1、实验六、叶绿体色素的提取和分离B相关知识 （含有色素的细胞器有 、 ）种类颜色功能分布叶绿素主要吸收 光和 光类胡萝卜素主要吸收 光一、实验目的1、尝试用 方法提取叶绿体中的色素和用 法分离提取到的色素。2、分析实验结果，探究叶绿体中有几种色素，以及各自所呈现的颜色。二、实验原理1、提取原理：叶绿体中的色素是有机物，不溶于水，能溶于 中，所以可以用 提取绿叶中的色素。2、分离原理：叶绿体色素在层析液中的溶解度不同，溶解度 随层析液在滤纸上扩散得快；溶解度 随层析液在滤纸上扩散得慢。（该方法叫 法）三、实验材料：新鲜的绿叶（如菠菜的绿叶）四、实验步骤（一）、提取绿叶中的色素1、称取5克绿叶，剪碎
2、，放入研钵中。2、加入少许SiO2和CaCO3和，在加入10mL无水乙醇，进行迅速、充分的研磨。加SiO2、加CaCO3的作用分别是 、 加无水乙醇的作用是 ；为什么要迅速研磨？ 3、收集滤液：玻璃漏斗基部放一块单层尼龙布，研磨液倒入漏斗内挤压，将滤液收集到小试管中，及时用棉塞将试管口塞严。 为什么用棉塞将试管口塞严？ （二）、分离绿叶中的色素1、制备滤纸条：将干燥的定性滤纸，剪成长与宽略小于试管长与宽的滤纸条，并将一端剪去两角，并在距这一端1cm处用铅笔画一条细的横线。将干燥的滤纸条一端剪去两角的目的是 2、画滤液细线：用毛细吸管吸取少量滤液，沿铅笔线均匀地画出一条细线，待滤液干后，再画一两
3、次。画滤液细线的要求是 重复画滤液细线的目的是 3、分离绿叶中的色素：将3mL层析液倒入试管中，将滤纸条（有滤液细线的一端朝下）插入层析液中，随后用棉塞塞紧试管口（也可用小烧杯代替试管）。为什么不能让滤液细线触及层析液？ 为什么试管要加棉塞（或烧杯要盖培养皿盖）？ 4、观察与记录：在右图中标示出相应的色素及其颜色溶解度最大的是 ，最小的是 色素带最宽的是 ，最窄的是 五、实验结果分析练 习1下面是四位同学的实验操作方法或结果，其中错误的一项是 （ ）A二苯胺试剂可以用于DNA的鉴定B甲基绿使DNA变红，派洛宁使RNA变绿C显微镜下观察根尖，在细胞呈正方形的区域易找到分裂期的细胞D分离叶绿体中的
4、色素，滤纸条从上到下依次是：橙黄色、黄色、蓝绿色和黄绿色2、某研究组获得了水稻的叶黄素缺失突变体。将其叶片进行了红光照射光吸收测定和色素层析条带分析（从上至下），与正常叶片相比，实验结果是A光吸收差异显著，色素带缺第2条 B光吸收差异不显著，色素带缺第2条C光吸收差异显著，色素带缺第3条 D光吸收差异不显著，色素带缺第3条3、图6表示叶绿体色素提取分离实验中纸层析的结果，据图判断用作实验材料的叶片颜色为 （ ）A红色 B黄色C绿色 D紫色4、下列对有关实验的描述中，错误的是 （ ）A分离叶绿体中的色素时，不同色素随层析液在滤纸上的扩散速度不同B用低倍镜观察不到紫色洋葱鳞片叶外表皮细胞的质壁分离
5、和复原过程C观察叶片细胞的叶绿体时，先在低倍镜下找到叶片细胞再换高倍镜观察D甲基绿染色可使人口腔上皮细胞的细胞核呈绿色“5（多选）从成分、功能方面将细胞器进行归类，合理的是 （ ）A能产生水的细胞器有线粒体、核糖体等B可以产生H和ATP的细胞器是线粒体和叶绿体C能发生碱基互补配对的细胞器只有线粒体和叶绿体D可能含有色素的细胞器有叶绿体和液泡等6、某研究组对籼稻开展了组织培养及相关研究，请回答下列问题：(1)2,4-D常用于籼稻愈伤组织的诱导，对形态的发生有一定的抑制作用。为促进愈伤组织再分化，在配制分化培养基时需 （填“ 升高”、“保持”或“降低”) 2,4-D的浓度。（2）当籼稻愈伤组织在只
6、含有细胞分裂素的培养基上培养时，出现具有分生能力的绿色芽点，但不能继续出芽，通常在培养基中添加 ，以促进幼苗形成。（3）研究中用显微镜可以观察到的现象是 （填下列序号）。绿色芽点细胞排列松散 刚融合的籼稻和稗草杂交细胞发生质壁分离胚状体细胞中有叶绿体 分化的愈伤组织内各细胞的形态大小一致（4） 经组织培养筛选获得的籼稻叶绿素突变体，其叶绿素a与叶绿素b的比值显著大于对照，叶绿素总量不变。某同学用 （填序号：绿色红色蓝紫色黄色）光照射突变体和对照叶片，检测到两者光合放氧速率差异不大。若取等量色素提取液进行层析，会发现突变体第 条色素带（自上而下）窄于对照组。(5)胚乳(3n)由一个精子与两个极核
7、受精发育而成。若用籼稻种子的胚乳诱导愈伤组织，培育三倍体，需适时剔除胚，以免胚的存在影响愈伤组织细胞的 ，还可避免再生苗中有 。实验七、叶绿体色素的提取和分离参考答案思考题思考题1、过滤；纸层析思考题2、高的；低的思考题3、细胞中富含有叶绿体、色素；思考题4、加SiO2为了研磨得更充分；加CaCO3防止研磨时叶绿素受到破坏。思考题5、减少研磨过程叶绿素的分解，减少有毒性的丙酮挥发。思考题6、可使层析液同时到达滤液细线，层析时，色素分离效果好。思考题7、为了防止色素带之间部分重叠。思考题8、为了增加色素在滤纸上的附着量，实验结果更明显。思考题9、防止色素溶解在层析液中，影响实验结果。思考题10、
8、层析液中的苯、丙酮、石油醚易挥发。思考题11、详见右图：思考题12、提取叶绿体色素的关键是：叶片要新鲜、浓绿；研磨要迅速、充分；滤液收集后，要及时用棉塞将试管口塞紧，以免滤液挥发。分离叶绿体色素的关键是：一是滤液细线要细且直，而且要重复划几次；二是层析液不能没及滤液线。练习1、B 2、B 3.B 4、B 5、ABD 6、【答案】(1) 降低 (2) 适量的生长素(3) (4) 4 (5)增殖和分化 二倍体幼苗【解析】(1)2，4-D常用于植物愈伤组织的诱导和生长，但它趋向于抑制植物形态的发生，当愈伤组织再分化形成新的植株个体时，要减小2，4-D抑制植物形态发生的作用。所以在配制分化培养基时需降低2，4-D的浓度。(2)根据题意，此时已经出现具有分生能力的绿色芽点，但不能继续出芽。由于生长素有促进再分化过程中芽的生长，所以在培养基中添加适量的生长素，以促进幼苗形成。(3)绿色芽点细胞为分生区细胞，排列紧密；刚融合的杂种细胞没有细胞壁，不可能发生质壁分离；愈伤组织细胞排列疏松无规则；再分化产生胚状体，需要光照刺激，会促进叶绿体的形成，可在光学显微镜下观察到叶绿体。