1、生物技术实践一、单选题 1.某学者欲研究被石油污染过的土壤中细菌数量，并从中筛选出能分解石油的细菌。下列操作错误的是( )A 利用平板划线法对细菌进行计数B 用以石油为唯一碳源的培养基筛选C 采用稀释涂布平板法分离菌种D 称取和稀释土壤样品时应在火焰旁2.下列有关生物技术实践操作的叙述错误的是()A 果醋发酵过程中，要适时充气，有利于醋酸菌的代谢B 制作腐乳时，加盐腌制可使豆腐块变硬且能抵制杂菌生长C 制备固定化酵母细胞时，配制海藻酸钠溶液需小火或间断加热D 家庭制作果酒时，需用洗涤剂反复冲洗葡萄表面，发酵效果才好3.以下关于猪血红蛋白提纯的描述，不正确的是()A 洗涤红细胞时，使用生理盐水可
2、防止红细胞破裂B 猪成熟红细胞中缺少细胞器和细胞核，提纯时杂蛋白较少C 血红蛋白的颜色可用于凝胶色谱法分离过程的监测D 在凝胶色谱法分离过程中，血红蛋白比分子量较小的杂蛋白移动慢4.下列与果酒、果醋和腐乳制作相关的叙述，正确的是( )A 腐乳制作所需要的适宜温度最高B 果醋发酵包括无氧发酵和有氧发酵C 使用的菌种分别是酵母菌、醋酸菌、乳酸菌D 使用的菌种都具有细胞壁、核糖体、DNA和RNA5.能够测定样品活菌数的方法是()A 稀释涂布平板法B 直接计数法C 质量法D 比浊法6.在泡菜腌制过程中亚硝酸盐含量变化曲线正确的是()A 答案AB 答案BC 答案CD 答案D7.下图中所示的酶固定化技术中
3、属于包埋法的一组是()A B C D 8.某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。下列叙述正确的是()A 培养基分装到培养皿后进行灭菌B 转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线C 接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养D 培养过程中每隔一周观察一次9.本实验中有三次过滤：过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液 过滤含粘稠物的0.14mol/LNaCl溶液过滤溶解有DNA的2mol/LNaCl溶液 以上三次过滤分别为了获得（ ）A 含核物质的滤液、纱布上的粘稠物、含DNA的滤液B 含核物质的滤液、滤液中DNA粘稠物、含DNA的滤液C 含核物质的滤液、滤液中DNA粘稠物、纱布上的DNAD 含较纯的DNA
4、滤液、纱布上的粘稠物、含DNA的滤液10.通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物。在缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌的生长；在培养基中加入10%的酚可以抑制细菌和霉菌的生长。利用上述方法能从混杂的微生物群体中分别分离出()大肠杆菌霉菌放线菌固氮细菌A B C D 只有11.研究者从冰川土样中分离获得了具有较高脂肪酶活性的青霉菌菌株，为了在此基础上获得脂肪酶活性更高的菌株，最可行的做法是（ ）A 用紫外线照射青霉菌菌株，再进行筛选B 将青霉菌菌株与能高效水解蛋白质的菌株混合培养，再进行筛选C 将能高效水解蛋白质的菌株的基因导入青霉
5、菌菌株，再进行筛选D 设置培养基中各种营养成分的浓度梯度，对青霉菌菌株分别培养，再进行筛选12.下列有关生物技术实践的叙述正确的是A 在用酒精析出DNA时，要使用冷酒精B 在5060水浴中，DNA遇二苯胺试剂后即呈蓝色C 加酶洗衣粉可快速去除各种衣料上的顽固污渍D 利用固定化酵母细胞进行发酵，糖类的作用只是作为反应底物13.下列有关微生物实验的叙述，不正确的是A 获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染B 平板划线法可用于微生物的计数C 分离不同的微生物要采用不同的稀释度D 观察菌落的特征可以用来进行菌种的鉴定14.某兴趣小组拟用组织培养繁殖一种名贵花卉，其技术路线为“取材消毒愈伤组织培养出芽生根移
6、栽”。下列有关叙述，错误的是()A 消毒的原则是既杀死材料表面的微生物，又减少消毒剂对细胞的伤害B 在愈伤组织培养中加入细胞融合的诱导剂，可获得染色体加倍的细胞C 出芽是细胞再分化的结果，受基因选择性表达的调控D 生根时，培养基通常应含萘乙酸等生长素类调节剂15.下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是( )A 用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板B 取104，105，106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于各组平板上C 将实验组和对照组平板倒置，37 恒温培养2448小时D 确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数16
7、.用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数量，其结果与实际值相比（ ）A 比实际值高B 比实际值低C 和实际值一致D 可能比实际值高，也可能比实际值低17.无菌技术是植物组织培养能否获得成功的关键，以下说法正确的是()由于植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，对无菌操作的要求非常严格对培养基及器械用高压蒸汽灭菌对培养材料进行表面灭菌时，一方面要考虑药剂的消毒效果，另一方面还要考虑植物材料的耐受能力培养中不同药剂、不同植物材料，甚至不同器官要区别对待对培养材料可用高压蒸汽灭菌如果不小心引起污染，将可能造成培养工作前功尽弃A B C D 18.下列关于细菌的叙述，错误的是（ ）A 硝化细菌能以N
8、H3作为氮源和能源物质B 某些细菌可以利用光能固定CO2合成有机物C 生长因子是某些细菌生长过程中需要额外补充的营养物质D 含伊红和美蓝试剂的培养基不能用来鉴别牛奶中的大肠杆菌19.卵原细胞在进行DNA复制时，细胞中不可能出现的是（ ）A 解旋B 蛋白质合成C 基因突变D 基因重组20.欲从土壤中分离出能分解尿素的细菌，下列实验操作中不正确的是()A 将土壤用无菌水进行一系列的梯度稀释B 同一浓度的土壤稀释液应至少涂布三个平板C 可将未接种的培养基在相同条件下培养作为对照D 用加入刚果红指示剂的培养基可筛选出分解尿素的细菌二、非选择题 21.某生物兴趣小组开展DNA粗提取的相关探究活动，具体步
9、骤如下：材料处理：称取新鲜的花菜、辣椒和蒜黄各2份，每份10 g。剪碎后分成两组，一组置于20、另一组置于20条件下保存24 h。DNA粗提取：第一步：将上述材料分别放入研钵中，各加入15 mL研磨液，充分研磨。用两层纱布过滤，取滤液备用。第二步：先向6只小烧杯中分别注入10 mL滤液，再加入20 mL体积分数为95%的冷酒精溶液，然后用玻璃棒缓缓地向一个方向搅拌，使絮状物缠绕在玻璃棒上。第三步：取6支试管，分别加入等量的2 mol/L NaCl溶液溶解上述絮状物。DNA检测：在上述试管中各加入4 mL二苯胺试剂，混合均匀后，置于沸水中加热5 min，待试管冷却后比较溶液的颜色深浅，结果如下表
10、。(注：“”越多表示蓝色越深)分析上述实验过程，回答下列问题：(1)该探究性实验课题名称是_。(2)第二步中“缓缓地”搅拌，这是为了减少_。(3)根据实验结果，得出结论并分析。结论1：与20相比，相同实验材料在20条件下保存，DNA的提取量较多。结论2：_。针对结论1，请提出合理的解释：_。(4)氯仿密度大于水，能使蛋白质变性沉淀，与水和DNA均不相溶，且对DNA影响极小。为了进一步提高粗提取时DNA纯度，依据氯仿的特性，在DNA提取第三步的基础上继续操作的步骤是：_，然后用体积分数为95%的冷酒精溶液使DNA析出。22.生物柴油是一种可再生的清洁能源，其应用在一定程度上能够减缓人类对化石燃料
11、的消耗。科学家发现，在微生物M产生的脂肪酶作用下，植物油与甲醇反应能够合成生物柴油(如下图)。(1)用于生产生物柴油的植物油不易挥发，宜选用_、_方法从油料作物中提取。(2)筛选产脂肪酶的微生物M时，选择培养基中添加的植物油为微生物生长提供_，培养基灭菌采用的最适方法是_法。(3)测定培养液中微生物数量，可选用_法直接计数；从微生物M分离提取的脂肪酶通常需要检测_，以确定其应用价值；为降低生物柴油生产成本，可利用_技术使脂肪酶能够重复使用。(4)若需克隆脂肪酶基因，可应用耐热DNA聚合酶催化的_技术。23.下面是分离分解尿素的细菌所用的培养基配方：请根据以上配方，回答下列问题：(1)该培养基含
12、有微生物所需要的_类营养物质。其中最主要的碳源是_，氮源是_。(2)该培养基按物理性质划分是_培养基；按培养基的作用划分是_培养基。(3)该培养基具有选择作用的原因是_。(4)在该培养基中，可通过检测pH的变化来判断尿素是否被分解，依据的原理是_。所用方法是在培养基中加入_指示剂，如果尿素被分解，则培养基变成_色。24.微生物在人类生括、生产与科研中发挥着重要作用，请回答下列问题：（1）制作果酒需利用_（填“微生物名称”）进行发酵。由果酒转变成果醋的制作时，需要改变的环境条件是_和_。（2）腐乳制作过程中加盐的作用是_和_ 。（3）土壤中富含各种微生物，将土壤浸出液接种到特定培养基上，可获取能
13、分解纤维素的细菌，实验室中获取纯净菌的接种方法有_ 和_ 。虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、氨源_和_。答案解析1.【答案】A【解析】分离细菌常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法，但平板划线法不能对细菌进行计数；筛选能分解石油的细菌，要以石油作为培养基中唯一的碳源；筛选细菌的整个操作过程都需要在无菌条件下进行，所以应在火焰旁进行。2.【答案】D【解析】果醋发酵是需氧发酵；制作腐乳，加盐腌制可使豆腐块变硬且能抵制杂菌生长；制备固定化酵母细胞时，配制海藻酸钠溶液需小火或间断加热；家庭制作果酒时，利用的是附着在葡萄皮的表面酵母菌，反复冲洗葡萄，附着的酵母菌越少，不利于发酵。3.【答案
14、】D【解析】猪血红蛋白提纯过程中，采用凝胶色谱法分离时，血红蛋白比分子量较小的杂蛋白移动快。4.【答案】D【解析】果酒、果醋和腐乳制作所使用的菌种分别是酵母菌（单细胞真菌）、醋酸杆菌（属于需氧型细菌）和毛霉（多细胞真菌），它们均有细胞结构，D正确。A选项，三者制作时的适宜温度范围，其中果醋制作的适宜温度最高，为30-35；醋酸杆菌为需氧型细菌，因此进行的是有氧发酵；C中腐乳制作的菌种明显有误。5.【答案】A【解析】选A；直接计数法是利用特定的计数板，在显微镜下计算一定容积量样品中微生物的数量，不能区分死菌与活菌；质量法是用于微生物生长测定的一种方法，有湿重法和干重法，也可以通过测蛋白质和DNA
15、含量反映细胞的物质质量；比浊法是在一定范围内，悬液中细胞浓度与浑浊度成正比，即与光密度成正比，菌越多，光密度越大；活菌在适宜培养基和良好生长条件下通过生长形成菌落，此法又称活菌计数法，可采用稀释涂布平板法接种。6.【答案】C【解析】泡菜腌制过程中，由于坛内环境中硝酸还原菌的繁殖，促进硝酸盐还原为亚硝酸盐，但随腌制时间延长，乳酸菌大量繁殖，产生乳酸，抑制硝酸盐还原菌繁殖，同时亚硝酸盐又被分解，使亚硝酸盐含量逐渐下降。7.【答案】D【解析】包埋法即将酶包埋于网格或胶囊中如图、所示，图中为吸附法，为化学结合法。8.【答案】B【解析】倒平板操作时，培养基的灭菌应在分装之前进行，A错误；为使下一次划线的
16、菌种只是从上一次划线的末端开始，故每次划线前都要灼烧接种环，B正确；培养微生物时，观察的时间应据具体情况而定，D错误。9.【答案】A【解析】用蒸馏水稀释鸡血细胞液，使血细胞的细胞膜、核膜破裂，释放出核物质，此时过滤只能得到含DNA和其他物质如蛋白质的滤液，这种滤液必须经过实验中其他步骤得相继处理，方能得到较纯的DNA。DNA在0.14mol/LNaCl溶液中溶解度最低，成丝状粘稠物，可经过滤留在纱布上。10.【答案】A【解析】选A；缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长，而固氮细菌能生长；在培养基中加青霉素可以抑制细菌和放线菌等原核生物细胞壁的合成，而霉菌属于真核生物，故能生长；在培养基中加入
17、10%的酚可以抑制细菌和霉菌的生长，对放线菌的生长无影响。11.【答案】A【解析】B将青霉菌菌株与能高效水解蛋白质的菌株混合培养，再进行筛选。得到的可能性小。C将能高效水解蛋白质的菌株的基因导入青霉菌菌株，再进行筛选，操作复杂，技术要求高。D设置培养基中各种营养成分的浓度梯度，对青霉菌菌株分别培养，再进行筛选，不能改变活性。12.【答案】A【解析】A、在用酒精析出DNA时，要使用体积分数为95%的冷酒精，A正确；B、在沸水浴中，DNA遇二苯胺试剂后即呈蓝色，B错误；C、酶的作用具有专一性，因此加酶洗衣粉能快速去除某些顽固污渍，C错误；D、利用固定化酵母细胞进行发酵，糖类除了作为反应底物，还为酵
18、母菌提供营养，D错误故选：A13.【答案】B【解析】本题主要考查微生物培养的主要内容，考查识记、理解与运用能力。难度较小。微生物培养获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染，A正确；稀释涂布平板法可以用于微生物的计数，B错误；分离微生物时涂布接种需要对培养液进行梯度稀释，分离不同的微生物要采用不同的稀释度，C正确；不同的微生物具有不同的菌落特征，观察菌落的特征可以用来进行菌种的鉴定，D正确。14.【答案】B【解析】消毒剂的使用既要杀死表面微生物，又要防止伤害组织细胞，影响组织培养，A项正确；植物细胞融合是指经纤维素酶和果胶酶处理后得到的原生质体的诱导融合，带有细胞壁的愈伤组织细胞不能诱导融合形成染色
19、体加倍的细胞，B项错误；出芽和生根都是细胞再分化的结果，其实质是基因的选择性表达，C项正确；萘乙酸为生长素类似物，可诱导愈伤组织生根，D项正确。15.【答案】D【解析】采用稀释涂布平板法统计菌落数目时，一般选择菌落数在30300的平板进行计数。16.【答案】B【解析】本题考查微生物的计数问题，弄清稀释涂布平板法的原理是正确解答该题的前提。因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，而样品稀释度无论多高都很难使其中的细菌都单个分布于培养基上，故计数结果比实际值低。17.【答案】C【解析】植物组织培养的材料大部分来自田间，带有大量病毒，需要进行灭菌。使用高压蒸汽灭菌不仅把病毒杀灭，
20、而且也杀死了外植体，应采用化学药物消毒法。18.【答案】D【解析】某些细菌如蓝细菌（蓝藻）、光合细菌以及红螺菌都能进行光合作用。生长因子是指微生物生长不可缺少的微量有机物，主要包括维生素、氨基酸和碱基等。而微生物的营养物质包括水、无机盐、碳源、氮源和生长因子，它们都是要从外界获得补充的。常用的伊红美蓝乳糖培养基，可用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌，如果有大肠杆菌，因其强烈分解乳糖而产生大量的混合酸，菌体带H+，故菌落被染成深紫色，从菌落表面的反射光中还可以看到金属光泽。19.【答案】D【解析】卵原细胞在进行DNA复制可能会出现基因突变。20.【答案】D【解析】本题考查微生物的分离
21、与培养，意在考查考生的实验分析能力。为了获得单个菌落，应将土壤用无菌水进行一系列的梯度稀释，A正确；为了使结果更加准确，同一浓度的土壤稀释液至少要涂布3个平板进行重复实验，然后计算平均值，B正确；加入刚果红的培养基用来筛选纤维素分解菌，D错误。21.【答案】(1)探究不同材料和不同保存温度对DNA提取量的影响；(2)DNA断裂；(3)等质量的不同实验材料，在相同的保存温度下，从蒜黄提取的DNA量最多；低温抑制了相关酶的活性，DNA降解速度慢；(4)将第三步获得的溶液与等量的氯仿充分混合，静置一段时间，吸取上清液。【解析】(1)该探究性实验课题名称是：探究不同材料和不同保存温度对DNA提取量的影
22、响；(2)第二步中“缓缓地”搅拌，这是为了减少DNA断裂；(3)根据实验结果，可得出结论：结论1：与20相比，相同实验材料在20条件下保存，DNA的提取量较多。结论2：等质量的不同实验材料，在相同的保存温度下，从蒜黄提取的DNA量最多；针对结论1，可请提出合理的解释为：低温抑制了相关酶的活性，DNA降解速度慢；(4) 为了进一步提高粗提取时DNA纯度，依据氯仿的特性，在DNA提取第三步的基础上继续操作的步骤是：将第三步获得的溶液与等量的氯仿充分混合，静置一段时间，吸取上清液。22.【答案】(1)压榨；萃取(注：两空顺序无先后)；(2)碳源；高压蒸汽灭菌；(3)显微镜直接计数；酶活性(或：酶活力
23、)；固定化酶(或：固定化细胞)；(4)PCR(或：多聚酶链式反应，聚合酶链式反应)。【解析】(1)植物油的提取方法有蒸馏、压榨和萃取，蒸馏常应用于挥发性较强的植物油的提取。(2)筛选产脂肪酶的微生物M时，选择培养基中添加的植物油为微生物生长提供碳源，这样不能产脂肪酶的微生物就无法利用植物油，将不能在该培养基上存活下来，只有能产脂肪酶的微生物M才能利用植物油从而在选择培养基上存活下来；培养基灭菌的最适方法是高压蒸汽灭菌法。(3)测定培养液中微生物的数量可分为直接计数法和间接计算法，直接计数法常用的是显微镜直接计数法；从微生物M中提取的脂肪酶应检测其活性，这样才能保证酶发挥作用，确保具有利用价值；
24、固定化酶和固定化细胞技术是利用化学或物理方法将酶固定在一定空间内的技术，是指将酶固定在不溶于水的载体上，使酶既能与反应物接触，又能与产物分离，还可以使酶能够反复利用，这样既可以降低生产成本，提高产品的质量，还可以减少对环境的污染。(4)PCR技术是一种体外扩增DNA片段的技术，克隆基因可用这种方法。23.【答案】(1)4；葡萄糖；尿素；(2)固体；选择；(3)该培养基中唯一的氮源是尿素，只有能分解尿素的微生物才能在该培养基上生长和繁殖；(4)在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强，pH升高；酚红；红。【解析】(1)该培养基中含有碳源、氮源、水和无机盐四
25、类营养物质，葡萄糖是最主要的碳源，尿素是氮源。(2)由于有凝固剂琼脂的存在，该培养基属于固体培养基。(3)由于尿素是该培养基的唯一氮源，只有能分解尿素的微生物才能生长，因此该培养基属于选择培养基。(4)尿素被分解可产生氨，氨能使酚红指示剂变成红色，据此可推测培养基中的尿素是否被分解。24.【答案】（1）酵母菌 温度 氧气（2）析出豆腐中的水分，使豆腐变硬 抑制微生物的生长，避免豆腐变质（3）平板划线法 稀释涂布平板法 无机盐 碳源【解析】（1）制作果酒而利用酵母菌进行发酵由果酒转变成果醋的制作时，由于酵母菌生长和醋酸菌的最适生长温度和代谢类型不一样，要改变的环境条件是温度和 氧气（2）腐乳制作过程中加盐的作用是析出豆腐中的水分，使豆腐变硬和抑制微生物的生长，避免豆腐变质（3）实验室中获取纯净菌的接种方法有 平板划线法和 稀释涂布平板法虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、氮源、无机盐和碳源