1、专题整合与评估知识建网答案速填：全能性愈伤组织杂种细胞微型繁殖原代培养 细胞核胚胎移植骨髓瘤细胞抗体要语必背1植物组织培养技术、植物体细胞杂交技术的理论基础都有细胞的全能性，后者还有细胞膜的流动性；动物细胞核移植技术的原理是动物细胞核的全能性。2人工诱导原生质体融合的方法有物理法(离心、振动、电激)和化学法(聚乙二醇处理)，而动物细胞融合还可以用灭活的病毒诱导。3植物分生区附近(如茎尖)的病毒极少，甚至无病毒，因此用分生区组织进行组织培养，再生的植株就不会或极少感染病毒。4动物细胞培养一般选用胚胎或幼龄动物的组织，细胞在培养过程中会出现细胞贴壁(生长)和接触抑制的现象。培养的条件包括：无菌、无
2、毒的环境，适宜的营养、温度和pH及气体环境。5杂交瘤细胞是由经免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合而成的，具有既能无限增殖又能产生专一抗体的能力。6制备单克隆抗体过程中第一次筛选是为了获得杂交瘤细胞，第二次筛选是为了获得能产生特定抗体的杂交瘤细胞。7单克隆抗体最主要的优点是特异性强、灵敏度高，并可大量制备。主要用途有：作为诊断试剂、用于治疗疾病和运载药物。知识整合促贯通一、细胞工程与基因工程的比较及动植物细胞工程的比较1细胞工程与基因工程的比较细胞工程和基因工程都可以突破物种间的遗传障碍，大跨度超越物种间的不亲和性，创造出人们所需要的新品种。但基因工程是在分子水平上进行的操作，基本过程一般要经过基
3、因操作的“四步曲”；细胞工程是在细胞水平或细胞器水平上进行的操作，所用的技术主要有植物组织培养、植物体细胞杂交、动物细胞培养和细胞核移植等。植物的体细胞杂交虽然能解决物种之间的不亲和性(生殖隔离)，但形成的新物种往往是不育的；基因工程不但可以突破物种间的遗传障碍，而且形成的新品种是可育的。例如，科学家将能分解不同烃类化合物的单孢杆菌的相关基因，转移到另一种单孢杆菌内，培育成能分解石油的“超级细菌”，这是基因工程的成果。但如果将三种假单孢杆菌融合或将其内的细胞器移入第四种假单孢杆菌体内，使其具有分解四种烃类化合物的功能，这样的生物技术应属于细胞工程。2植物细胞工程与动物细胞工程的主要区别植物细胞
4、工程动物细胞工程技术手段植物组织培养、植物体细胞杂交等动物细胞培养、动物细胞融合、单克隆抗体的制备、核移植等分散细胞的酶纤维素酶和果胶酶胰蛋白酶杂种细胞培养材料组织愈伤组织根、芽植物体原代培养传代培养培养基成分矿质元素、蔗糖、维生素、植物激素等葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等【典题精练1】下列关于细胞工程的叙述中，不正确的是()A细胞融合技术、细胞培养技术属于细胞工程涉及的技术范围B动物可通过细胞融合技术培育出新品种C植物细胞工程采用的各项技术手段的理论基础是细胞的全能性D植物组织培养是将植物细胞置于包含植物生长和发育所需的全部营养成分的固体培养基上进行培养的【解析】A项中各项工程学
5、手段是动物细胞工程中常用的技术手段；植物细胞工程的理论基础是细胞的全能性；植物组织培养需要离体培养，此时植物细胞不能自养，需要在固体培养基上培养，且培养基中含有植物生长和发育所需的各种营养成分；综上所述，A、C、D三项正确。同种动物可通过细胞融合技术得到融合细胞，但此类细胞全能性仍被抑制，不能发育成新个体，成为新品种。【答案】B【典题精练2】下列关于现代生物工程技术的应用，可以实现的是()A利用基因工程技术可获得符合生产要求的突变植株B利用细胞工程技术可以大量制备纯度高的抗流感病毒的抗体C利用动物细胞培养或植物组织培养技术，均可获得完整生物体D利用细胞工程技术，将两种二倍体植物的花粉进行细胞杂
6、交，可获得二倍体可育植株【解析】基因工程是利用原有基因进行的重组，不能产生突变植株，动物细胞培养只能形成细胞或器官，不能形成动物个体；将两种二倍体植物的花粉进行细胞杂交，由于远缘杂交不亲和，不能获得二倍体可育植株。【答案】B二、动物细胞工程技术之间的相互关系常见的动物细胞工程技术有动物细胞培养、动物细胞融合、核移植、克隆技术以及单克隆抗体的制备等，其中动物细胞培养是动物细胞工程技术的基础。动物细胞培养的理论依据是细胞的增殖；动物细胞融合的理论依据是细胞膜的流动性；克隆技术的理论依据是动物细胞核的全能性。克隆技术涉及的生物技术有核移植、胚胎移植和动物细胞培养；而单克隆抗体的制备涉及动物细胞的融合
7、和动物细胞的培养。动物细胞融合最主要的应用是单克隆抗体的制备。【典题精练3】“筛选”是生物工程中常用的技术手段，下列关于筛选的叙述错误的是()A基因工程中利用标记基因筛选出的细胞不一定含重组质粒B在诱变育种中需通过筛选才能得到数量较少的有利变异C植物体细胞杂交过程中，原生质体融合后获得的细胞需进行筛选D单克隆抗体制备过程中，第一次筛选的目的是获得足够数量的能产生所需抗体的杂交瘤细胞【解析】标记基因位于质粒上，基因工程中利用标记基因筛选出的细胞不一定都含有重组质粒，也可能只含有普通质粒，A正确；诱变育种的原理是基因突变，而基因突变具有不定向性和多害少利性，因此在诱变育种中需要通过筛选才能得到数量
8、较少的有利变异，B正确；植物体细胞杂交过程中，诱导原生质体融合后，可获得多种融合细胞，因此需要对获得的细胞进行筛选，C正确；单克隆抗体制备过程中，第一次筛选出的是杂交瘤细胞，第二次筛选出的是既能迅速大量增殖又能产生所需抗体的杂交瘤细胞，D错误。【答案】D【典题精练4】单纯疱疹病毒型(HSV)可引起水泡性口唇炎。利用杂交瘤技术制备出抗HSV的单克隆抗体可快速检测HSV。回答下列问题：(1)在制备抗HSV的单克隆抗体的过程中，先给小鼠注射一种纯化的HSV蛋白，一段时间后，若小鼠血清中抗_的抗体检测呈阳性，说明小鼠体内产生了_反应，再从小鼠的_中获取B淋巴细胞。将该B淋巴细胞与小鼠的_细胞融合，再经
9、过筛选、检测，最终可获得所需的杂交瘤细胞，该细胞具有的特点是_。(2)若要大量制备抗该蛋白的单克隆抗体，可将该杂交瘤细胞注射到小鼠的_中使其增殖，再从_中提取、纯化获得。(3)通过上述方法得到的单克隆抗体可准确地识别这种HSV蛋白，其原因是该抗体具有_和_等特性。【解析】给小鼠注射纯化的HSV蛋白(相当于抗原)是为了使小鼠产生免疫反应，检测结果是阳性表明产生了抗体。再从小鼠的淋巴器官中分离浆细胞，将其与小鼠骨髓瘤细胞融合，并筛选出杂交瘤细胞，这样的细胞既能无限增殖又能产生单一抗体。想大量获得该抗体可以把杂交瘤细胞培养在动物细胞培养液中，再分离；也可以将杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔中使其增殖，然后从
10、小鼠腹水中提取、纯化获得。单克隆抗体因为是只针对一种抗原，所以特异性强，因为这种抗体的纯度高、浓度高，能迅速和抗原结合发生抗原抗体反应，所以灵敏度高。【答案】(1)HSV蛋白 体液免疫 脾脏 骨髓瘤 无限增殖且可产生单一抗体 (2)腹腔 腹水 (3)纯度高 特异性强(其他合理答案也可)高考链接明考情一、选择题1(2019江苏卷)(多选)如图为杂交瘤细胞制备示意图。骨髓瘤细胞由于缺乏次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)，在HAT筛选培养液中不能正常合成DNA，无法生长。下列叙述正确的是(ACD)A可用灭活的仙台病毒诱导细胞融合B两两融合的细胞都能在HAT培养液中生长C杂交瘤细胞需进一步筛选才能用
11、于生产D细胞膜的流动性是细胞融合的基础真题解析：动物细胞融合可以用灭活的仙台病毒进行诱导，或用PEG、电激等进行诱导，A正确；免疫B细胞与骨髓瘤细胞进行融合产生的融合细胞有：免疫B细胞自身融合细胞、骨髓瘤细胞自身融合细胞、杂交瘤细胞，据题干信息骨髓瘤细胞在HAT培养基上无法生长，因此骨髓瘤细胞自身融合细胞在HAT培养基上无法生长，而免疫B细胞自身融合细胞和杂交瘤细胞可以在HAT培养基上生长，B错误；融合后产生的杂交瘤细胞并不是都能表达产生所需的单克隆抗体，需要进一步筛选，C正确；动物细胞融合依据的原理是细胞膜的流动性，D正确。2(2018江苏卷)(多选)如图为细胞融合的示意图，下列叙述正确的是
12、(BC)A若a细胞和b细胞是植物细胞，需先去分化再诱导融合Ba细胞和b细胞之间的融合需要促融处理后才能实现Cc细胞的形成与a、b细胞膜的流动性都有关Dc细胞将同时表达a细胞和b细胞中的所有基因真题解析：若a细胞和b细胞是植物细胞，需要用酶解法去掉细胞壁后再诱导融合，1融合完成后的细胞再经脱分化和再分化培养，A错误；a细胞和b细胞之间的融合需要借助物理、化学等方法处理后才能实现，2,3B正确；c细胞的形成要经过细胞膜的融合，与a、b细胞膜的流动性都有关，C正确；c细胞内有a、b两细胞的遗传物质，但不能同时表达a、b细胞中的所有基因，D错误。真题探源：1教材第36页：植物细胞外面有一层细胞壁，这层
13、细胞壁阻碍着细胞间的杂交。因此，在进行体细胞杂交之前，必须先利用纤维素酶和果胶酶去除这层细胞壁，获得具有活力的原生质体。2教材第36页：进行原生质体间的融合，必须要借助一定的技术手段进行人工诱导。3教材第52页：动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理相同，诱导动物细胞融合的方法与植物原生质体融合的方法也类似，常用的诱导因素有聚乙二醇(PEG)、灭活的病毒、电激等。核心素养链接：本题考查动物细胞或植物细胞融合的原理与处理方法等知识，意在考查学生的辨别比较能力，体现了生物学科中科学思维等核心素养。3(2016江苏卷)下列有关细胞工程的叙述，正确的是(D)APEG是促细胞融合剂，可直接诱导植物细胞
14、融合B用原生质体制备人工种子，要防止细胞破裂C骨髓瘤细胞经免疫处理，可直接获得单克隆抗体D核移植克隆的动物，其线粒体DNA来自供卵母体真题解析：用纤维素酶和果胶酶可去掉植物细胞壁，得到原生质体，PEG(聚乙二醇)可诱导植物原生质体融合，1A错误；制备人工种子是用人工薄膜包裹经组织培养形成的胚状体、腋芽等，2B错误；单克隆抗体是杂交瘤细胞产生的，不能由骨髓瘤细胞经免疫处理后产生，3C错误；体细胞核移植技术培育的克隆动物中，细胞核DNA来自提供体细胞的个体，细胞质中线粒体DNA来自提供卵母细胞的个体，4D正确。真题探源：1教材第36页：在进行体细胞杂交之前，必须先利用纤维素酶和果胶酶去除这层细胞壁
15、，获得具有活力的原生质体化学法一般是用聚乙二醇(PEG)作为诱导剂来诱导细胞融合。2教材第39页：所谓人工种子，就是以植物组织培养得到的胚状体、不定芽、顶芽和腋芽等为材料，经过人工薄膜包装得到的种子。3教材第54页：将杂交瘤细胞在体外条件下做大规模培养，或注射到小鼠腹腔内增殖，这样，从细胞培养液或小鼠腹水中，就可以提取出大量的单克隆抗体了。4教材第47页：动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体。核心素养链接：本题考查细胞融合、人工种子的制备、单克隆抗体的制备以及体细胞核移植等细胞工程的知识，意在考查
16、学生对所学知识要点的理解能力，体现了对科学思维的培养。二、非选择题4(2019全国卷)植物组织培养技术在科学研究和生产实践中得到了广泛的应用。回答下列问题。(1)植物微型繁殖是植物繁殖的一种途径。与常规的种子繁殖方法相比，这种微型繁殖技术的特点有能保持植物原有的遗传特性，繁殖速度快(答出2点即可)。(2)通过组织培养技术，可把植物组织细胞培养成胚状体，再通过人工种皮(人工薄膜)包装得到人工种子(如图所示)，这种人工种子在适宜条件下可萌发生长。人工种皮具备透气性的作用是有利于胚状体进行呼吸作用。人工胚乳能够为胚状体生长提供所需的物质，因此应含有植物激素、矿质元素和糖等几类物质。(3)用脱毒苗进行
17、繁殖，可以减少作物感染病毒。为了获得脱毒苗，可以选取植物的茎尖进行组织培养。(4)植物组织培养技术可与基因工程技术相结合获得转基因植株。将含有目的基因的细胞培养成一个完整植株的基本程序是含目的基因的细胞愈伤组织小植株(用流程图表示)。真题解析：(1)与常规的种子繁殖方法相比，植物微型繁殖技术具有能保持植物原有的遗传特性、繁殖速度快等特点。(2)人工种皮具有透气性，有利于胚状体进行呼吸作用；人工胚乳能够为胚状体生长提供植物激素、矿质元素和糖等物质。(3)植物分生区附近的病毒极少，甚至无病毒。为获得脱毒苗，可以选取植物的茎尖进行组织培养。(4)将含有目的基因的细胞培养成一个完整植株的基本程序是含目
18、的基因的细胞愈伤组织小植株。5(2018全国卷)2018年细胞期刊报道，中国科学家率先成功地应用体细胞对非人灵长类动物进行克隆，获得两只克隆猴“中中”和“华华”。回答下列问题：(1)“中中”和“华华”的获得涉及核移植过程，核移植是指将动物的一个细胞核，移入一个已去掉细胞核的卵母细胞中。通过核移植方法获得的克隆猴，与核供体相比，克隆猴体细胞的染色体数目不变(填“减半”“加倍”或“不变”)。(2)哺乳动物的核移植可以分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植，胚胎细胞核移植获得克隆动物的难度小于(填“大于”或“小于”)体细胞核移植，其原因是胚胎细胞分化程度低，恢复全能性相对容易。(3)在哺乳动物核移植的过程
19、中，若分别以雌性个体和雄性个体的体细胞作为核供体，通常，所得到的两个克隆动物体细胞的常染色体数目相同(填“相同”或“不同”)，性染色体组合不同(填“相同”或“不同”)。真题解析：(1)动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体。1用核移植的方法得到的动物称为克隆动物，与核供体相比，其细胞的染色体数目不变。(2)由于动物胚胎细胞分化程度低，恢复其全能性相对容易，而动物体细胞分化程度高，恢复其全能性十分困难，所以，胚胎细胞核移植获得克隆动物的难度明显低于体细胞核移植。2(3)哺乳动物雌性个体和雄性个体的体细
20、胞中常染色体数目相同，所以分别以雌性个体和雄性个体的体细胞为供体，通常所得到的两个克隆动物体细胞的常染色体数目相同，但其性染色体组合不同。真题探源：1教材第47页：动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体。2教材第47页：由于动物胚胎细胞分化程度低，恢复其全能性相对容易，而动物体细胞分化程度高，恢复其全能性十分困难，因此，动物体细胞核移植的难度也就明显高于胚胎细胞核移植。核心素养链接：本题以科技前沿为真实背景考查动物细胞工程中细胞核移植与克隆动物的相关知识，意在考查学生的记忆理解能力与信息提取和分析能
21、力，体现了对科学思维和社会责任等的培养。6(2017海南卷)甲、乙两名同学分别以某种植物的绿色叶片和白色花瓣为材料，利用植物组织培养技术繁殖该植物。回答下列问题：(1)以该植物的绿色叶片和白色花瓣作为外植体，在一定条件下进行组织培养，均能获得试管苗，其原理是绿色叶片和白色花瓣的细胞具有全能性，在一定条件下能发育成完整的植株。(2)甲、乙同学在诱导愈伤组织所用的培养基中，均加入一定量的蔗糖，蔗糖水解后可得到葡萄糖、果糖。若要用细胞作为材料进行培养获得幼苗，该细胞应具备的条件是具有完整的细胞核(填“具有完整的细胞核”“具有叶绿体”或“已转入抗性基因”)。(3)图中A、B、C所示的是不同的培养结果，
22、该不同结果的出现主要是由于培养基中两种激素用量的不同造成的，这两种激素是细胞分裂素、生长素。A中的愈伤组织是叶肉细胞经脱分化形成的。(4)若该种植物是一种杂合体的名贵花卉，要快速获得与原植株基因型和表现型都相同的该种花卉，可用组织培养方法繁殖，在培养时，不能(填“能”或“不能”)采用经减数分裂得到的花粉粒作为外植体，原因是对杂合体的植株来说，其体细胞的基因型相同，而花粉粒的基因型与体细胞的基因型不同。用花粉粒进行组织培养得到花卉基因型不同于原植株。真题解析：(1)植物细胞(如绿色叶片细胞和白色花瓣细胞)一般都具有全能性，1故用它们作为外植体，在一定条件下进行组织培养，均能获得试管苗。(2)蔗糖
23、是二糖，水解产生的单糖是葡萄糖和果糖。离体细胞可经培养形成完整植株，是因为该细胞的细胞核中含有控制其生长发育的全部遗传信息。离体的细胞全能性的体现与是否含叶绿体或是否转入抗性基因无关。(3)离体植物细胞的发育方向与生长素和细胞分裂素的用量不同有关。2若生长素用量大于细胞分裂素用量，则促进生根；若生长素用量小于细胞分裂素用量，则诱导长出丛芽；若生长素用量等于细胞分裂素用量，则促进愈伤组织的形成。离体的叶肉细胞可经脱分化形成愈伤组织，再经再分化形成试管苗。(4)欲快速获得保持优良性状的杂合体的名贵花卉，可用组织培养方法繁殖，3但应采用体细胞作为外植体，而不采用经减数分裂得到的花粉粒作为外植体，因为
24、花粉粒的基因型与体细胞的基因型不同，用花粉粒进行组织培养得到的花卉的基因型不同于原植株。真题探源：1教材第3334页：具有某种生物全部遗传信息的任何一个细胞，都具有发育成完整生物体的潜能，也就是说，每个生物细胞都具有全能性的特点。2教材第34页：植物体的根、茎、叶细胞一般都具有全能性，在一定的营养和激素等条件下，可以脱分化形成愈伤组织。将愈伤组织转接到含有不同激素成分的培养基上，就可以诱导其再分化生成胚状体或丛芽，进而发育成完整的小植株。3教材第38页：植物组织培养技术不仅可以保持优良品种的遗传特性，还可以高效快速地实现种苗的大量繁殖。核心素养链接：本题考查植物细胞工程中植物组织培养技术及其应
25、用，意在考查学生的分析与理解能力，体现了对科学思维和社会责任等生物学科核心素养的培养。7(2017全国卷)编码蛋白甲的DNA序列(序列甲)由A、B、C、D、E五个片段组成，编码蛋白乙和丙的序列由序列甲的部分片段组成，如图1所示。回答下列问题：(1)现要通过基因工程的方法获得蛋白乙，若在启动子的下游直接接上编码蛋白乙的DNA序列(TTCGCTTCTCAGGAAGGA)，则所构建的表达载体转入宿主细胞后不能翻译出蛋白乙，原因是编码乙的DNA序列起始端无ATG，转录出的mRNA无起始密码子。(2)某同学在用PCR技术获取DNA片段B或D的过程中，在PCR反应体系中加入了DNA聚合酶、引物等，还加入了
26、序列甲作为模板，加入了dNTP作为合成DNA的原料。(3)现通过基因工程方法获得了甲、乙、丙三种蛋白，要鉴定这三种蛋白是否具有刺激T淋巴细胞增殖的作用，某同学做了如下实验：将一定量的含T淋巴细胞的培养液平均分成四组，其中三组分别加入等量的蛋白甲、乙、丙，另一组作为对照，培养并定期检测T淋巴细胞浓度，结果如图2。由图2可知：当细胞浓度达到a时，添加蛋白乙的培养液中T淋巴细胞浓度不再增加，此时若要使T淋巴细胞继续增殖，可采用的方法是进行细胞传代培养。细胞培养过程中，培养箱中通常要维持一定的CO2浓度，CO2的作用是维持培养液的pH。仅根据图1、图2可知，上述甲、乙、丙三种蛋白中，若缺少C(填“A”
27、“B”“C”“D”或“E”)片段所编码的肽段，则会降低其刺激T淋巴细胞增殖的效果。真题解析：(1)若在启动子的下游直接接上编码蛋白乙的DNA序列(TTCGCTTCTCAGGAAGGA)，则基因表达载体中编码蛋白乙的DNA序列起始端无ATG，转录出的mRNA无起始密码子，使所构建的表达载体转入宿主细胞后不能翻译出蛋白乙。(2)在PCR技术中，除了引物和耐高温的DNA聚合酶外，还需要序列甲(含目的基因的DNA片段)作为模板，dNTP(脱氧核苷三磷酸)作为原料。(3)当细胞浓度达到a时，添加蛋白乙的培养液中T淋巴细胞浓度不再增加，可能是由于发生了接触抑制，可用胰蛋白酶处理贴壁生长的细胞，然后分瓶继续
28、进行传代培养。1动物细胞培养中CO2的作用是维持培养液的pH。2对照图1和图2分析，能刺激T淋巴细胞增殖的甲和乙中都含有C片段，而对T淋巴细胞增殖刺激作用很弱的丙中没有C片段，据此可知，若缺少C片段所编码的肽段，则会降低其刺激T淋巴细胞增殖的效果。真题探源：1教材第45页：贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖。这样的培养过程通常被称为传代培养。2教材第46页：(动物)细胞培养所需气体主要有O2和CO2，O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。进行细胞培养时，通常采用培养皿或松盖培养瓶，将其置于含95%空气加5%CO2的混合气体的培养箱中进
29、行培养。核心素养链接：本题将基因工程与细胞工程结合起来，考查了PCR技术、动物细胞的培养等知识，意在考查学生对所学知识进行迁移运用和对实验结果进行分析的能力，体现了对科学思维和科学探究的培养。8(2016全国卷节选)如图表示通过核移植等技术获得某种克隆哺乳动物(二倍体)的流程。回答下列问题：(1)图中A表示正常细胞核，染色体数为2n，则其性染色体的组成可为XX或XY。过程表示去除细胞核，该过程一般要在卵母细胞培养至适当时期再进行，去核时常采用显微操作的方法。(2)经过多次传代后，供体细胞中遗传物质的稳定性会降低。因此，选材时必须关注传代次数。(3)若获得的克隆动物与供体动物性状不完全相同，从遗
30、传物质的角度分析其原因是卵母细胞的细胞质中的遗传物质会对克隆动物的性状产生影响。(4)与克隆羊“多莉(利)”培育成功一样，其他克隆动物的成功获得也证明了动物已分化体细胞的细胞核具有全能性。真题解析：(1)哺乳动物的正常细胞核中性染色体的组成为XX(雌性)或XY(雄性)。卵母细胞需培养至减数第二次分裂的中期，常采用显微操作法去除细胞核。1(2)细胞培养过程中，经过多次传代培养，细胞中遗传物质的稳定性会降低。因此，选材时一般选10代以内的细胞，以保证细胞正常的二倍体核型。2(3)由于卵母细胞细胞质中的遗传物质会对克隆动物的性状产生影响，所以获得的克隆动物与供体动物性状不完全相同。(4)克隆羊“多莉
31、(利)”以及其他克隆动物的培育成功，证明了已分化的动物体细胞的细胞核具有全能性。真题探源：1教材第49页：目前核移植技术中普遍使用的去核方法是显微操作去核法。2教材第46页：目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常为10代以内，以保持细胞正常的二倍体核型。9(2015安徽卷节选)科研人员采用转基因体细胞克隆技术获得转基因绵羊，以便通过乳腺生物反应器生产人凝血因子医用蛋白，其技术路线如图。 (1)由过程获得的A为含目的基因的表达载体。(2)在核移植之前，必须先去掉受体卵母细胞的核，目的是保证核遗传物质来自含目的基因的成纤维细胞。受体应选用M期卵母细胞。(3)采用胎儿成纤维细胞进行转基因体细胞克隆，理论
32、上可获得无限个转基因绵羊，这是因为整合有目的基因的成纤维细胞可进行传代培养。真题解析：(1)根据题意可知，要将人凝血因子基因导入绵羊胎儿成纤维细胞，必须构建基因表达载体，所以由过程获得的A为基因表达载体。(2)为保证核遗传物质来自含目的基因的成纤维细胞，在核移植之前，必须先去掉受体卵母细胞的细胞核。受体应选用减数第二次分裂中期(M)的卵母细胞。1(3)采用胎儿成纤维细胞进行转基因体细胞克隆，理论上可获得无限个转基因绵羊，这是因为整合有目的基因的成纤维细胞可进行传代培养，得到大量含有目的基因的成纤维细胞。真题探源：1教材第48页：图221中，从屠宰场收集牛卵巢，采集卵母细胞，在体外培养到减数第二
33、次分裂中期。10(2014新课标全国卷节选)某研究者用抗原(A)分别免疫3只同种小鼠(X、Y和Z)，每只小鼠免疫5次，每次免疫一周后测定各小鼠血清抗体的效价(能检测出抗原抗体反应的血清最大稀释倍数)，结果如图所示。若要制备杂交瘤细胞，需取免疫后小鼠的B淋巴细胞(染色体数目40条)，并将该细胞与体外培养的小鼠骨髓瘤细胞(染色体数目60条)按一定比例加入试管中，再加入聚乙二醇诱导细胞融合，经筛选培养及抗体检测，得到不断分泌抗A抗体的杂交瘤细胞。回答下列问题：(1)制备融合所需的B淋巴细胞时，所用免疫小鼠的血清抗体效价需达到16 000以上，则小鼠最少需要经过4次免疫后才能有符合要求的。达到要求后的
34、X、Y、Z这3只免疫小鼠中，最适合用于制备B淋巴细胞的是Y小鼠，理由是Y小鼠的血清抗体效价最高。(2)细胞融合实验完成后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外，可能还有B淋巴细胞相互融合形成的细胞、骨髓瘤细胞相互融合形成的细胞，体系中出现多种类型细胞的原因是细胞融合是随机的，且融合率达不到100%。(3)未融合的B淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活，原因是不能无限增殖。真题解析：(1)据图分析，第四次免疫后Y小鼠的血清抗体效价达到16 000以上，所以至少需要4次免疫才能有符合要求的。三只小鼠的血清抗体效价均达到16 000以上时，Y小鼠的血清抗体效价最高，最适合用于制备B淋巴细胞。(2)融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外，可能还有骨髓瘤细胞的自身融合细胞和B淋巴细胞的自身融合细胞。细胞融合是随机的，并且不可能所有细胞都参与融合，故体系中会出现多种类型的细胞。(3)正常细胞的分裂次数是有限的，且经过免疫的B淋巴细胞高度分化，不能无限增殖，因此经多次传代培养后都不能存活。1真题探源：1教材第53页：在体外培养条件下，一个B淋巴细胞是不可能无限增殖的。