1、1(2019青岛检测)利用基因工程技术生产羧酸酯酶(CarE)制剂的流程如下图所示，下列叙述正确的是()A过程所需的逆转录酶可取自于抗农药马拉硫磷小菜蛾的任一细胞B过程利用 PCR 技术扩增目的基因需使用耐高温的解旋酶和引物对C过程常用 Ca2处理大肠杆菌使其成为易于吸收 DNA 的感受态细胞D过程可利用抗原抗体杂交技术鉴定目的基因是否已导入受体细胞2下列关于蛋白质工程的说法错误的是()A蛋白质工程能定向改造蛋白质的结构，使之更加符合人类的需要B蛋白质工程是在分子水平上对蛋白质分子直接进行操作，定向改变其结构C蛋白质工程能产生自然界中不存在的新型蛋白质分子D蛋白质工程与基因工程密不可分，又称为
2、第二代基因工程3下列有关限制性核酸内切酶的叙述正确的是()A用限制性核酸内切酶切割一个 DNA 分子中部，获得一个目的基因时，被水解的磷酸二酯键有 2 个B限制性核酸内切酶识别序列越短，则该序列在 DNA 中出现的概率就越大CCATG和GGATCC序列被限制性核酸内切酶切出的黏性末端碱基数不同D只有用相同的限制性核酸内切酶处理含目的基因的片段和质粒，才能形成重组质粒4(2018天津一中月考)限制酶是一种核酸切割酶，可辨识并切割 DNA 分子上特定的核苷酸碱基序列。下图为四种限制酶 BamH、EcoR、Hind以及 Bgl的识别序列。箭头表示每一种限制酶的特定切割部位，其中哪两种限制酶所切割出来
3、的 DNA 片段末端可以互补黏合？其正确的末端互补序列为()ABamH和 EcoR；末端互补序列AATTBBamH和 Hind；末端互补序列GATCCEcoR和 Hind；末端互补序列AATTDBamH和 Bgl；末端互补序列GATC5干扰素是治疗癌症的重要药物，它必须从血液中提取，每升人血中只能提取 0.5 g，所以价格昂贵。美国加利福尼亚的某生物制品公司用如下方法(如图所示)生产干扰素。从上述方式中可以看出该公司生产干扰素运用的方法是()A个体间的杂交B基因工程C蛋白质工程D器官移植6北极比目鱼中有抗冻基因，其编码的抗冻蛋白具有 1 个由 11 个氨基酸组成的重复序列，该序列重复次数越多，
4、抗冻能力越强。下图是获取转基因抗冻番茄植株的过程示意图，有关叙述正确的是()A过程获取的目的基因，可用于基因工程和比目鱼基因组测序B将多个抗冻基因编码区依次相连成能表达的新基因，可能得不到抗冻性增强的抗冻蛋白C过程构成的重组质粒缺乏标记基因，需要转入农杆菌才能进行筛选D应用 DNA 探针技术，可以检测转基因抗冻番茄植株中目的基因的存在与否及其是否表达7(2018天津六校高三联考)继在上海和安徽首次发现 H7N9 禽流感病例，我国多地出现禽流感疫情，为此某研究小组为了研制预防 H7N9 禽流感病毒的疫苗，开展了前期研究工作，其简要的操作流程如下图。下列相关叙述错误的是()A过程不需使用 Taq
5、酶B步骤所依据的理论基础之一是 DNA 分子结构的相似性C步骤可将重组质粒导入所有的大肠杆菌D检验 Q 蛋白的免疫反应特性，可用 Q 蛋白与患禽流感康复的鸡的血清进行抗原抗体特异性反应实验8(2019北京质检)DNA 的粗提取与鉴定实验的正确操作步骤是()A制备鸡血细胞液提取细胞核物质溶解核内的 DNA析出并滤取 DNA 黏稠物DNA的再溶解提取较纯净的 DNA鉴定 DNAB制备鸡血细胞液提取细胞核物质溶解并析出 DNADNA 的再溶解提取较纯净的DNA鉴定 DNAC制备鸡血细胞液溶解 DNA提取细胞核中的 DNADNA 的再溶解提取较纯净的DNADNA 的鉴定D制备鸡血细胞的细胞核物质提取液
6、溶解 DNA 并析出提取较纯净的 DNADNA 的鉴定9(2018长春普通高中高三一模)肺细胞中的 let7 基因表达减弱，癌基因 RAS 表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将 let7 基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图 1 所示。请回答下列问题：(1)进行过程时，需用相关酶切开载体以插入 let7 基因，该酶破坏的化学键是_。重组载体应有 RNA 聚合酶识别和结合的部位，该部位称为_，同时，重组载体还应有_，以驱动自身复制以及_，以鉴别受体细胞是否含有目的基因。(2)进行过程时，当细胞生长到表面_时，需用_酶处理贴附在培养皿壁上的细
7、胞并进行_后继续培养。(3)研究发现，let7 基因影响癌基因 RAS 表达的机理如图 2 所示。据图分析，肺癌细胞增殖受 到 抑 制，可 能 是 由 于 细 胞 中 _ 含 量 减 少 引 起 的，作 出 该 假 设 的 依 据 是_。10(2018德州高三期末)真核生物基因中通常含有内含子，而原核生物基因中没有，原核生物没有真核生物所具有的切除内含子对应的 RNA 序列的机制。下图表示从基因文库提取胰岛素基因的过程。回答下列问题：(1)过程用到的酶为_，与基因组文库中的基因相比，cDNA 文库中获得的目的基因_(填“不含有”或“含有”)启动子。(2)过程的目的是_。(3)过程需将纤维素膜上
8、的细菌 _，释放出 DNA，再用32P 标记的_作为探针进行杂交。依据杂交结果，应选取培养基上_(填字母)菌落继续培养，才能获得含有胰岛素基因的受体菌。(4)与从基因组文库获取目的基因相比，图示方法获得的目的基因在受体菌中更容易表达，原因是_。11(2019武汉一中模拟)图 1 表示含有目的基因 D 的 DNA 片段长度(bp 即碱基对)和部分碱基序列，图 2 表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有 Msp、BamH、Mbo、Sma4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为 CCGG、GGATCC、GATC、CCCGGG。请回答下列问题：(1)图 1 的一条脱氧核苷酸链中相邻两个
9、碱基之间依次由_连接。(2)若用限制酶 Sma完全切割图 1 中的 DNA 片段，产生的末端是_末端，其产物长度为_。(3)若图 1 中虚线方框内的碱基对被 TA 碱基对替换，那么基因 D 就突变为基因 d。从杂合子中分离出图 1 及其对应的 DNA 片段，用限制酶 Sma完全切割，产物中共有_种不同长度的 DNA 片段。(4)若将图 2 中质粒和目的基因 D 通过同种限制酶处理后进行连接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是_。在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加_的培养基进行培养。经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D 不能正确表达，其最可能的原因是_
10、。12绞股蓝细胞中含有抗烟草花叶病毒(TMV)基因，可以合成一种抗 TMV 蛋白，叶片对 TMV具有抗感染性。烟草是重要的经济作物，由于 TMV 的感染会导致大幅度减产。研究人员利用转基因技术培育出了抗 TMV 的烟草，主要流程如图所示：(1)科学家首先从绞股蓝细胞中提取抗 TMV 基因转录的 RNA，然后合成目的基因。图中过程表示_，获得的 DNA 必须在两侧添加_和_。(2)过程构建重组 Ti 质粒时，必须使用_和_两种工具酶。(3)由图分析，在过程构建的重组 Ti 质粒上应该含有卡那霉素抗性基因作为_，重组 Ti 质粒导入烟草体细胞的方法是_。(4)在过程培养基中除含有卡那霉素及植物必需
11、的各种营养成分外，还必须添加_，以保证受体细胞能培养成再生植株。(5)过程可采取_的方法，检测植株是否合成了抗 TMV 蛋白。在个体水平的鉴定过程中，可通过_的方法来确定植株是否具有抗性。答案精析1C2B 由于基因决定蛋白质，因此，要对蛋白质的结构进行设计改造，最终还必须通过改造基因来完成，而不是直接对蛋白质分子进行操作，B 项错误。3B 用限制性核酸内切酶切割 DNA 分子中部获得一个目的基因时，需剪切 2 次，被水解的磷酸二酯键有 4 个，A 项错误；限制性核酸内切酶识别序列越短，则该序列在 DNA 中出现的概率就越大，B 项正确；CATG和GGATCC序列被限制性核酸内切酶切出的黏性末端
12、均有 4 个碱基，C 项错误；切割目的基因和载体并非只能用同一种限制性核酸内切酶，如果用不同的限制性核酸内切酶切割 DNA 分子所产生的末端也存在互补关系，则两末端也可连接形成重组质粒，D 项错误。4D5B 从图中可以看出整个过程为将人的淋巴细胞中控制干扰素合成的基因与质粒结合后导入酵母菌，并从酵母菌产物中提取干扰素，这项技术为基因工程。6B7C 步骤是人工以 RNA 为模板形成 DNA 的过程，为反转录，不需使用 Taq 酶，A 项正确；步骤是基因表达载体的构建，所依据的理论基础之一是 DNA 分子结构的相似性，B项正确；步骤需用 Ca2处理大肠杆菌，使其处于感受态之后，才能将重组质粒导入大
13、肠杆菌，C 项错误；患禽流感康复的鸡的血清中含有相应的抗体，可以与 Q 蛋白进行抗原抗体杂交，以此可以检测 Q 蛋白的免疫反应特性，D 项正确。8A B 项漏掉了 DNA 溶解前要过滤；C 项提取细胞核中 DNA 叙述欠妥，应是提取核物质，并且应放在溶解 DNA 之前；D 项叙述明显有误。9(1)磷酸二酯键 启动子 复制原点 标记基因(2)相互接触 胰蛋白(或胶原蛋白)分瓶(3)RAS 蛋白 据图分析可知，RAS mRNA 和没有翻译功能的 miRNA 结合后能抑制 RAS 基因的翻译，所以细胞中 RAS 蛋白质的含量减少解析(1)过程表示基因表达载体的构建，在该过程中需要用限制酶对载体进行切
14、割，以便于目的基因的插入，该酶切割的是 DNA 分子中的磷酸二酯键。重组载体上的启动子是 RNA聚合酶识别和结合的部位，复制原点可以启动载体的自我复制，标记基因可以鉴别受体细胞是否含有目的基因。(2)过程表示用胰蛋白酶处理组织细胞获得单个细胞的过程，当细胞生长到表面相互接触时，需用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理贴附在培养皿壁上的细胞并进行分瓶后继续培养。(3)据图 2 可知，let7 基因影响 RAS 基因表达的机理是 let7 基因转录产物miRNA 与 RAS 基因转录产物 RAS mRNA 结合，使 RAS 基因翻译受到抑制，引起细胞中的RAS 蛋白含量减少，进而导致癌细胞增殖受到抑制。10(
15、1)反转录酶 不含有(2)使目的基因在受体细胞中稳定存在，并遗传给后代，同时使目的基因能够表达并发挥作用(3)裂解 目的基因(或胰岛素基因)a(4)cDNA 中不含有内含子，转录出的 RNA 不需要经过加工，可直接作为合成蛋白质的模板解析(1)据题图分析可知，过程表示反转录过程，需要反转录酶的催化；该过程获得 cDNA为部分基因文库，由于其中目的基因是 mRNA 反转录形成的，不含有启动子。(2)过程表示基因表达载体的构建，目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在，并遗传给后代，同时使目的基因能够表达并发挥作用。(3)过程需将纤维素膜上的细菌裂解，释放出 DNA，再用 32P 标记的目的基因作为探
16、针进行杂交。依据杂交结果中杂交带出现的位置可知，应选取培养基上 a 菌落继续培养，才能获得含有胰岛素基因的受体菌。(4)图示方法获得的目的基因在受体菌中更容易表达，是因为 cDNA 中不含有内含子，转录出的 RNA 不需要经过加工，可直接作为合成蛋白质的模板。11(1)脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖(2)平 537 bp、790 bp、661 bp(3)4(4)BamH 抗生素 B 同种限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因 D 与质粒反向连接解析(1)一条脱氧核苷酸链中相邻的两个碱基之间是通过“脱氧核糖磷酸脱氧核糖”相连的。(2)由 Sma 的识别序列和酶切位点可见，其切割后产生的是平末端，图 1
17、 中DNA 片段有两个 Sma 的识别序列，故切割后产生的产物长度为 537(5343)bp、790(79633)bp 和 661(6583)bp 三种。(3)图示方框内发生碱基的替换后，形成的 d 基因失去了 1个 Sma的识别序列，故 D 基因、d 基因用 Sma完全切割后产物中除原有的 3 种长度的 DNA片段外，还增加一种(537790)bp 的 DNA 片段。(4)目的基因的两端都有 BamH的识别序列，质粒的抗生素 A 抗性基因上也有 BamH 的识别序列，故应选用的限制酶是 BamH，此时抗生素 B 抗性基因作为标记基因，故筛选时培养基中要添加抗生素 B。若重组质粒已导入了受体细胞却不能表达，很可能是因为用同种限制酶切割后，目的基因和质粒有两种连接方式，导入受体细胞的重组质粒是目的基因和质粒反向连接形成的。12(1)反转录 启动子 终止子(2)限制酶 DNA 连接酶(3)标记基因 农杆菌转化法(4)植物激素(生长素和细胞分裂素)(5)抗原抗体杂交 接种烟草花叶病毒解析(1)利用 mRNA 获得目的基因的方法是反转录法，目的基因的两端要分别有启动子和终止子。(3)质粒上的抗性基因常用作标记基因。(5)检测目的基因是否完成了表达常用抗原抗体杂交的方法检测是否合成了特定的蛋白质；用接种实验从个体水平上检测植株是否具有抗性。