1、培养基与微生物的分离一、培养基的类型和作用划分标准培养基种类特点用途物理性质液体培养基不加凝固剂工业生产半固体培养基加凝固剂，如琼脂观察微生物的运动、分类、鉴定固体培养基微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种化学成分天然培养基含化学成分不明确的天然物质工业生产合成培养基培养基成分明确(用化学成分已知的化学物质配成)微生物的分类、鉴别用途选择培养基允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他微生物生长培养、分离出特定微生物，如培养酵母菌或霉菌，可在培养基中加入青霉素；培养金黄色葡萄球菌，可在培养基中加入高浓度食盐鉴别培养基根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品鉴别不同种类的微生物
2、，如用伊红美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌(若有，菌落呈深紫色，并带有金属光泽)二、微生物的分离与鉴定微生物的分离方法有很多种，本专题中常用的是：平板划线法、稀释涂布平板法、微生物的选择培养等。针对不同微生物的特点选择不同的方法，对目的微生物进行筛选。以下是尿素分解菌和纤维素分解菌的分离与鉴定比较。项目尿素分解菌的分离与鉴定纤维素分解菌的分离与鉴定分离选择条件利用尿素为唯一氮源利用纤维素为唯一碳源鉴定原理细菌等微生物合成脲酶，将尿素分解产生NH3，使pH升高，加入酚红变红色分解纤维素的微生物产生纤维素酶，将纤维素分解为纤维二糖或葡萄糖，使纤维素刚果红复合物降解而出现透明圈步骤土壤取
3、样制备培养基样品梯度稀释涂布平板培养观察进一步鉴定土壤取样制备培养基选择培养富集培养梯度稀释涂布培养刚果红染色挑取菌落进一步鉴定1下列有关细菌培养的叙述，正确的是()A在琼脂固体培养基上长出的单个菌落含有多种细菌B在培养基中加入青霉素可抑制真菌而促进细菌生长C向液体培养基中通入氧气能促进破伤风杆菌的生长D在半固体培养基中接种细菌培养后可以观察其运动解析：选D单个菌落中只含有一种细菌；青霉素抑制细菌生长，而对真菌没有影响；破伤风杆菌是厌氧型细菌，通入氧气会抑制其生长。2生物乙醇是以生物为原料生产的可再生能源。我国利用农作物废弃物(秸秆)生产乙醇，其技术流程为纤维素酶分解酵母菌发酵蒸馏成品。纤维素
4、酶可以从能分解纤维素的细菌培养液中提取。某同学设计了从土壤中分离纤维素分解菌的实验流程：土壤取样选择培养梯度稀释鉴别培养。请分析回答下列问题。(1)最好选择_环境采集土样。(2)配制培养基时，各种成分在分装前必须进行_，接种前要进行_。在整个微生物的分离和培养过程中，一定要注意在无菌条件下进行。在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的倒平板操作时，平板冷凝后，应将平板_放置，这样做的目的是_。(3)以下是两种培养基配方：A培养基配方：KH2PO4Na2HPO4MgSO47H2O纤维素酶葡萄糖尿素琼脂1.4 g2.1 g0.2 g1 g10.0 g1.0 g15.0 gB培养基配方：KH2PO4NaNO3
5、Na2HPO47H2OMgSO47H2OKCl纤维素粉酵母膏水解酪素0.9 g1 g1.2 g0.5 g0.5 g5 g0.5 g0.5 g如果要分离提纯土壤中的纤维素分解菌，应选择_(填编号)培养基配方，从功能看该培养基属于_培养基。(4)为了鉴别纤维素分解菌和进一步纯化菌种，可以在鉴别培养基中加入_，将筛选获得的菌液稀释后用_法接种到鉴别培养基上，然后挑选产生_的菌落作为菌种进行进一步的扩大培养。解析：纤维素分解菌生活在纤维素丰富的土壤环境，故应选择这样的环境采集土样。B培养基中纤维素是主要碳源，有利于纤维素分解菌生长，同时抑制其他微生物生长，能够分离提纯纤维素分解菌。在鉴别培养基上加入刚
6、果红染液，可鉴别纤维素分解菌和进一步纯化菌种。将筛选获得的菌液稀释后用涂布平板法方法接种到鉴别培养基上，然后挑选产生透明圈的菌落作为菌种进行扩大培养。答案：(1)纤维素含量丰富的土壤(2)调整pH高压蒸汽灭菌倒过来防止冷凝水污染培养基(3)B选择(4)刚果红染液涂布平板透明圈3下面的甲图表示酵母菌、硝化细菌和乳酸菌在半固体培养基中的生长情况，乙图表示这三种菌的增殖速度与氧气浓度之间的关系，请据图回答：(1)乙图中a、b、c三条曲线依次表示甲图_号试管中微生物在不同氧气浓度中的增殖速度。(2)研究发现，青霉素能破坏细菌的细胞壁并在细菌细胞的繁殖期起杀菌作用。如果培养基中混杂了这三类微生物，请设计
7、实验，利用改变培养基成分等培养条件，将酵母菌和硝化细菌分离出来。主要步骤：a分别配制不含_的培养基(A)和加入_的培养基(B)，分别灭菌。b分别接种混合液放在适宜条件下培养。c观察结果。结果：在A培养基上生存的是_，在B培养基上生存的是_。(3)微生物培养过程中，获得纯净培养物的关键是_。(4)若想对初步筛选得到的目的菌进行纯化并计数，可采用的接种方法是_。解析：从甲图试管中微生物的分布和数量分析，乳酸菌分布在缺氧的下层，酵母菌在缺氧的底部和氧含量高的上层均匀分布，而硝化细菌主要分布在上层，因此可以判断出a、b、c曲线表示3、2、1号试管中的微生物增殖速度。青霉素破坏细菌的细胞壁，而酵母菌属于真菌，青霉素不能起到杀灭的作用，硝化细菌属于自养生物，不需要添加葡萄糖作为能源物质和碳源。答案：(1)3、2、1(2)有机碳源青霉素硝化细菌酵母菌(3)防止杂菌污染(无菌技术)(4)稀释涂布平板法