1、微生物的培养及应用一微生物需要的营养物质及功能1. 碳源：凡是能为微生物提供所需要碳元素的营养物质。（1） 主要种类：无机物CO2、NaHCO3和糖类、脂肪酸等有机物，甚至花生粉饼、石油等，但糖类是最常用的碳源，尤其是葡萄糖。（2） 功能：主要用于构成微生物的细胞物质和一些代谢产物，有些碳源还是异养微生物的主要能源物质，所以微生物对碳源的需求量最大。但不同种类的微生物对碳源的需求情况差别很大。如甲基营养细菌只能利用甲醇、甲烷做碳源，而某些细菌（如假单孢菌）却能利用90多种含碳化合物。自养型微生物：蓝细菌、硝化细菌等只能利用CO2、碳酸盐等含碳的无机化合物作碳源，异养微生物只能利用有机物作碳源。
2、2. 氮源：凡是能为微生物提供所需要氮元素的营养物质。（1） 主要种类：分子态氮、氨、铵盐、硝酸盐、尿素、牛肉膏和蛋白胨（是一类外观呈淡黄色的粉剂，具有肉香的特殊气息。生产原理：根据蛋白质在强酸、强碱、高温或利用酶作用，使其分解从而生成多肽分子。主要是以猪肉、牛肉、鱼粉、骨做原料，生产成本较高）等，其中铵盐和硝酸盐等是最常利用的氮源。（2） 功能：主要用于合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物。对于异养微生物来说，含C、H、O、N的化合物既是碳源，又是氮源，如蛋白质还能提供能量，即是能源，也是氮源。3. 生长因子（1） 概念：微生物生长不可缺少的微量有机物。 （2） 化学本质是有机物，氨基酸、维生
3、素、碱基（嘌呤、嘧啶）等。（3） 功能：一般是酶和核酸的组成成分，即提供酶和核酸的原料。微生物之所以需要补充生长因子，往往是由于缺乏合成这些物质所需要的酶或合成能力有限。一些天然物质如酵母膏、蛋白胨、动植物组织提取液等，可以为微生物提供生长因子。【典题演示1】（原创）下列有关培养基的叙述，错误的是（ ）A. 水是微生物生长必需的营养物质，在微生物体内有两种存在形式B. 蛋白质既是微生物生长所必需的氮源，也是碳源C. 生长因子是微生物生长不可缺少的微量有机物，所有微生物的生长都必须添加生长因子D. 在蘑菇培养基中加入的玉米粉、麸皮、米糠等属于碳源【变式训练1】关于微生物的营养，说法正确的是（ ）
4、A. 同一种物质不可能既作碳源又作氮源B. 除水以外的无机物仅提供无机盐C. 凡是碳源都能提供能量D. 无机氮源也能提供能量【变式训练2】下列关于生长因子的叙述，不正确的是（ ）A. 生长因子是指微生物生长不可缺少的微量有机物B. 一般是酶、核酸的组成部分C. 自身不能合成，必须由外界补充D. 主要包括维生素、氨基酸和碱基等二培养基的种类和培养基的配制原则1. 培养基的种类（1） 按照培养基的成分可分为合成培养基、天然培养基和半合成培养基三类。（2） 按照培养基的物理状态可分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基三类。（3） 按照培养基用途可分为基础培养基、选择性培养基和鉴别培养基三类。2.
5、培养基的配制原则：目的明确、营养协调、pH适宜。（1） （选配料）目的明确：要根据所培养的微生物的种类、培养的目的，选择适合的原料配制培养基。（2） （定比例）营养要协调：配制培养基时，必须注意各种营养物质的浓度和营养物质间的比例，否则会产生不良后果。如：营养物质浓度过高，微生物细胞失水，水分会通过细胞膜向外渗透，影响微生物的正常生命活动。又如蔗糖是多种微生物的主要营养物质，但高浓度的蔗糖反而会抑制微生物的生长。在各种营养物质的比例中，碳源和氮源的比例最为重要。 （3） （调pH值）pH值适宜由于各种微生物适宜生长的pH值范围不同，如细菌的最适pH值为6.57.5，放线菌的最适pH值为7.58
6、.5。真菌的最适pH值为5.06.0，酵母菌的最pH值为3.86.0。【典题演示2列】对下培养基的叙述不正确的是（ ）A. 制作固体培养基必须加入琼脂B. 培养酵母菌的麦芽汁属于天然培养基C. 培养基中加入链霉素可以分离出真菌D. 伊红-美蓝培养基可以区别出大肠杆菌【变式训练3】突变型面包霉常需要在基本培养基上添加适当的氨基酸才能生长。现在用两种氨基酸依赖型红色面包霉突变株a和b，分别接种到下面的6种培养基上，两种突变株都不能在1、3、5号培养基上生长，a、b可以分别在2、4和2、6号培养基上生长。培养基成分如下表，关于突变株a和b分别对于AJ中氨基酸需求的说法正确的是（ ）A. 两种突变株对
7、氨基酸的需求是相同的B. 两种突变株都需要G氨基酸才能生长C. 两种突变株必须同时供应4种氨基酸才能生长D. 两种突变株都能在由4、5号两种培养基组成的混合培养基中生长【变式训练4】下列不属于菌落特征的是（ ）A. 菌落的形状B. 有无荚膜C. 菌落的大小D. 隆起程度 三无菌技术1. 无菌技术的内容(1) 对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。(2) 将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。(3) 已经灭菌处理的材料用具不与周围的物品接触。(4) 实验操作应在酒精灯火焰附近进行。2. 消毒方法(1) 煮沸消毒法：如在100煮沸56 min。(2) 化学药剂消毒法
8、：如用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源。3. 灭菌方法(1) 灼烧灭菌。(2) 干热灭菌。(3) 高压蒸汽灭菌。【典题演示3】培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌，消毒方法依次是（ ） 化学消毒 灼烧灭菌 干热灭菌 紫外线灭菌 高压蒸汽灭菌 巴氏消毒法A. B. C. D. 【变式训练5】下列操作与灭菌无关的是（ ）A. 接种前用火焰烧灼接种环B. 接种前用酒精擦拭双手C. 培养基在50时搁置斜面D. 接种在酒精灯的火焰旁完成【变式训练6】(原创)湿热灭菌的效果比干热灭菌要好，下列有关叙述错误的是（ ）A. 湿热灭菌常采用高压蒸汽灭菌B. 水蒸气散发的热量少C. 热量易
9、于传递D. 破坏蛋白质的氢键四制备牛肉膏蛋白胨固体培养基与纯化大肠杆菌1. 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（1） 计算。根据配方比例，计算配制一定量的培养基所需各种成分的用量。（2） 称量。（3） 溶化。（4） 灭菌。（5） 倒平板。2. 纯化大肠杆菌（1） 平板划线法通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，即菌落。（2） 稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细
10、胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。 【典题演示4】（2009安徽卷）下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是（ ）A. 用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板B. 取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于各组平板上C. 将实验组和对照组平板倒置，37恒温培养2448hD. 确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数【变式训练7】有关平板划线操作正确的是（ ）A. 使用已灭菌的接种环,培养皿,操作过程中不再灭菌B. 打开含菌种的试管需要通过火焰灭菌,取出菌种后要马上塞上棉塞C. 将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内,划三至五条平行线即可D. 最后将平板倒置,放入恒温箱中培养【变式训练8】关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，错误的是（ ）A. 操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B. 将称好的牛肉膏连同称量纸一同放人烧杯C. 待培养基冷却至50左右时进行倒平板D. 待平板冷却凝固约510 min后将平板倒过来放置教师总结学习感悟