1、-1-本章整合-2-本章整合 知识网络 专题归纳-3-本章整合 专题归纳 知识网络 专题一 专题二 专题一 PCR 技术与分离蛋白质的比较 PCR 技术分离蛋白质实验原理利用 DNA 热变性原理体外扩增 DNA依据相对分子质量的大小不同或带电性质差异来分离蛋白质实验过程高温变性低温复性中温延伸点样电泳染色脱色制干胶板实验结果获得大量 DNA相对分子质量或带电性质不同的蛋白质得以分离实验意义解决了 DNA 研究中材料不足的问题为蛋白质的研究和利用提供了原材料-4-本章整合 专题归纳 知识网络 专题一 专题二 专题二 蛋白质分离方法的归纳蛋白质的分离应根据不同的性质选择合适的分离方法。性质分离方法
2、特点溶度蛋白质的盐析调节混合蛋白质溶液中的中性盐溶液浓度,可使各种蛋白质分段沉淀;主要影响因素有温度、pH 和蛋白质浓度溶度等电点沉淀法蛋白质在静电状态时颗粒之间的静电斥力最小,溶解度最小,最易形成沉淀物;各种蛋白质的等电点不同,可调节溶液 pH 达到某蛋白质的等电点;此法一般与盐析法结合使用低温有机溶剂沉淀法在含有蛋白质的混合液中加入一定量的溶于水的有机溶剂,可使多数蛋白质溶解度降低并沉淀析出,此法分离率比盐析高,但蛋白质易变性,应在低温下进行-5-本章整合 专题归纳 知识网络 专题一 专题二 分子大小透析和超滤透析法是利用半透膜将分子大小不同的蛋白质分开;超滤法是利用高压力或离心力,使水和
3、其他小分子溶质通过半透膜,而蛋白质留在膜内,从而达到分离的目的。此法可选择不同孔径的滤膜截留不同分子量的蛋白质离心法主要包括差速离心法和速度区带离心法(离心沉降法),主要根据蛋白质分子大小、形状不同来分离凝胶过滤层析这是根据分子大小分离蛋白质混合物的最有效方法之一,此法又称分子筛层析,比“网眼”大的不能进入网格,小的进入内部-6-本章整合 专题归纳 知识网络 专题一 专题二 所带电荷电泳在外界电场的作用下,带电粒子在电场中向与其自身所带电荷相反方向移动的现象;具有简单、快速、分离清晰、灵敏度高、样品用量少等优点,被广泛应用离子交换层析根据物质的酸碱度、极性及分子大小的不同进行分离的层析技术色谱凝胶过滤色谱法在存在多种离子、去污剂、尿素、盐酸胍、高或低离子强度、常温或低温条件下进行,适用于各种复杂的环境离子交换色谱法通常包括吸附、吸收、扩散、穿透、静电引力等复杂的物理化学过程亲和色谱法可在温和条件下操作,纯化过程简单、快速、分辨率高,对分离含量极少且性质不稳定的生物活性物质极为有效
