1、班级：_ _ 组 姓名_ 教师评价_专题 2课题1微生物的实验室培养【课程标准】具体内容标准：进行微生物的分离和培养活动建议： 用大肠杆菌为材料进行平面培养，分离菌落【学习目标】知识目标：1.举例说明有关培养基的基础知识2.概述无菌操作技术包括的主要内容能力目标：掌握纯化大肠杆菌的基本操作【学习重难点】重点：说出有关培养基的基础知识 难点：微生物培养中的有关实验操作【自主探究案】一、整体感知 （一）培养基1.按照配置成的状态,培养基的种类包括 培养基和 培养基等。2.培养基的化学成分一般都含有 、 、 、 四类营养成分。3.在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对 、
2、_ 以及 等的要求。例如：培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加 ；培养霉菌时需要将培养基的PH调至 ；培养细菌时需要将培养基的PH调至 ；培养厌氧微生物时需要提供_的条件。（二）无菌技术1.获得纯净培养物的关键是 。避免杂菌污染的方法主要包括以下四个内容：对实验操作的 、操作者的衣着和手进行清洁和 。将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行 。 为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在_附近进行。 实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与_相接触。 2.消毒和灭菌（1）消毒是指使用_仅杀死物体表面或_的部分微生物（不包括_和_）。常用的消毒方法有 、 。此外，人们也常使用化学药剂进行消
3、毒，如用 、 等。此外，实验室里还用 进行消毒。（2）灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体_的微生物，包括芽孢和孢子。常用的灭菌方法有 、 、 ，二、实验操作： 1.制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 倒平板,往往在灭菌前还需要_2.纯化大肠杆菌微生物接种的方法中最常用的是 和 。（1）平板划线法是指接种环在琼脂固体培养基表面_的操作，将聚集的菌种_到培养基的表面。(2)稀释涂布平板法是指将菌液进行一系列的_，然后将不同_的菌液分别涂布在琼脂固体培养基的表面,进行培养。在稀释度 的菌液时，聚集在一起的微生物将被分散成_，从而能在培养基表面形成单个的_，它在生态学上属于什么单位？_.三、结果分析与评价1.
4、如果接种大肠杆菌的培养基上生长的菌落颜色形状大小基本一致，说明接种符合要求。2.若培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中_未达到要求。3._(作为对照的培养基)，在培养过程中出现了菌落，则说明培养基_不彻底，实验失败。四、菌种的保存1.对于频繁使用的菌种，我们可以采用 法；利用固体斜面培养基培养后，保 存在4冰箱中，每36个月转种培养一次，缺点_。2.对于需要长期保存的菌种，可以采用 法；温度为_。【深入学习】探究一：消毒与灭菌1、无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是什么？2、利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是什么？3、在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的称量操作中，
5、动作要迅速，原因是什么？4、溶化操作中需要不断用玻璃棒搅拌的目的是什么？探究二：有关“倒平板”操作1.培养基灭菌后，需要冷却到500C左右，才能用来倒平板。你用什么方法来估计培养基的温度？2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？探究三：有关“平板划线法”操作1. 为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？3.在作第二次以及其后的划线操作是为什么总是从
6、上一次划线的末端开始划线？探究四：有关“稀释涂布平板法”操作1、 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行，结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，涂布平板操作的第2步应如何进行无菌操作？2、培养12h和24h后的菌落大小？菌落分布位置？原因？3、在某培养基上出现了3种特征不同的菌落是什么原因？【迁移应用】1.下列措施中不属于消毒的是（ ）A.酒精擦拭双手 B.向水中通入少量Cl2 C.皮肤受伤处涂紫药水 D.灼烧接种环2.有关平板划线操作的叙述，正确的是（ ）A.使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌B.打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞C.把皿盖打开，将沾有
7、菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线即可D.最后将平板倒置，放入培养箱中培养3.下列有关平板划线接种法的操作错误的是（ ）A.将接种环放在火焰上燃烧 B.将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液 C.蘸取菌液和划线要在火焰旁进行 D. 接种环划线要将最后一区的划线与第一区的划线相连4.关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述错误的是（ ）A.操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 B.将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯C.等培养基冷却至500C左右时进行倒平板 D.将平板冷却凝固5-10分钟后将平板倒过来放置5.细菌培养过程分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次
8、用于杀灭哪些部位的杂菌（ ）A. 接种环、手、培养基 B.高压锅、手、接种环 C.培养基、手、接种环 D.接种环、手、高压锅6.有关稀释涂布平板法的叙述错误的是()A.首先将菌液进行一系列的梯度稀释 B.然后将不同稀释度的菌液分别涂布在琼脂固体培养基的表面C.适宜条件下培养 D.结果都可在培养基表面形成单个的菌落7.为了保持菌种的纯净需要进行菌种的保藏，下列有关叙述不正确的是()A.对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法 B.临时保藏的菌种一般接种到试管的斜面培养基上 C.临时保藏的菌种容易被污染或产生变异 D.对于需要长期保存的菌种，可以采用低温-40C保藏的方法8.（1）在大肠杆菌培养
9、过程中，除考虑营养条件外，还要考虑、和渗透压等条件。（2）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行 处理（消毒、灭菌），其中对培养皿进行灭菌常用的方法是；操作者的双手需要进行清洗。（3）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的。（4）通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的。（5）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是 。（6）若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。9
10、.炭疽病是由炭疽杆菌引起的一种人畜共患传染病。炭疽杆菌两端截平、呈竹节状排列，菌落呈卷发状。对炭疽病疑似患者，可根据噬菌体的宿主专一性，通过实验确诊。（1）细菌培养：采集疑似患者的样本，分离培养，获得可疑菌落。（2）细菌鉴定：实验流程如下图所示。对配制的液体培养基等需采取 方法灭菌；实验所用液体培养基的碳源为 （填“无机碳”或“有机碳”）。挑选可疑菌落制片后，用 观察，可看到呈竹节状排列的杆菌。接种可疑菌后，35培养24小时，液体培养基变浑浊，原因是 。对照组试管中应加入 ，与实验组同时培养6小时后，若实验组液体培养基的浑浊度比对照组 （填“高”或“低”），则可明确疑似患者被炭疽杆菌感染；反之
11、则排除。对排除的疑似患者及易感人群，可接种炭疽杆菌疫苗，刺激机体产生相应抗体，与产生抗体相关的细胞除T细胞、B细胞外，还有 。专题 2课题1微生物的实验室培养导学案答案：【自主探究案】一、（一）1、液体 固体 2、水 碳源 氮源 无机盐 3、PH 特殊营养物质 氧气 维生素 酸性 中性或微碱性 无氧（二）1、防止外来杂菌的污染 空间 消毒 灭菌 酒精灯火焰 周围的物品 2.较为温和的物理或化学方法 内部 芽孢 孢子 煮沸消毒法 巴氏消毒法 酒精擦拭双手 氯气消毒水源 紫外线 内外所有 灼烧灭菌 干热灭菌 高压蒸汽灭菌 二、1、计算称量溶化灭菌 调PH2、平板划线法 稀释涂布平板法 连续划线 逐
12、步稀释分散 梯度稀释 稀释度 足够高 单个细胞 菌落 种群 三、 无菌操作 未接种的培养基 灭菌四、临时保藏 保存时间较短，容易发生污染和变异 甘油管藏 -20【合作探究案】一、1、防止感染实验操作者 。2、避免妨碍热空气流通。3、防止牛肉膏吸收空气中水分。防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。二、1、可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。2、通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。3、平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。4、不能。空
13、气中杂菌会在这些粘附培养基上繁殖，并污染皿内培养基。三、1、消灭接种环上的微生物；消灭接种环上残留菌种防止细菌污染环境和操作者2、防止高温杀死菌种3、划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。四、1、应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围；等等。2、大小不同；菌落分布位置相同。原因是时间越长，菌落中细菌繁殖越多，菌落体积越大；菌落的位置不动，但菌落中微生物个体数增多。3、有培养基灭菌不彻底或杂菌感染等。【巩固探究案】1-5 DDDAC DD8.（1）PH 温度（2）灭菌 干热灭菌 消毒（3）比例合适（4）鉴定（5）将未接种的培养基在适宜温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生（6）灭菌9.（2）高压蒸汽 有机碳 显微镜 细菌大量繁殖 等量生理盐水 低 吞噬细胞、浆细胞