荡、聚乙二醇等诱导，实现原生质体的融合。(3)一个融合体系中的细胞并非均为杂种细胞，两个不同亲本的原生质体混合后经诱导融合，实际上得到的是各种原生质体的混合物，包括未融合的、部分融合的、同种细胞融合的、不同种细胞融
27、合的原生质体。意义：打破生殖隔离，克服远缘杂交的不亲和性，获得新品种。（没有产生新物种）植物体细胞杂交技术的应用(1)通过原生质体融合已获得多种植物种间、属间甚至是科间的杂种细胞、愈伤组织，有些还进而分化成苗。(2)在某些作物的野生种与栽培种之间的体细胞杂交方面也进行了大量的研究，希望将野生种的抗虫、抗病毒等有益性状转移到栽培种中。小思考：利用植物体细胞杂交的方法培育作物新品种过程中，遗传物质的传递是否遵循孟德尔的遗传规律？【答案】孟德尔的遗传规律发生在有性生殖的减数分裂过程中，而植物体细胞杂交过程中细胞增殖的方式是有丝分裂，没有减数分裂，故此过程遗传物质的传递不遵循孟德尔遗传规律。3.植物体
28、细胞杂交和有性杂交的辨析1.通过过程获得的植株,是否一定会表现出甲、乙的性状?为什么?不一定。杂种细胞培养过程中可能出现染色体的丢失、结构异常等情况,基因之间、基因与基因产物之间、基因与环境之间存在着复杂的相互作用,两种生物的基因结合到一个细胞中之后,不一定能按照原来的顺序表达。2.在植物体细胞杂交过程中,酶解法去除细胞壁、原生质体融合和植物组织培养三个阶段的主要原理分别是什么?酶的专一性、细胞膜的流动性和植物细胞的全能性。新教材新思考3.图中阶段都需要光照吗？4.若番茄细胞内有m条染色体，马铃薯细胞内有n条染色体，则“番茄马铃薯”细胞在有丝分裂后期含有多少条染色体？5.若杂种细胞培育成的“番
29、茄马铃薯”植株为四倍体，则此杂种植株的花粉经离体培养得到的植株属于几倍体植株？3.脱分化阶段不需要给予光照，再分化阶段需要给予光照，以利于叶绿素的形成。4.2(mn)条。5.单倍体植株。（二）某小组欲进行烟草原生质体分离与培养的研究，请回答：（1）原生质体的分离：在无菌条件才，取烟草无菌苗的叶片，放入含有0.5mol/L的甘露醇（维持较高渗透压）的_ 混合液处理，经过离心纯化后获得原生质体。原生质体的培养：将原生质体进行培养，重新长出细胞壁，形成胚性细胞，此时，应该_培养基中甘露醇的浓度，以利于胚性细胞继续培养形成细胞团，然后经两次途径形成再生植株。途径一：细胞团形成球形胚、_和胚状体，最好发
30、育成植株。途径二：细胞团增殖为愈伤组织，然后在发芽培养基上又到出芽，切割芽经过生根后形成完整植株。上述发芽培养基中含量相对较高的激素是_、胚性细胞的主要特点是_。（A.液泡小、细胞核小B.液泡大、细胞核大 C.液泡大、细胞核小D.液泡小、细胞核大）（3）为了对烟草的某些性状进行改良，分离得到两种烟草的原生质体，通过_方法将它们的遗传物质组合在一起，经培养获得具有新性状的再生植株，提取再生植株的DNA，采用_扩增相关基因，来鉴定遗传物质是否成功重组。例9.真题 2016年10月纤维素酶和果胶酶降低心形胚细胞分裂素D原生质体融合PCR例10.(2018温州3月选考模拟)菊花组织培养的部分过程如下图
31、。请回答：(1)过程利用_(填“较高”或“较低”)渗透压，使原生质体产量大幅提高，但存活率却因此而降低，分析降低的原因可能是_。过程细胞壁形成后，可逐渐_渗透压。较高过度失水死亡降低解析 过程获得原生质体需要在较高渗透压甘露醇中进行；若原生质体存活率低，可能是过度失水损伤或死亡。过程在形成细胞壁后，可逐渐降低渗透压。2018浙江4月（二）回答基因工程和植物克隆有关的问题：（1）将含某抗虫基因的载体和含卡那霉素抗性基因的载体 pBI121 均用限制性核酸内切酶EcoRI 酶切，在切口处形成_。选取含抗虫基因的 DNA 片段与切割后的 pBI121用 DNA 连接酶连接，在两个片段相邻处形成_，获
32、得重组质粒。（2）已知用 CaCl2 处理细菌，会改变其某些生理状态。取 CaCl2 处理过的农杆菌与重组质粒在离心管内进行混合等操作，使重组质粒进入农杆菌，完成_实验。在离心管中加入液体培养基，置于摇床慢速培养一段时间，其目的是_，从 而表达卡那霉素抗性基因，并大量增殖。（3）取田间不同品种水稻的幼胚，先进行_，然后接种到培养基中培养，幼胚发生_形成愈伤组织，并进行继代培养。用含重组质粒的农杆菌侵染愈伤 组织，再培养愈伤组织，以便获得抗虫的转基因水稻。影响愈伤组织能否成功再生出植株的因素有：培养条件如光温、培养基配方如植物激素配比、以及_（答 出 2 点即可）。黏性末端磷酸二酯键转化使 Ca
33、Cl2 处理过的农杆菌恢复细胞的正常状态消毒脱分化水稻的基因型、愈伤组织继代的次数2019年4月（二）回答与利用生物技术培育抗病品种有关的问题：（1）通过抗病性强的植株获取抗病目的基因有多种方法。现已获得纯度高的抗病蛋白（可作为抗原），可通过 技术获得特异性探针，并将 中所有基因进行表达，然后利用该探针，找出能与探针特异性结合的表达产物，进而获得与之对应的目的基因。（2）将上述抗病基因通过转基因的方法导入植物的分生组织可获得抗病性强的植株。若在试管苗期间用分子水平方法判断抗病基因是否表达，应检测 （A质粒载体 B转录产物C抗性基因D病原微生物）（3）植物细胞在培养过程中往往会发生 ，可利用这一特性筛选抗致病真菌能力强的细胞。筛选时在培养基中加入 。并将存活的细胞进一步培养至再生植株。若利用 培养建立的细胞系用于筛选，则可快速获得稳定遗传的抗病植株。（3）用抗病品种与高产品种进行杂交育种过程中，有时会遇到因胚发育中止而得不到可育种子的情况。若要使该胚继续发育获得植株，可采用的方法是 。单克隆抗体基因文库B变异高浓度致病真菌花粉离体胚的离体培养
