1、微生物的基本培养技术 (20分钟70分)一、选择题(共8小题,每小题5分,共40分)1.下表为某培养基的配方,下列叙述正确的是()成分蛋白胨葡萄糖K2HPO4伊红美蓝蒸馏水含量10 g10 g2 g0.4 g0.065 g1 000 mLA.从物理性质看该培养基属于固体培养基B.该培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖,属于氮源的物质是蛋白胨C.该培养基缺少提供生长因子的物质D.该培养基不能培养异养微生物【解析】选B。分析表中成分可知,该培养基中没有凝固剂,为液体培养基,A错误;该培养基中的蛋白胨既是唯一的氮源,也是碳源,而葡萄糖是绝大多数生物最常利用的碳源,B正确;该培养基中存在的蛋白胨中的某些
2、物质可以看作是生长因子,C错误;该培养基中含有有机碳源,能用于培养异养微生物,D错误。【补偿训练】将相同的大肠杆菌样液分别接种于成分不同的三种培养基中,36小时后统计菌落数,结果如下表。下列叙述不正确的是()培养皿培养基成分菌落数琼脂、葡萄糖35琼脂、葡萄糖、生长因子250琼脂、生长因子0A.葡萄糖是培养基中的碳源也是能源B.配制培养基过程中应先灭菌后倒平板C.和对照,说明生长因子不利于大肠杆菌的生长D.和对照,说明大肠杆菌的生长需要葡萄糖【解析】选C。葡萄糖是培养基中的碳源也是能源,A正确;配制培养基过程中应先灭菌后倒平板,B正确;和对照,说明大肠杆菌的生长需要生长因子,C错误;和对照,说明
3、大肠杆菌的生长需要葡萄糖,D正确。2.(2020徐州高二检测)不同的微生物对营养物质的需要各不相同。一种自养微生物在以CO2为唯一碳源的培养基中培养,下列说法不正确的是()A.氮源物质为该微生物提供必要的氮素B.碳源物质也为该微生物提供能量C.无机盐是该微生物不可缺少的营养物质D.水是该微生物的营养要素之一【解析】选B。培养基中的氮源物质可以为该微生物提供必要的氮素,A正确;该微生物只能以二氧化碳作为唯一碳源,二氧化碳不能为该微生物提供能量,B错误;无机盐可以为微生物提供碳、氮以外的重要元素,是该微生物不可缺少的营养物质,C正确;水是生物体新陈代谢不可缺少的物质,是该微生物的营养要素之一,D正
4、确。3.金黄色葡萄球菌有很强的致病力,常引起骨髓炎等,还可能引起食物中毒。下列实验结束后的做法错误的是()A.对接种环进行灼烧处理B.带菌培养基必须经高压蒸汽灭菌锅灭菌后才能倒掉C.做完实验后,在实验室内可以饮水D.接种后双手必须经肥皂洗净,再用70%的酒精棉球擦拭【解析】选C。实验结束后应将金黄色葡萄球菌杀死,以免使人致病,接种环应用灼烧灭菌,A正确;带菌的培养基要经高压蒸汽灭菌后才能倒掉,以免污染环境,B正确;在微生物培养的实验室中,不能吃东西、饮水等,C错误;接种后双手必须用肥皂洗净,再用70%的酒精棉球擦拭,D正确。4.关于酵母菌的纯培养实验操作,下列说法正确的是()A.配制培养基、倒
5、平板、接种需要在酒精灯火焰旁进行B.倒平板时,倒入的培养基冷却后盖上培养皿的皿盖C.划线接种时,灼烧接种环后立即进行再次划线D.划线接种结束后,需将平板倒置后放入培养箱中培养【解析】选D。配制培养基不需要在酒精灯火焰旁进行,A错误。倒平板时,应立即盖上培养皿的皿盖,B错误。划线接种时,灼烧接种环冷却后进行再次划线,C错误。划线接种结束后,需将平板倒置后放入培养箱中培养,D正确。5.下列依次表示倒平板、接种的位置,以及平板划线法接种的路径示意图,其中错误的是() 【解析】选D。倒平板时,用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙,右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿,左手立即盖上培养皿的皿盖
6、,防止空气中的杂菌污染,A正确;左手将培养皿打开一条缝隙,右手将蘸有菌种的接种环迅速伸入平板内,B正确;不同区域内划线,而且每次转换划线角度后再进行划线,让菌种来源于上一次划线末端,C正确;下一次划线没有从上一次划线末端开始,D错误。6.产生标准菌落的最初数目和培养基分别是()A.同种少数细菌,液体培养基B.许多细菌,液体培养基C.同种少数细菌,固体培养基D.许多细菌, 固体培养基【解析】选C。菌落是一个细菌或几个细菌的子细胞群体,形成于固体培养基上,有一定的形态结构,所以肉眼可见。同种细菌形成的菌落,形态结构是相同的;如果有许多细菌形成的菌落, 就不可能有比较标准的形态,所以C项正确。7.(
7、2020郑州高二检测)下列有关微生物培养及培养基的描述错误的是()A.培养基必须包含的成分有碳源、氮源、水、无机盐、生长因子及琼脂B.根据物理性质不同,培养基可分为固体培养基和液体培养基C.培养细菌时需要把培养基的pH调至中性或微碱性D.平板划线法接种时需要在酒精灯火焰旁进行操作【解析】选A。各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐,此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求,A错误;根据物理性质不同,培养基可分为固体培养基和液体培养基,B正确;培养细菌时需要把培养基的pH调至中性或微碱性,C正确;平板划线法接种时需要在酒精灯火焰旁进行操作,防止杂菌污染,D正确。8.接种是微生
8、物培养和分离等过程的必要步骤之一。下列关于接种的叙述不正确的是()A.接种通常指无菌条件下将微生物接入培养基的操作B.接种前需要对接种环灼烧灭菌,接种后则无须灭菌C.接种通常在酒精灯火焰附近进行D.接种环不能将培养基的表面划破【解析】选B。无菌条件下将微生物接入培养基的操作过程称为接种,A正确;接种前需要对接种环灼烧灭菌,接种后也需灭菌,防止污染环境和感染操作者,B错误;为避免杂菌污染,接种通常在酒精灯火焰附近进行,C正确;接种时接种环不能将培养基的表面划破,D正确。二、非选择题(共2小题,共30分)9.(12分)将马铃薯去皮切块,加水煮沸至马铃薯软烂,过滤得到马铃薯浸出液。在马铃薯浸出液中加
9、入一定量葡萄糖和琼脂,用蒸馏水定容后灭菌,得到马铃薯琼脂培养基。回答下列问题:(1)马铃薯琼脂培养基中的马铃薯浸出液为微生物生长提供了多种营养物质,营养物质类型除氮源外还有_(答出两点即可)。氮源进入细胞后,可参与合成的生物大分子有_(答出两点即可)。(2)分离培养酵母菌通常使用马铃薯琼脂培养基,该培养基在进行接种前要进行_。将酵母菌菌种划线接种在平板上,培养一段时间后可观察到菌落,菌落的含义是_。(3)该培养基按物理性质划分属于_培养基,若要对酵母菌进行扩大培养,此培养基中不应加入的物质是_。【解析】(1)马铃薯浸出液中含有淀粉、蛋白质、脂质、无机盐、水等多种物质,因此,除氮源外其中还有微生
10、物生长所需要的碳源、无机盐等营养要素。进入细胞的氮源可参与合成蛋白质、核酸(DNA、RNA)等含氮的生物大分子。(2)培养基在使用前常用高压蒸汽灭菌法灭菌;菌落概念见答案。(3)该培养基中有凝固剂,属于固体培养基,对微生物进行扩大培养,一般用液体培养基。答案:(1)碳源、无机盐蛋白质、核酸(2)(高压蒸汽)灭菌分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成的肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体(3)固体琼脂10.(18分)自然界中有多种微生物,将其进行合理筛选、培养和应用,能给医药和化工等生产领域带来巨大经济效益。回答下列问题。(1)对培养基进行灭菌时,多采取_法,即将培养基置于_条件
11、下维持1530分钟,目的是杀死培养基中的_。对接种环灭菌时则用_法。(2)若要将微生物采用平板划线法进行分离操作,在固体培养基表面连续进行了4次划线,则需要对接种环灼烧_次。平板划线在做第二次及其后的划线操作时,要从上次划线的_开始划线,最后一次划的线不能与第一次划的线_。(3)将接种后的固体培养基和一个未接种的固体培养基放入恒温箱中_培养,以减少培养基中的水分挥发。其中,培养未接种的固体培养基是为了_。【解析】(1)对培养基进行灭菌时,多采取高压蒸汽灭菌法,即将培养基置于压力100 kPa、温度121 条件下维持1530分钟,目的是杀死培养基中的所有微生物(微生物和芽孢、孢子)。对接种环灭菌
12、用灼烧灭菌法。(2)接种环在每次接种前都要灼烧灭菌,最后一次接种完也要灭菌,所以在固体培养基表面连续进行了4次划线,则需要对接种环灼烧5次。平板划线在做第二次及其后的划线操作时,要从上次划线的末端开始划线,使菌体的数目随着划线次数的增加而逐渐减少,最终获得由单个菌体形成的单个菌落。最后一次划的线不能与第一次划的线相连。(3)将接种后的固体培养基和一个未接种的固体培养基放入恒温箱中倒置培养,以减少培养基中的水分挥发。培养未接种的固体培养基是为了作为对照组,排除培养基被杂菌污染。答案:(1)高压蒸汽灭菌压力100 kPa、温度121 所有微生物(微生物和芽孢、孢子) 灼烧灭菌(2)5末端相连(或相
13、接、相交等意思正确即可)(3)倒置作为对照组,排除培养基被杂菌污染 【互动探究】在平板划线法操作过程中,为什么在第二次及以后划线时,总是从上一次划线的末端开始?提示:目的是将聚集的菌种逐步稀释,以便得到单菌落。 (10分钟30分)1.(5分)下表、 是用来培养微生物的三种培养基。甲、乙、丙都能在中正常生长繁殖;甲能在中正常生长繁殖,而乙和丙都不能;乙能在中正常生长繁殖,甲、丙都不能。下列说法正确的是()粉状硫10 gK2HPO44 gFeSO40.5 g蔗糖10 g(NH4)2SO40.4 gH2O100 mLMgSO49.25 gCaCl20.5 g+A.甲、乙、丙都是异养微生物 B.甲、乙
14、都是自养微生物、丙是异养微生物 C.甲是固氮微生物、乙是自养微生物、丙是异养微生物D.甲是异养微生物、乙是固氮微生物、丙是自养微生物【解析】选C。甲能在中正常生长繁殖,而乙和丙都不能,而培养基缺氮,说明甲能够自身固氮,属于固氮微生物。乙能在中正常生长繁殖,而甲和丙都不能,培养基中没有有机碳源,说明乙能够合成有机物,属于自养微生物。丙不能在培养基生长繁殖,说明不能固氮,又不能在培养基中生长繁殖,说明不能合成有机物,只能在培养基中生长繁殖,说明属于异养微生物。2.(5分)(不定项)(2019江苏高考改编)下列关于微生物实验操作的叙述,正确的是()A.培养微生物的试剂和器具都要进行高压蒸汽灭菌B.接
15、种前后,接种环都要在酒精灯火焰的充分燃烧层进行灼烧C.接种后的培养皿要倒置,以防培养基污染D.可以使用固体培养基将菌种分离并获得纯培养物【解析】选B、C、D。接种室、接种箱等常用紫外线消毒法处理,接种环等常用灼烧灭菌法处理,吸管、培养皿等常用干热灭菌法处理,培养基等用高压蒸汽灭菌法处理,A错误;为了防止杂菌污染,每次接种前后,接种环都要进行灼烧灭菌,B正确;接种后,培养皿需要倒置,以防皿盖上水珠落入培养基造成污染,C正确;分离菌种可以用平板划线法和稀释涂布平板法,所用培养基为固体培养基,分离得到的单菌落即纯培养物,D正确。3.(5分)(不定项)某研究小组用平板划线法从有机废水中分离微生物用于废
16、水处理。下列叙述正确的是()A.培养基转移到培养皿后进行灭菌B.转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线C.接种时不能划破培养基,否则难以达到分离单菌落的目的D.划线操作时完全打开皿盖,划完立即盖上【解析】选B、C。在配制培养基的过程中要先高压蒸汽灭菌后分装到培养皿,A错误;转换划线角度后要对接种环进行灼烧灭菌,冷却后再进行划线,B正确;接种环不应划破培养基表面,否则不能分离得到单菌落,C正确;划线时皿盖打开一条缝,右手于火焰附近处将接种环迅速伸入平板内,划三至五条平行线,盖上皿盖,而不是完全打开皿盖,D错误。4.(15分)(2019全国卷)回答下列与细菌培养相关的问题。(1)在细菌培养时,培养基
17、中能同时提供碳源、氮源的成分是_(填“蛋白胨”“葡萄糖”或“NaNO3”)。通常,制备培养基时要根据所培养细菌的不同来调节培养基的pH,其原因是_。硝化细菌在没有碳源的培养基上_(填“能够”或“不能”)生长,原因是_。(2)用平板培养细菌时一般需要将平板_(填“倒置”或“正置”)。(3)单个细菌在平板上会形成菌落,研究人员通常可根据菌落的形状、大小、颜色等特征来初步区分不同种的微生物,原因是_。(4)有些使用后的培养基在丢弃前需要经过_处理,这种处理可以杀死丢弃物中所有的微生物。【解析】(1)蛋白胨含有C、H、O、N等元素,葡萄糖只含有C、H、O,NaNO3不含有C,所以培养基中蛋白胨能同时提
18、供碳源和氮源。不同细菌生长繁殖所需要的pH不同,因此培养不同的细菌,需要调节培养基的不同pH。硝化细菌属于化能自养型细菌,可以将空气中的二氧化碳等无机物合成为有机物,它可以在没有碳源的培养基上生长。 (2)用平板培养基培养细菌时,一般需要将平板倒置,以防止培养皿盖上凝结的水珠滴落,导致污染。(3)不同种的微生物在一定条件下培养,可在培养基上形成大小、颜色、形状等不同的菌落,这是一种比较稳定的特征,可根据菌落的特征区分不同种的微生物。(4)使用后的培养基需要用强烈的物理或化学手段进行灭菌,以杀灭其中所有的微生物,避免污染环境。答案:(1)蛋白胨不同细菌生长繁殖所需的pH不同能够硝化细菌可以利用空气中的CO2作为碳源(2)倒置(3)在一定的培养条件下,不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征(4)灭菌