1、第1课时 微生物的基本培养技术(建议用时：40分钟)题组一配制培养基1下列关于培养基的说法，正确的是()A任何培养基都必须含有碳源、氮源、矿质元素、水B培养基只有两类：液体培养基和固体培养基C固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基D配制培养基时要注意各种组分的浓度和比例D不同微生物对营养物质的需求不同，如自养微生物的培养基不需要加碳源，自生固氮菌的培养基不需要加氮源。按不同的分类标准，培养基可有不同的种类和作用，其中固体培养基是在液体培养基里加入琼脂等凝固剂配制而成的。配制培养基时要注意各种组分的浓度和比例。2下列关于微生物的营养的说法，正确的是()A同一种物质不可能既作碳源又作氮源B凡是碳
2、源都能提供能量C除水以外的无机物仅提供无机盐D无机氮源也可能提供能量D对一些微生物来说，含C、H、O、N的化合物既是碳源，又是氮源。CO2是光能自养细菌的碳源，但不能提供能量。CO2和N2都是无机物，也是微生物的碳源和氮源。硝化细菌所利用的氮源是氨，氨为无机氮源，同时氨也为硝化细菌提供用以化能合成作用的能源。3下列有关培养基的叙述正确的是()A培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质B微生物的纯培养一般用液体培养基C固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基D微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌A微生物的纯培养一般用固体培养基。液体培养基加入凝固剂形成固体培养基，固体培养基加入
3、少量水不能制成液体培养基。微生物在固体培养基上生长时，可形成肉眼可见的菌落，单个细菌不能用肉眼看到。题组二无菌技术4下列操作与消毒或灭菌无关的是()A接种前用酒精灯火焰灼烧接种环B接种前用酒精擦拭双手C将平板倒置，放入培养箱中培养D在酒精灯的火焰旁完成接种C接种用具、器皿、空气中都存在大量微生物，必须进行严格地消毒或灭菌。A、B、D三项都是实验操作过程中涉及的消毒或灭菌的措施。将平板倒置，放入培养箱中培养与灭菌无关。5培养基、培养皿、接种针、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌或消毒方法依次是()化学药物消毒 灼烧灭菌 干热灭菌紫外线消毒高压蒸汽灭菌 巴氏消毒ABCDA培养基用高压蒸汽灭菌
4、法灭菌；培养皿能耐高温且需要保持干燥，可用干热灭菌法灭菌；接种针可用灼烧灭菌法灭菌，以达到迅速彻底的灭菌效果；实验操作者的双手可用化学药物如酒精进行消毒；空气可用紫外线消毒法；为了不破坏牛奶的营养成分可采用巴氏消毒法。6某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察、计数。请回答与此实验相关的问题：(1)培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌的培养提供了_和_。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是_和_。(2)对培养基进行灭菌，应该采用的方法是_。(3)为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于_中培养，培养的温度设定在3
5、7 。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种_作为对照进行实验。(4)培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有_种细菌。一般来说，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越_。解析用于培养微生物的培养基中，一般含有微生物所需要的碳源、氮源、水和无机盐等成分，碳源、氮源一般分别由糖类和蛋白质类物质所提供。对培养基常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌法。在检测湖水中细菌的污染情况时，应设置对照实验，才能得出可靠的结果。答案(1)氮源碳源无机盐水(2)高压蒸汽灭菌法(3)恒温培养箱无菌水(4)多高题组三微生物的纯培养7下列有关倒平板操作的叙述，错误的是()A将灭过菌的培
6、养皿放在火焰旁的桌面上B使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰C将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌面上D等待培养基冷却凝固后需要倒过来放置C整个倒平板过程要防止外来杂菌的入侵，因此灭过菌的培养皿应放在火焰旁，打开的锥形瓶瓶口应迅速通过火焰，培养皿应打开一条稍大于瓶口的缝隙，而不能将培养皿盖完全打开，等待培养基冷却凝固后需要倒过来放置。8将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37 恒温箱的目的是()A对比观察培养基有没有被微生物利用B对比分析培养基是否被杂菌污染C没必要放入未接种的培养基D为了下次接种时再使用B对未接种的培养基进行培养，起到对照作用，可用来确定培养基是否被杂菌污染。9下列关于平板划线操作
7、的叙述，错误的是()A每次划线前都要灼烧接种环B灼烧接种环后，要立即用接种环接种，防止杂菌污染接种环C要在酒精灯火焰旁进行D接种前，要将菌种试管口通过火焰B灼烧接种环后，将接种环伸入管内，让环端先接触培养基上未长菌的部位，使其冷却，然后轻轻挑取少量菌体，再进行接种。灼烧接种环后，不可立即用接种环接种，以免接种环温度过高，将菌种杀死。10在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。实验基本步骤如下：请回答下列有关问题：(1)配制培养基时，各成分含量确定的原则是_。不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的是_。(2)倒平板的适宜温度是50 左
8、右，原因是_。待平板冷凝后，要将平板倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止_。(3)纯化菌株时，若使用稀释涂布平板法进行接种，应选择的涂布工具是图中的_；若使用平板划线法进行接种，应选择的接种工具是图中的_。 A BCD(4)划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有_。(5)若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及培养物必须经过_处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。解析 (1)培养基中各成分含量要根据微生物的生长需要来确定。微生物生长需要一定的pH，所以培养基装瓶前需要调节p
9、H。(3)由图可知，A为接种环，B为涂布器，C为胶头滴管，D为接种针，故稀释平板法应选择的涂布工具是B，平板划线法应选择的接种工具是A。(4)由题意分析可知，造成此现象的原因可能有两个：一是接种环灼烧后未冷却，菌种接触到高温的接种环而死亡；二是划第二划线区域第一条线时未从第一区域末端开始。(5)有的大肠杆菌会释放一种强烈的毒素，因此，使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。答案(1)所培养微生物对各营养成分的需要量调整pH(2)温度过高会烫手，过低培养基又会凝固皿盖上的水珠落入培养基，造成污染(3)BA(4)接种环灼烧后未冷却；划线未从第一区域末端开始(5)灭菌
10、11下列关于制备固体培养基时倒平板的叙述，正确的是()A倒好的培养基和培养皿要进行干热灭菌B应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上C为防止微生物侵入培养基，要在酒精灯火焰旁进行操作D倒好培养基后，立即将平板倒过来放置，不需要冷凝C应该在倒平板之前将培养基进行高压蒸汽灭菌，将培养皿进行干热灭菌，A错误；倒平板时，用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基(1020 mL)倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖，B错误；为防止微生物侵入培养基，要在酒精灯火焰旁进行操作，C正确；倒好培养基后，等培养基冷凝后再将平板倒过来放置，D错误。12.右图是微生物平板划线示意图。划线的顺
11、序为12345。下列操作方法正确的是()A操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌B划线操作应在火焰上进行C在5区域中才可以得到所需菌落D在1、2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环灭菌D在每次划线前后都要对接种环进行灭菌，接种环的灭菌方法应是在火焰上灼烧，接种时划线操作是在火焰旁进行的。在5个区域中，只要有单个活细菌，通过培养即可获得所需菌落。13土壤有“微生物的天然培养基”之称。下图是某同学分离和培养土壤中微生物的部分操作步骤和实验结果示意图。回答下列问题：(1)利用固体培养基培养土壤中的微生物时，除考虑各种营养条件外，还需要控制的培养条件有_(至少写两点)等。接种前应该先检测固体培养基是否被
12、污染，检测的具体方法是_。(2)图示中用平板划线法接种的操作顺序是AB_；以上操作步骤中存在明显错误的是_(用字母表示)，该操作的正确方法是_。解析(1)若用该培养基培养土壤中的微生物，除考虑各种营养条件外，还要考虑温度、pH、氧气、无菌和渗透压等条件。检测固体培养基是否被污染的方法是将未接种的培养基在适宜的环境中放置一段时间，观察培养基上是否有菌落产生。(2)图示是平板划线法接种操作示意图，其操作顺序是ABEDCF；为了防止杂菌污染，接种应该在酒精灯的火焰旁进行，因此以上操作中存在错误的步骤是C。答案(1)温度、pH、氧气、无菌将未接种的培养基在适宜的环境中放置一段时间，观察培养基上是否有菌落产生(2)EDCFC在酒精灯的火焰旁划线 对微生物培养的接种步骤弄不清14下列有关平板划线操作的叙述，不正确的是()A第一次操作前灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物B每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种C在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液D划线结束后，灼烧接种环能及时杀死接种环上的菌种，避免细菌污染环境或感染操作者C平板划线法通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，以形成单菌落。因此，每次划线时，都应将接种环上原有的菌体杀死，划线时分散的菌体来自上次划线结束时的菌体。