1、选修一生物技术实践第1讲无菌操作技术实践1.平板划线法和稀释涂布平板法是纯化微生物的两种常用方法，下列描述正确的是()A.都要将菌液进行一系列的梯度稀释B.平板划线法是将不同稀释度的菌液通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作C.稀释涂布平板法是将不同稀释度的菌液倒入液体培养基进行培养D.都会在培养基表面形成单个的菌落解析平板划线法不需要进行梯度稀释，稀释涂布平板法是将不同稀释度的菌液滴加到固体培养基的表面。平板划线法和稀释涂布平板法都能在培养基表面形成单个菌落。答案D2. 分离纤维素分解菌的实验过程中操作有误的是()A经选择培养后即可将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上B选择培养这一步可省
2、略，但纤维素分解菌少C经稀释培养后，用刚果红染色D此实验中需设置对照组解析经选择培养后，再经稀释，才能将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上；选择培养可省略；经稀释培养后，用刚果红染色，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈；设置对照能证明经选择培养的确得到了欲分离的微生物。答案A3.下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是()A.用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板B.取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于各组平板上C.将实验组和对照组平板倒置，37 恒温培养2448 hD.确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上
3、的实验组平板进行计数解析在细菌计数时，为保证实验结果的准确性，一般选择菌落数在30300的平板进行计数，求出平均数，再根据对应的稀释度计算出样品中的细菌数。答案D4.通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物。在缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌；在培养基中加入10%的酚可以抑制细菌和霉菌。利用上述方法能从混杂的微生物群体中分离出(多选)()A.固氮细菌B霉菌C.大肠杆菌D放线菌解析缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长，而固氮细菌能生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌，霉菌能生长；在培养基中加入10%的酚可以抑制细菌和霉菌
4、，放线菌能生长。答案ABD5. 尿素是一种重要的农业肥料，需经细菌的分解才能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，下列是从土壤中分离分解尿素细菌的有关问题，请分析回答：(1)如图是利用_法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步_到培养基的表面。除此方法外，常用的微生物接种方法还有_(写一种)。(2)如果要对培养的菌落进行纯化，在培养基上划线操作中，操作的第一步及每次划线之前都要灼烧接种环，目的是对接种环进行_，灼烧的接种环冷却后才能接种的原因是_。(3)下面是两种培养基的配方：表1：A培养基配方KH2PO4Na2HPO4MgSO47H2O葡萄糖尿素琼脂H2O1.4 g2.1 g0.2
5、 g10.0 g1.0 g15.0 g1 000 mL表2：B培养基配方纤维素粉NaNO3NaHPO47H2OKH2PO4MgSO47H2OKCl酵母浸膏H2O5 g1 g1.2 g0.9 g0.5 g0.5 g0.5 g1 000 mL配制培养基的操作步骤_(用字母顺序回答)。a倒平板b计算c溶化d称量e灭菌通常培养基采用_法灭菌，在制备固体培养基的倒平板操作时，平板冷凝后，应将平板倒置，目的是_。如果要分离土壤中能分解尿素的细菌，应选择上述_(A、B)配方的培养基，在该培养基中加入_指示剂，可初步鉴定出该种细菌能否分解尿素。据B培养基的成分，所培养微生物的同化作用类型是_。(4)如果进一步
6、从尿素分解菌中提取出DNA，利用PCR技术扩增，则每次循环复制可分为_三步。而尿素分解菌能分解尿素的直接原因是它们能合成_，该物质被提取出后的纯化方法通常是_。 解析(1)图示利用平板划线法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释到培养基的表面。除此方法外，常用的微生物接种方法还有稀释涂布平板法。(2)接种环通过灼烧灭菌，灼烧的接种环冷却后才能接种的原因是防止高温杀死需接种的微生物。(3)配制培养基的操作步骤：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。通常培养基采用高压蒸汽灭菌法灭菌，在制备固体培养基的倒平板操作时，平板冷凝后，应将平板倒置，目的是防止培养皿内壁上出现的冷凝水污染培养基。如果要分离土壤中能分
7、解尿素的细菌，应选择上述以尿素为氮源的培养基，在该培养基中加入酚红指示剂，可初步鉴定出该种细菌能否分解尿素。B培养基的成分中，碳源为有机物，所培养微生物的同化作用类型是异养型。(4)PCR技术扩增，则每次循环复制可分为变性、复性、延伸三步。而尿素分解菌能分解尿素的直接原因是它们能合成脲酶，该物质被提取出后的纯化方法通常是凝胶色谱法。答案(1)平板划线稀释(分散、分离)稀释涂布平板法(2)灭菌防止高温杀死需接种的微生物(3)bdcea高压蒸汽灭菌防止培养皿内壁上出现的冷凝水污染培养基A酚红异养型(4)变性、复性、延伸脲酶凝胶色谱法6.在日常生活中，一提到细菌、真菌及病毒这些微生物，人们往往首先想
8、到它们的害处，其实，很多微生物对人类是有益的，它们与我们人类的关系非常密切，而且人类已经应用微生物造福于我们的生活。请回答下列问题。(1)从自然界获得纯种酿酒酵母菌的基本程序：配制培养基接种培养观察记录纯化培养。采用平板划线法接种，开始接种时要灼烧接种环，目的是。若葡萄汁中含有醋酸菌，在葡萄酒发酵旺盛时，醋酸菌能否将酒精转变成醋酸？，原因是_。(2)在腐乳的制作过程中，有多种微生物参与了豆腐的发酵，其中起主要作用的是。产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的，可将脂肪水解为甘油和脂肪酸。(3)利用纤维素解决能源问题的关键是高性能纤维素酶的获取。科学家利用培养基从土壤中选择出能分解纤维素的细
9、菌，经过大量培养后可以从中提取纤维素酶。土壤中富含各种微生物，将土壤浸出液接种到特定培养基上，可得到能分解纤维素的细菌，实验室中获取纯净菌的常用方法有和。虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、_。解析(1)采用平板划线法接种，开始接种时要灼烧接种环，目的是灭菌；若葡萄汁中含有醋酸菌，在葡萄酒发酵旺盛时，醋酸菌不能将酒精转变成醋酸，原因是醋酸菌是好氧菌，葡萄酒发酵阶段的无氧条件抑制了醋酸菌的生长。(2)在腐乳的制作过程中，有多种微生物参与了豆腐的发酵，其中起主要作用的是毛霉。产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸。脂肪酶可将脂肪水解为甘油和脂肪酸。答案(1)灭菌不能醋酸菌是好氧菌，葡萄酒发酵阶段的无氧条件抑制了醋酸菌的生长(2)毛霉肽和氨基酸脂肪酶(3)平板划线法稀释涂布平板法无机盐、碳源、氮源