1、1.（2016江苏卷.33）（9分）下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注。请回答下列问题：（1）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用_两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过_酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒，需将其转入处于_态的大肠杆菌。（2）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加_，平板上长出的菌落，常用PCR鉴定，所用的引物组成为图2中_。（3）若BamH I酶切的DNA末端与Bcl I酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为 ，对于该部位，这两种酶 （填“都能”、“都
2、不能”或“只有一种能”）切开。（4）若用Sau3A I切图1质粒最多可能获得 种大小不同的DNA片段。【答案】（1）BclI和Hind 连接 感受 （2）四环素 引物甲和引物丙（3） 都不能 （4）7（2）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，根据质粒上的抗性基因，应在筛选平板培养基中添加四环素。PCR技术要求两种引物分别和目的基因的两条单链结合，沿相反的方向合成子链。【考点定位】基因工程，限制酶，连接酶，重组质粒【名师点睛】此题是对基因工程的考查，解答本题的关键在于理解重组质粒中标记基因的作用，在插入目的基因时不能破坏标记基因，故选择限制酶须注意；PCR扩增基因时，两种引物结合的部位相反，延伸
3、的方向相反；限制酶具有特异性，不同的限制酶识别不同的序列，判断某种限制酶能否切割某片段，应根据该片段中是否含有限制酶的识别序列。2.（2016课标1卷.40）某一质粒载体如图所示，外源DNA插入到Ampr或Tetr中会导致相应的基因失活（Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因）。有人将此质粒载体用BamHI酶切后，与用BamHI酶切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应，用得到的混合物直接转化大肠杆菌，结果大肠杆菌有的未被转化，有的被转化。被转化的大肠杆菌有三种，分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌。回答下列问题： （1）质
4、粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有_（答出两点即可）。而作为基因表达载体，除满足上述基本条件外，还需具有启动子和终止子。（2）如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选，在上述四种大肠杆菌细胞中，未被转化的和仅含有环状目的基因的细胞是不能区分的，其原因是_；并且_和_的细胞也是不能区分的，其原因是_。在上述筛选的基础上，若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落，还需使用含有是_的固体培养基。（3）基因工程中，某些噬菌体经改造后可以作为载体，其DNA复制所需的原料来自于_【答案】（1）能够自我复制、具有标记基因、具有一个至多个限制酶切割位点（答出两点即可）（2）二者均不含氨苄青
5、霉素抗性基因，在该培养基上都不能生长 含有质粒载体 含有插入了目的基因的重组质粒（或答含有重组质粒） 二者都含氨苄青霉素抗性基因，在该培养基上均能生长 四环素 （3）受体细胞【考点定位】基因工程【名师点睛】本题以图文结合的形式，综合考查学生对基因工程技术的熟记和理解能力。解决此类问题的关键是，熟记并理解相关的基础知识、形成知识网络，从题图中挖掘出隐含的信息，据此结合每个问题情境进行图文转换、实现对知识的整合和迁移。3.（2016新课标卷.40）图（a）中的三个DNA片段上依次表示出了EcoR I、BamH I和Sau3A I三种限制性内切酶的识别序列与切割位点，图（b）为某种表达载体示意图（载
6、体上的EcoR I、Sau3A I的切点是唯一的）。根据基因工程的有关知识，回答下列问题：（1）经BamH I酶切割得到的目的基因可以与上述表达载体被_酶切后的产物连接，理由是_。（2）若某人利用图（b）所示的表达载体获得了甲、乙、丙三种含有目的基因的重组子，如图（c）所示。这三种重组子中，不能在宿主细胞中表达目的基因产物的有_，不能表达的原因是_。（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有_和_，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是_。【答案】（1）Sau3A 两种梅切割后产生的片段具有相同的黏性末端（2）甲和丙 甲中目的基因插入在启动子的上游，丙中目的基因插入在终止子的下
7、游，两者目的基因均不能转录（3）EcoliDNA连接酶 T4DNA连接酶 T4DNA连接酶【考点定位】基因工程的原理及技术【名师点睛】1确定限制酶的种类(1)根据目的基因两端的限制酶切点确定限制酶的种类应选择切点位于目的基因两端的限制酶，如图甲可选择Pst。不能选择切点位于目的基因内部的限制酶，如图甲不能选择Sma。为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒，如图甲也可选择用Pst和EcoR两种限制酶(但要确保质粒上也有这两种酶的切点)。(2)根据质粒的特点确定限制酶的种类所选限制酶要与切割目的基因的限制酶相一致，以确保具有相同的黏性末端。质粒作为载体必须
8、具备标记基因等，所以所选择的限制酶尽量不要破坏这些结构，如图乙中限制酶Sma会破坏标记基因；如果所选酶的切点不止一个，则切割重组后可能丢失某些片段，若丢失的片段含复制起点区，则切割重组后的片段进入受体细胞后不能自主复制。2基因表达载体中启动子、终止子的来源(1)如果目的基因是从自然界中已有的物种中分离出来的，在构建基因表达载体时，不需要在质粒上目的基因的前后端接上特定的启动子、终止子，因为目的基因中已含有启动子、终止子。(2)如果目的基因是通过人工方法合成的，或通过cDNA文库获得的，则目的基因是不含启动子和终止子的。若只将基因的编码序列导入受体生物中，目的基因没有启动子、终止子，是无法转录的
9、，因此，在构建基因表达载体时，需要在与质粒结合之前，在目的基因的前后端接上特定的启动子、终止子。4.（2016天津卷.7） (12分)人血清白蛋白(HSA) 具有重要的医用价值，只能从血浆中制备。下图是以基因工程技术获取重组HSA（rHSA）的两条途径。（1）获取HSA基因，首先需采集人的血液，提取_合成总cDNA，然后以cDNA为模板，采用PCR技术扩增HSA基因。下图中箭头表示一条引物结合模板的位置及扩增方向，请用箭头在方框内标出标出另一条引物的位置及扩增方向。 （2）启动子通常具有物种及组织特异性，构建在水稻胚乳细胞内特异表达rHSA的载体，需要选择的启动子是_（填写字母，单选）。A.人
10、血细胞启动子 B.水稻胚乳细胞启动子 C.大肠杆菌启动子 D.农杆菌启动子 （3）利用农杆菌转化水稻受体细胞的过程中，需添加酚类物质，其目的是_。（4）人体合成的初始HSA多肽，需要经过膜系统加工形成正确的空间结构才能有活性。与途径II相比，选择途径I获取rHSA的优势是_。（5）为证明rHSA具有医用价值，须确认rHSA与_的生物学功能一致。【答案】（12分）（1）总RNA （或mRNA）（2）B（3）吸引农杆菌移向水稻受体细胞，有利于目的基因成功转化（4）水稻是真核生物，具有膜系统，能对初始rHSA多肽进行高效加工（5）HAS【考点定位】本题考查基因工程相关内容。【名师点睛】本题结合生产r
11、HSA的实例考查目的基因的获取、基因表达载体的构建、转化方法、受体细胞的选择、目的基因的检测与鉴定。属于容易题。解题关键是明确PCR技术的原理，明确两条引物结合位置和合成子链的方向相反。5.（2016新课标2卷.40)（15分）下图表示通过核移植等技术获得某种克隆哺乳动物（二倍体）的流程。回答下列问题：（1）图中A表示正常细胞核，染色体数为2n，则其性染色体的组成可为_。过程表示去除细胞核，该过程一般要在卵母细胞培养至适当时期再进行，去核时常采用_的方法。代表的过程是_。（2）经过多次传代后，供体细胞中_的稳定性会降低，因此，选材时必须关注传代次数。（3）若获得的克隆动物与供体动物性状不完全相
12、同，从遗传物质的角度分析其原因是_。（4）与克隆羊“多莉（利）”培养成功一样，其他克隆动物的成功获得也证明了_。【答案】（15分）（1）XX或XY 显微操作（去核法） 胚胎移植（2）遗传物质 （3）卵母细胞的细胞质中的遗传物质会对克隆动物的形状产生影响（4）已经分化的动物体细胞核具有全能性。【考点定位】核移植技术、动物细胞培养技术、胚胎移植【名师点睛】本题以“获得某种克隆哺乳动物（二倍体）的流程图”为情境，综合考查学生对核移植技术、动物细胞培养技术、胚胎移植的熟记和理解能力。解决此类问题的关键是，熟记并理解相关的基础知识、形成知识网络，“读懂”流程图中的每个箭头的含义，据此结合每个问题情境进行
13、图文转换、实现对知识的整合和迁移。6.（2016海南卷.31）基因工程又称为DNA重组技术，回答相关问题：（1）在基因工程中，获取目的基因主要有两大途径，即_和从_中分离。（2）利用某植物的成熟叶片为材料，同时构建cDNA文库和基因组文库，两个文库相比，cDNA文库中含有的基因数目比基因组文库中的少，其原因是_。（3）在基因表达载体中，启动子是_聚合酶识别并结合的部位。若采用原核生物作为基因表达载体的受体细胞，最常用的原核生物是_。（4）将目的基因通过基因枪法导入植物细胞时，常用的携带目的基因的金属颗粒有_和_颗粒。【答案】（15分）（1）人工合成 生物材料（每空2分，共4分，其他合理答案可酌
14、情给分）（2）cDNA文库中只含有叶细胞已转录（或已表达）的基因，而基因组文库中含有该植物的全部基因（5分，其他合理答案可酌情给分）（3）RNA（2分） 大肠杆菌（或答细菌）（2分）（4）金粉 钨粉（每空1分，共2分）【考点定位】基因工程【名师点睛】（1）目的基因的获取有从基因文库中获取和人工合成两类方法。（2）基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因。（3）目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法；导入动物细胞常用显微注射技术，导入微生物细胞常用感受态细胞法。7.（2016上海卷.九）回答下列有关遗传信息传递与表达的问题。在图27所示的质粒PZHZ11（总长为3.6kb，1kb=100
15、0对碱基因）中，lacZ基因编码-半乳糖苷酶，后者催化生成的化合物能将白色的大肠杆菌染成蓝色。68.若先用限制酶BamHI切开pZHZ11，然后灭活BamHI酶，再加DNA连接酶进行连接，最后将连接物导入足够数量的大肠杆菌细胞中，则含3.1kb质粒的细胞颜色为；含3.6kb质粒的细胞颜色为。69.若将两端分别用限制酶BamHI和BglHI切开的单个目的基因片段置换pZHZ11中0.5kb的BamHI酶切片段，形成4.9kb的重组质粒，则目的基因长度为kb。70.上述4.9kb的重组质粒有两种形式，若用BamHI和EcoRI联合酶切其中一种，只能获得1.7kb和3.2kb两种DNA片段；那么联合
16、酶切同等长度的另一种重组质粒，则可获得kb和kb两种DNA片段。71.若将人的染色体DNA片段先导入大肠杆菌细胞中克隆并鉴定目的基因，然后再将获得的目的基因转入植物细胞中表达，最后将产物的药物蛋白注入小鼠体内观察其生物功能是否发挥，那么上述过程属于。A.人类基因工程 B.动物基因工程 C.植物基因工程 D.微生物基因工程【答案】68.白色 白色和蓝色/白色或蓝色69.1.870.1.43.571.C3.2-18=1.4kb两种DNA片段。71题干所述目的是让人的基因在植物细胞中表达，属于植物基因工程。【考点定位】本题主要考查基因工程。【名师点睛】本题考查限制酶和DNA连接酶的使用，属于较难题。
17、解答本题的关键是明确DNA连接酶在进行连接时，插入的片段可能有正反两种插入方式。本题68题第二空、70题容易发生错误，错因在于未能考虑到上述情况。8(2016届江苏省四校高三5月联考生物试卷）下面是将乙肝病毒控制合成病毒表面主蛋白基因HBsAg导入巴斯德毕赤酵母菌生产乙肝疫苗的过程及有关资料，请分析回答下列问题。资料1 巴斯德毕赤酵母菌是一种甲基营养型酵母菌，能将甲醇作为其唯一碳源，此时AOX1基因受到诱导而表达5AOX1和3AOX1(TT)分别是基因AOX1的启动子和终止子。资料2 巴斯德毕赤酵母菌体内无天然质粒，所以科学家改造出了图1所示的pPIC9K质粒用作载体，其与目的基因形成的重组质
18、粒经酶切后可以与酵母菌染色体发生同源重组，可以将目的基因整合于染色体中以实现表达。（1）如果要将HBsAg基因和pPIC9K质粒重组，应该在HBsAg基因两侧的A和B位置接上 、 限制酶识别序列， 这样设计的优点是避免质粒和目的基因自身环化。（2）酶切获取HBsAg基因后，需用 将其连接到pPIC9K质粒上，形成重组质粒，并将其导入大肠杆菌以获取 。（3）步骤3中应选用限制酶 来切割重组质粒获得重组DNA，然后将其导入巴斯德毕赤酵母菌细胞。（4）为了确认巴斯德毕赤酵母菌转化是否成功，在培养基中应该加入卡拉霉素以便筛选，转化后的细胞中是否含有HBsAg基因，可以用 方法进行检测。（5）转化的酵母
19、菌在培养基上培养一段时间后，需要向其中加入 以维持其生活，同时诱导HBsAg基因表达。（6）与大肠杆菌等细菌相比，用巴斯德毕赤酵母菌细胞作为基因工程的受体细胞，其优点是在蛋白质合成后，细胞可以对其进行 并分泌到细胞外，便于提取。【答案】(8分) (1)SnaB Avr (2)DNA连接酶 大量重组质粒（重组质粒不得分） (3)Bgl (4)DNA分子杂交 (5)甲醇 (6)加工(修饰)(2) 用DNA连接酶可将切割后的HBsAg基因和pPIC9K质粒连接成重组质粒；将重组质粒导入大肠杆菌体内的目的是：利用大肠杆菌的无性繁殖，短时间内获取大量的重组质粒。(3) 重组DNA的两侧分别是启动子和终止
20、子，除Bgl外，其他限制酶均会破坏含有启动子、终止子的目的基因。所以步骤3中应选用限制酶Bgl来切割重组质粒获得重组DNA，然后将其导入巴斯德毕赤酵母菌细胞。 (4) 可用DNA分子杂交技术检测巴斯德毕赤酵母菌内是否导入了目的基因。(5) 资料1显示，甲醇为该酵母菌的唯一碳源，同时可诱导HBsAg基因表达，据此可知：转化的酵母菌在培养基上培养一段时间后，需要向其中加入甲醇以维持其生活，同时诱导HBsAg基因表达。(6) 大肠杆菌等细菌为原核生物，细胞内没有对分泌蛋白进行加工修饰的内质网和高尔基体，而巴斯德毕赤酵母菌为真核生物，其细胞内有内质网和高尔基体等复杂的细胞器。所以与大肠杆菌等细菌相比，
21、用巴斯德毕赤酵母菌细胞作为基因工程的受体细胞，其优点是在蛋白质合成后，细胞可以对其进行加工修饰并分泌到细胞外，便于提取。【考点定位】基因工程、微生物的培养、原核细胞与真核细胞。9(2016届江西九江高三下第三次模拟考试理综生物试卷）基因疫苗是指将编码外源性抗原的基因导入人和动物体内，让其在宿主细胞中表达抗原蛋白,诱导机体产生免疫应答。某科研所计划采用基因工程和胚胎工程技术培育具有口蹄疫免疫特性的高产奶牛。请回答下列问题：（1）基因表达载体的构建是基因工程的核心，一个完整的基因表达载体至少包括启动子、_、_、_。启动子位于基因的_，有了它才可以驱动基因转录。（2）制备基因疫苗的基因可以从基因文库
22、中获取，基因文库实际上是含有某种生物不同基因的许多DNA片段的_群体。（3）检测高产奶牛体内是否出现口蹄疫病毒的抗原蛋白，在分子水平上的检测方法是_。（4）胚胎工程最后一道工序的实质是_。（5）为提高胚胎的利用率，可以采用胚胎分割技术,应该选用_的桑椹胚或囊胚进行分割。【答案】(15分,除注明外,每空2分）(1）目的基因 标记基因 终止子(顺序可颠倒） 首端(1分） （2）受体菌(3）抗原一抗体杂交，（4）早期胚胎在相同在相同生理环境条件下空间位置的转移 （5）发育良好、形态正常【考点定位】本题考查基因工程相关知识，意在考察考生对知识点的识记理解掌握程度。【名师点睛】易错警示 规避与基因工程操
23、作有关的7个失分点(1)目的基因的插入位点不是随意的：基因表达需要启动子与终止子的调控，所以目的基因应插入到启动子与终止子之间的部位。(2)基因工程操作过程中只有第三步(将目的基因导入受体细胞)没有碱基互补配对现象。(3)原核生物作为受体细胞的优点：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少。(4)转化的实质是目的基因整合到受体细胞染色体基因组中。(5)一般情况下，用同一种限制酶切割质粒和含有目的基因的片段，但有时可用两种限制酶分别切割质粒和目的基因，这样可避免质粒和质粒之间、目的基因和目的基因之间的连接。(6)不熟悉标记基因的种类和作用：标记基因的作用筛选、检测目的基因是否导入受体细胞，常见的有抗
24、生素抗性基因、发光基因(表达产物为带颜色的物质)等。(7)还应注意的问题有：基因表达载体中，启动子(DNA片段)起始密码子(RNA)；终止子(DNA片段)终止密码子(RNA)。基因表达载体的构建是最核心、最关键的一步，在体外进行。10(2016届宁夏石嘴山第三中学高三下第四次模拟生物试卷）I.我国科研人员克隆了100多个重要基因，取得了抗虫棉、抗虫玉米、耐除草剂大豆等一批重大转基因成果。请回答下列问题：（1）抗虫棉中转入的Bt毒蛋白基因是从苏云金(芽孢)杆菌中分离出来的，该基因编码的Bt蛋白对哺乳动物 （填“有”或“无”）毒害作用。（2）每一种Bt毒蛋白的杀虫范围有限，对现有的毒蛋白进行 ，使
25、其具有更广杀虫范围，属于 （生物工程）的范围。（3）随着转基因成果的不断涌现，人们对转基因生物的安全性的关注与日俱增，在食物安全、生物安全和 三个方面发生了激烈争论。II.关注生态工程的建设。（1）与传统的工程相比,生态工程是一类少消耗、 、可持续的工程体系。（2）“无废弃物农业”是我国古代传统农业的辉煌成就之一,也是生态工程最早和最生动的一种模式，该模式主要遵循生态工程的 原理。我国西北一些地区年降雨量少，适宜种植灌木和草，却被硬性规定种植属于乔木的杨树，致使许多地方的杨树长成半死不活状，结果防护林成了残败的“灰色长城”。其失败的原因主要是违背了 原理。（3）甘肃陇南地区的“九子登科”模式是
26、哪种生态工程建设的实例？（ ）A. 草原生态恢复工程 B.城市环境工程C. 小流域综合治理生态工程 D.湿地生态恢复工程【答案】（15分，除标注外，每空2分）.（1） 无 （2）改造 蛋白质工程 （3）环境安全.（1）多效益 （2）物质循环再生 协调与平衡 （3）C（1分）【考点定位】基因工程、蛋白质工程、转基因生物安全性的争论、生态工程。【名师点睛】本题以综合考查学生对基因工程、蛋白质工程、转基因生物的安全性、生态工程的知识的理解及其掌握情况。解答本题的关键是对有关知识点做到准确记忆并系统地全面地构建知识网络。11(2016届黑龙江大庆第一中学高三第三次模拟考试理科生物试卷）下面是利用奶山羊
27、乳腺生物反应器制备药用白蛋白的流程图，请回答下列问题：（1）若要大量获得目的基因，可使用 扩增白蛋白基因，通过构建的重组表达载体包括目的基因、启动子、终止子和 、复制原点等部分。该重组表达载体导入的受精卵性染色体组成应为 。（2）如果需要通过采集到更多的卵子，常用的激素是 ；通过采集的精子需 后才能进行受精作用。在体外培养受精卵时，除了给予一定量的O2以维持细胞呼吸外，还需要提供 （气体）以维持 。（4）为使能成功进行，需要对奶山羊C进行 处理，使之与供体的生理状况保持相同。【答案】（1）PCR技术 标记基因 XX（2）促性腺激素 获能（3）C02 培养液的PH（4）同期发情 考点：基因工程、
28、胚胎工程【名师点睛】分析题图：图示是利用崂山奶山羊乳腺生物反应器制备药用白蛋白的流程图，其中表示卵细胞的采集和培养；表示精子的采集和获能；表示基因表达载体的构建；表示将目镜基因导入受体细胞；表示胚胎移植。12(2016届湖北省高三下学期5月模拟考试 理综生物试卷）我国拥有自主知识产权的抗虫棉，是将苏云金芽孢杆菌的Bt毒蛋白基因导入到棉花的叶肉细胞中培育而成。回答下列问题：（1）在该基因工程中，Bt毒蛋白基因属于 ，离体棉花叶肉细胞属于 。Bt毒蛋白基因可从基因组文库中获取，也可从cDNA文库中获取，含有基因中启动子的文库是 文库。（2）获取的Bt毒蛋白基因需要与载体结合构建基因表达载体。在基因
29、工程中使用的载体有质粒，入噬菌体的衍生物、 等，其中质粒的化学成分是 。（3）科学家最初做抗虫棉试验时，虽已经检测出棉花植株中含有抗虫基因，但让棉虫食用棉花叶片时，棉铃虫并没有被杀死，这说明Bt毒蛋白基因 。为此，科学家对棉植株中的Bt毒蛋白基因进行了修饰，结果食用了棉叶的棉铃虫中毒死亡了，从变异类型分析，这种对Bt毒蛋白基因的修饰属于 。（4）转基因植物存在一定的安全性问题，为避免Bt毒蛋白基因通过花粉传播进入其它植物，一般将Bt毒蛋白基因转入棉花细狍的 （填“细咆核”或“叶绿体”）。【答案】（1）目的基因 受体细胞 基因组（2）动植物病毒 DNA（3）没有成功表达 基因突变（4）叶绿体考点
30、：基因工程的原理及技术13(2016届福建福州一中高三下模拟考试（5月质检）生物卷）基因打靶技术是建立在基因同源重组技术以及胚胎干细胞技术的基础上而发展起来的一种分子生物学技术。结合图示回答问题。注：neor是新霉素抗性基因；tk基因的表达可以使无毒的丙氧鸟苷代谢为毒性物质，导致细胞死亡。（1）将目的基因和与细胞内靶基因同源的DNA 片段都重组到 上，构建打靶载体（基因表达载体）。（2）打靶载体测序验证正确后，利用 酶，将之线性化，以提高重组率。通过 技术导入胚胎干细胞，这样打靶载体与细胞内靶基因同源的区段就有几率发生同源重组。（3）为了筛选发生同源重组的细胞，可在培养液中加入 。最后还需要通
31、过 技术鉴定同源重组的细胞（去除靶基因），将这样的细胞通过 培养后，获得大量打靶成功的细胞。其中，暂时不用的细胞进行液氮（或冷冻）保存。（4）将打靶成功的细胞注射入小鼠囊胚，移植到同种、 的母鼠体内，一段时间后对受体母鼠进行 检查，确保其生下嵌合小鼠。这种嵌合体小鼠长大后，体内同时存在被“修饰”过的基因和未被“修饰”的基因。如果某些小鼠的 （选填“体细胞”、“生殖细胞”）恰巧被“修饰”过了，则它们的杂交后代中，就可能出现基因完全被“修饰”过的小鼠。【答案】（1）载体（或质粒）（1分）（2）限制 （2分） 显微注射（2分）（3）新霉素和丙氧鸟苷（2分） DNA分子杂交（2分 ） 动物细胞（或克隆
32、）（2分 ） （4）生理状态相同（或经同期发情）（2分） 妊娠（1分） 生殖细胞（1分）【考点定位】基因工程、动物细胞培养、胚胎工程。14(2016届海南中学高三第九次月考生物试卷）应用生物工程技术能获得人们需要的生物新品种或新产品，请据图回答下列问题：（1）在培育转基因牛生成人生长激素的过程中，过程需要选取牛的 作为受体细胞，导入成功后经培育得到早期胚胎，在移植入受体母牛子宫之前，必须对胚胎进行性别鉴定，一般取处于囊胚期的 细胞进行检测。（2）在基因表达载体中，人生长激素基因的首端必须含有使其能在牛的乳腺细胞中特异性表达的 ，人生长激素基因在人体和牛体内出现相同表达结果的原因是 。从分子水平
33、检测转基因牛是否培育成功的方法是 。（3）prG能激发细胞不断分裂，通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体，II最可能是 细胞，III代表的细胞具有 的特点。【答案】（1）受精卵 滋养层 （2）乳腺蛋白基因的启动子 所有生物共用一套遗传密码 抗原抗体杂交法 （3）已免疫的B淋巴（或浆细胞） 既能产生特定抗体，又能无限增殖【考点定位】基因工程的原理及技术（）、细胞融合与单克隆抗体（）、胚胎工程的应用（）15(2016届黑龙江哈尔滨六中高三第三次模拟理综生物试卷）哈尔滨啤酒已经有100多年的历史，进入新世纪，技术人员将能使啤酒产生丰富泡沫的LTP1基因植入啤酒酵母中，使其产生LTP1蛋白，酿出
34、泡沫丰富的啤酒，下图为转基因啤酒酵母的生产过程，据此回答相关问题：（1）形成C需要的工具酶是 ，这两种酶作用的化学键均为 。（2）结构B是来自大肠杆菌细胞内的质粒，它的化学本质是 ，在结构B上标记基因的作用是 。（3）利用DNA分子杂交技术可检测C中是否插入了目的基因，该过程中需用 作探针；转基因啤酒酵母培育成功的标志是 。（4）LTP1基因通常可以从基因文库中获取，含有一种生物所有基因的文库称为 ，获得LTP1基因后可以利用 技术进行扩增。（5）人们对转基因生物的安全性的争论：主要有 安全、 安全和 安全三个方面的激烈争论。【答案】（1）限制酶和DNA连接酶 磷酸二酯键（2）小型环状DNA
35、鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的受体细胞筛选出来（3）放射性同位素标记的目的基因或荧光分子标记的目的基因 细胞中合成了LTP1蛋白（4）基因组文库 PCR（5）生物 食物 环境（三者无顺序）【考点定位】本题考查基因工程相关知识，意在考察考生对知识点的识记理解掌握程度。【名师点睛】易错警示 规避与基因工程操作有关的7个失分点(1)目的基因的插入位点不是随意的：基因表达需要启动子与终止子的调控，所以目的基因应插入到启动子与终止子之间的部位。(2)基因工程操作过程中只有第三步(将目的基因导入受体细胞)没有碱基互补配对现象。(3)原核生物作为受体细胞的优点：繁殖快、多为单细胞、遗传
36、物质相对较少。(4)转化的实质是目的基因整合到受体细胞染色体基因组中。(5)一般情况下，用同一种限制酶切割质粒和含有目的基因的片段，但有时可用两种限制酶分别切割质粒和目的基因，这样可避免质粒和质粒之间、目的基因和目的基因之间的连接。(6)不熟悉标记基因的种类和作用：标记基因的作用筛选、检测目的基因是否导入受体细胞，常见的有抗生素抗性基因、发光基因(表达产物为带颜色的物质)等。(7)还应注意的问题有：基因表达载体中，启动子(DNA片段)起始密码子(RNA)；终止子(DNA片段)终止密码子(RNA)。基因表达载体的构建是最核心、最关键的一步，在体外进行。16(2016届湖南五市十校教研教改共同体高
37、三模拟理综生物试卷）下列是生物学技术制备抗体的两个途径模式简图。请据图回答下列问题： （1） 过程至所获取的抗体1 称为_，其中过程是指细胞工程中的_技术。（2） 过程需要_酶，过程则需要的工具酶为_。（3） 处需要筛选，其培养基称为_ （液体培养基/选择培养基/鉴别培养基）。结构甲的组成必须包括启动子_及目的基因等（写两项）。（4）如果想用棉花产生该种抗体，则过程的受体细胞通常选用_菌，经过筛选后再侵染棉花体细胞，转化成功后通过_技术获得能产抗体的转基因棉花植株。【答案】（1）单克隆抗体 细胞融合（2）逆转录限制酶和DNA 连接酶（3）选择培养基终止子、标记基因（4）农杆植物组织培养考点：单
38、克隆抗体的制备过程17(2016届吉林大学附属中学高三模拟考试理科综合生物试卷）Bt毒蛋白基因是应用最为广泛的抗虫基因。请回答下列有关转基因抗虫植物的问题：（1）要从苏云金芽孢杆菌中获取Bt毒蛋白基因，可根据Bt毒蛋白基因的部分已知序列，设计特异性 ，再利用 技术扩增出Bt毒蛋白基因。（2）构建重组质粒时，常用Ti质粒作为载体，是因为Ti质粒上具有_，它能把目的基因整合到受体细胞的_上。这种将目的基因导入受体细胞的方法是 法。（3）若要检测具有抗虫基因的棉花是否产生了相应毒蛋白，在分子水平上可利用_方法进行检测。要确定抗虫基因导入棉花细胞后，是否赋予了棉花抗虫特性，在个体生物学水平上还需要做_
39、实验。（4）目前，转基因植物的安全性问题是社会争论的热点。面对转基因技术的利弊，我们应持有的正确做法是_。【答案】（1）引物（对） PCR（2）TDNA（可转移的DNA） 染色体DNA 农杆菌转化（3）抗原抗体杂交 抗虫接种（4）趋利避害，不能因噎废食【解析】考点：基因工程、转基因植物的安全性问题。【名师点睛】本题以转基因抗虫植物为情境，综合考查学生对基因工程等知识的识记和理解能力。熟记并理解基因工程的操作步骤是解题的关键，并应尽可能与转基因植物的安全性建立联系。18(2016届吉林省实验中学高三第八次模拟考试理综生物试卷）杜泊羊以其生长速度快、肉质好等优点，被称“钻石级”肉用绵羊。科研工作者
40、通过胚胎工程快速繁殖杜泊羊的流程如图所示，请据图回答问题：（1）此过程用到的生物技术有 （答出两个即可得分）。（2）为了获得更多的卵母细胞，需用 对雌性杜泊羊进行处理。进行体外受精前，需将卵母细胞培养到 期；精子需进行 处理。受精时防止多精入卵的两道屏障分别是 和 。（3）生产上常用 期的胚胎进行胚胎移植，移植的胚胎在受体绵羊体内存活的生理基础是 。【答案】（1）体外受精技术、早期胚胎培养技术、胚胎移植等（2）促性腺激素 M中 获能 透明带反应 卵细胞膜反应（3）桑椹胚或囊胚 受体对移入子宫的外来胚胎基本不发生免疫排斥反应【解析】试题分析：（1）分析图示可知：从采集卵母细胞、精子到受精卵的形成
41、用到了体外受精技术；将受精卵培养成早期胚胎用到了早期胚胎培养技术；将早期胚胎移入当地普通绵羊，采用了胚胎移植技术。考点：胚胎工程【名师点睛】本题以“科研工作者通过胚胎工程快速繁殖杜泊羊的流程示意图”为情境，综合考查学生对胚胎工程的知识的识记和理解能力。解答本题需熟记并理解相关的基础知识、形成清晰的知识网络，并且在平时的复习中要注意图文结合。19(2016届江西南昌第二中学临川第一中高三4月联考二理综生物卷）在生物的生长发育过程中，基因是选择性表达的。某真核生物，要想获得极为稀少的mRNA及其克隆，可以用下图所示的差异杂交法。Poly（A)是指位于mRNA上的150-200个腺苷酸残基。请回答下
42、列问题。（1）利用表达目的mRNA的细胞获得放射性标志的探针时，需要用_酶，可以用_作为引物。（2）用羟基磷灰石柱层析法，回收_（填“未杂交的32P标记的单链DNA”或“杂交分子”），用构建_（填“基因组”或“cDNA”）文库。（3）在生物的生长发育过程中，由于基因选择性表达导致细胞_，该过程的结果使多细胞生物体中的细胞趋向_，有利于提高各种生理功能的效率。（4）若用NaOH水解除去mRNA获得的分子与不表达目的mRNA细胞中获得的单链DNA杂交，可能形成杂合双链区和游离的单链区，原因是_。【答案】（1）逆转录酶 Poly （A)（2）未杂交的32P标记的单链DNA cDNA（3）分化 专门化
43、 （4）DNA分子中含有内含子、非编码区等序列，mRNA分子中没有互补的碱基序列，仍然为两条游离的单链，所以出现游离单链区。DNA分子中含有外显子序列，mRNA中具有互补的碱基序列，互补碱基序列就会结合在一起，形成杂合双链区。考点：基因工程、真核细胞的基因结构、基因的表达、细胞分化。20(2016届山东省济宁市高三第二次模拟考试生物试卷）埃博拉病毒（EBO）呈纤维状，EBO衣壳外有包膜，包膜上有5种蛋白棘突（VP系列蛋白和GP蛋白），其中GP蛋白最为关键，能被宿主细胞强烈识别。（1）以GP蛋白作为疫苗比较安全，其原因是GP蛋白自身没有感染能力，但保留有_。（2）科研人员利用经EBO免疫后小鼠的
44、_ _细胞与鼠的瘤细胞进行杂交，获得纯净的单一品种抗体，其特点是_，可以用此抗体与药物制成“生物导弹”，抗击EBO。（3）科研人员将GP蛋白基因通过_（方法）导入牛受精卵中，可以通过_技术从分子水平检测转基因牛是否培育成功。（4）体内受精作用进行时防止多精入卵的机制有_和_。为获得较多的遗传物质相同的早期胚胎，在对囊胚阶段的胚胎进行分割时，要注意将内细胞团。【答案】（1）抗原特性（2）B淋巴（效应B或浆） 特异性强、灵敏度高、并可能大量制备（3）显微注射法 抗原-抗体杂交（4）透明带反应 卵细胞膜反应 均等分割考点：单克隆抗体的制备过程；胚胎移植【名师点睛】1、疫苗一般是减毒或无毒的抗原，具有
45、抗原性，但不具有感染性。2、单克隆抗体的制备过程是：对小动物注射抗原，从该动物的脾脏中获取效应B细胞，将效应B细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选出能产生单一抗体的杂交瘤细胞，克隆化培养杂交瘤细胞（体内培养和体外培养），最后获取单克隆抗体优点为：特异性强，灵敏度高，并可大量制备。3、进行胚胎分割时，应选择发育良好、形态正常的桑椹胚或囊胚对囊胚阶段的胚胎进行分割时要注意将内细胞团均等分割，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。21(2016届山西省康杰中学高三下学期模拟（一）生物试卷）克隆猪成功率较低，与早期胚胎细胞异常凋亡有关。Bcl-2基因是细胞凋亡抑制基因，用PCR技术可以检测该基因转录水平，进而
46、了解该基因与不同胚胎时期细胞淍亡的关系。克隆猪的培育及该基因转录水平检测流程如图。请回答：（1）图中重组细胞的细胞核来自_ _细胞，早期胚胎移入受体子宫继续发育，经桑椹胚、囊胚和_ _胚最终发育为克隆猪。（2）在PCR过程中可检测出cDNA中Bcl-2 cDNA的分子数，进而计算总mRNA中Bcl-2 mRNA的分子数，从而反映出Bcl-2基因的转录水平。图中X表示_过程。在PCR过程中利用_技术可检测出cDNA中Bcl-2 cDNA的分子数。（3）该过程所涉及的现代生物技术有早期胚胎培养、胚胎移植、_和_。（4）目前使用的供体细胞一般都选择传代10代以内的细胞，原因_。【答案】（1）体 原肠
47、（2）反转录 DNA分子杂交（3）动物细胞培养 核移植技术（4）10代以内的细胞保持正常的二倍体核型考点：动物体细胞克隆；动物胚胎发育的过程；胚胎移植。22(2016届陕西西北工业大学附属中学高三第十次适应性理综生物卷）I叶绿体转基因技术是将外源基因整合到叶绿体基因组中，该技术能有效改良植物的品质。请回答。（1）为了防止转基因作物的目的基因通过花粉转移到自然界中其他植物体内，科学家设法将目的基因整合到受体细胞的叶绿体基因组中，其原因是（ ）A叶绿体基因组不会进入生殖细胞中B植物杂交的后代不会出现一定的性状分离比C转基因植物中的质基因与其他植物间不能通过花粉发生基因交流D转基因植物与其他植物间不
48、能通过花粉发生基因交流（2）来自原核生物中有重要价值的外源基因，无需改造和修饰就可在叶绿体中高效表达，据此分析，原因是 。（3）对大多数高等植物而言，与传统的细胞核转基因相比，叶绿体转基因更稳定，其遗传方式 （答“遵循”或“不遵循”）分离定律，不会随 （“花粉”或“卵细胞“）传给后代，从而保持了 （“父本”或“母本”）的遗传特性。II（1）生态工程建设的目的就是遵循自然界物质循环的规律，充分发挥资源的生产潜力，防止环境污染，达到_和_的同步发展。（2）生态经济主要是通过实行“_”的原则，使一个系统产出的污染物，能够成为本系统或者另一个系统的生产原料，从而实现废弃物的资源化。【答案】I（1）C（
49、2）叶绿体DNA和与原核生物DNA结构类似（由于叶绿体大多数基因的结构、转录与翻译系统均与原核生物类似 合理答案给分）（3）不遵循 花粉 母本II（1）经济效益 生态效益（2）循环经济隔离，D错误。考点：基因工程、生态工程 23(2016年湖北黄冈中学4月高三适应性考试理科综合生物试卷）随着科学技术的发展，人们可以根据需求来改造生物的性状。如图是利用奶牛乳汁生产人类血清白蛋白的图解，据图回答：（1）对需要剪碎并使用_使其彼此分散，若用于传代培养的细胞应不超过10代以保证细胞的_不发生变化。（2）在胚胎的早期培养过程中把送入的最佳时期是_。（3）在此过程中涉及到的细胞工程技术手段有（答两种）_。
50、（4）过程中，重组质粒中调控目的基因表达的组件是_，_的作用是鉴别和筛选含有目的基因的受体细胞。（5）要实现批量生产血清白蛋白，则要求的性染色体组成是_。和某些转基因羊可通过分泌乳汁来生产人类所需药物，这类转基因动物被称为_。【答案】（1）胰蛋白酶（或胶原蛋白酶） 正常的二倍体核型（或遗传物质）（2）桑椹胚期或囊胚期（3）核移植技术、动物细胞培养（4）启动子和终止子 标记基因（5）XX 乳腺（房）生物反应器考点：基因工程、细胞工程、胚胎工程【名师点睛】本题结合利用奶牛乳汁生产人类血清白蛋白的图解，综合考查学生对基因工程、细胞工程、胚胎工程等知识的识记和理解能力。熟记并理解核移植、基因工程的操作
51、步骤、动物细胞培养过程、准确判断图中各过程的名称，是解题的关键。24(2016届辽宁大连八中二十四中高三下期联合模拟考试理科生物卷）肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员在体外利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制，其影响机理如图，请回答下列问题：（1）利用基因工程技术抑制肺癌细胞的增殖过程中，还需使用 技术。（2）获取let-7基因后欲进行基因扩增应采用 技术，其依据的原理是 。（3）基因表达载体构建过程中需使用的工具有 。将基因表达载体导入肺癌细胞的常用方法是 。（4）根据图示分析，可从细胞中提取 进行分子杂交
52、，以直接检测let-7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中 （RASmRNA/RAS蛋白）含量减少引起的。【答案】（1）动物细胞培养（2）PCR DNA双链复制（3）限制性核酸内切酶（或限制酶）、DNA连接酶、运载体 显微注射法（4）RNA（或mRNA） RAS蛋白考点：基因工程、动物细胞培养技术。25(2016届宁夏银川唐徕回民中学高三下第三次模拟考试生物试卷）英国生理学家罗伯特爱德华兹，因在人类试管受精（IVF）技术上的卓越贡献，获得2010年度诺贝尔生理学或医学奖。他的研究使全球超10%不育症夫妇因此获益，迄今，因IVF技术400多万人得以诞生。回答下列问题：（1）自然条
53、件下， 是在雌性动物排卵前后完成的，产生的一个次级卵母细胞和第一极体，进入输卵管，准备与精子受精。当在 的间隙可以观察到两个极体时，说明卵子已经完成了受精。（2）1951年，爱德华兹发现 可以促进成熟雌鼠排卵，这为IVF技术的第一步奠定了理论基础。经过系统研究，爱德华兹终于成功将卵母细胞与 后的精子在试管中完成受精，受精卵在 液成功进行卵裂。1978年世界第一例试管婴儿诞生，这是对爱德华兹不懈努力的最好表彰。（3）在爱德华兹的引领下，对IVF技术的研究有许多新发现。比如可通过显微注射法将单个精子注入 期的卵母细胞内，以提高受精率；也可对早期胚胎进行遗传学诊断，如在显微镜下检查 数目，可降低21
54、三体综合征患儿的出生率，从而实现试管婴儿的优生。（4）试管婴儿的形成，除IVF技术之外，涉及到的胚胎工程技术还有 。【答案】（1）减数第一次分裂 卵黄膜和透明带（2）促性腺激素 获能 发育培养（3）减数第二次分裂中 染色体（4）胚胎早期培养、胚胎移植考点：胚胎工程。【名师点睛】本题结合人类试管受精（IVF）技术，综合考查学生对胚胎工程等知识的识记和理解能力。熟记并理解相关的基础知识、形成知识网络是解题的关键。26(2016届安徽合肥第一中学高三下冲刺模拟卷A理科生物试卷）2015年2月3日英国议会下院通过一项历史性法案，允许以医学手段培育“三亲婴儿”，三亲婴儿的培育过程可选用如下技术路线。据图
55、回答下列问题：（1）由于女性自然周期产生的卵子太少，捐献者在取卵前通常需要注射_激素，促使一次有更多的卵泡发育。（2）重组细胞需培养到_期，重组细胞体外培养所需的气体主要是O2和CO2，CO2的主要作用是_。（3）从受精卵到三亲婴儿的培育还需要_和_等技术。（4）三亲婴儿的培育技术_（填“能”或“不能”）避免母亲的线粒体遗传病基因传递给后代，而_（填“能”或“不能”）避免母亲的红绿色盲基因传递给后代。三亲婴儿的染色体_（填比例）来自母亲提供的细胞核。【答案】（1）促性腺（2）M中 维持培养液的pH（3）早期胚胎培养 胚胎移植（4）能 不能 1/2 （或50%）（1分）（4）三亲婴儿的培育技术能
56、避免母亲的线粒体遗传病，因为其只需要母亲提供细胞核，而线粒体是细胞质基因。但不能避免红绿色盲基因传递给后代，因为红绿色盲基因属于细胞核基因。三亲婴儿的染色体有1/2是来自母亲提供的细胞核，1/2来自父亲提供的细胞核。【考点定位】本题考查胚胎工程相关知识，意在考察考生对知识点的识记理解掌握程度。【名师点睛】易错警示 （1）获得精子和卵子后，两者并不立即在体外结合：需要对精子进行获能处理，并将卵母细胞培养成熟至减数第二次分裂中期。（2）胚胎发育的过程中，细胞的全能性并非完全相同，桑椹胚具有全能性，囊胚是开始分化的阶段，原肠胚时期已出现高度分化。27(2016届安徽省六安市第一中学高三第三次模拟考试
57、生物试卷）请回答下列关于生物工程的有关问题：（1）基因工程的核心是_；将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是_，将目的基因导入动物细胞最有效的方法是_。（2）植物体细胞杂交技术中，诱导原生质体融合的化学方法一般是用_作为诱导剂来诱导细胞融合；动物细胞工程中_技术是其他动物细胞工程技术的基础，动物细胞工程的一项重要应用是单克隆抗体的制备，与普通抗体相比单克隆抗体的最主要优点是_（3）胚胎工程中，为了获得产奶量高的奶牛，要对性别进行鉴定，需要取样囊胚期的_做DNA分析，若对囊胚进行胚胎分割，要注意_，否则影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。【答案】（1）基因表达载体的构建 农杆菌转化法 显微注射法
58、（2）聚乙二醇（PEG） 动物细胞培养 特异性强、灵敏度高，并可大量制备 （3）滋养层（1分） 将内细胞团均等进行分割（3）胚胎工程中，要对性别进行鉴定，需要取样囊胚期的滋养层做DNA分析；若对囊胚进行胚胎分割，要注意将内细胞团均等进行分割。【考点定位】基因工程的原理及技术（）、动物的细胞培养与单克隆抗体（）、胚胎工程的应用（）28(2016届河南八市重点高中高三第三次质量检测生物试卷）我国动物胚胎学家童第周与美国坦普恩大学牛满江先生合作，做了如下实验：他们从单尾鳍鲫鱼的卵细胞质内，提取了一种小分子核酸，并将这种核酸注射到双尾鳍金鱼的受精卵中，在发育成长的320条幼鱼中，有106条鱼由双尾鳍变
59、成了单尾鳍，双尾鳍金鱼表现出鲫鱼的单尾鳍性状。由上述资料回答下列问题：（1）他们提取的这种核酸是_，该核酸应该由控制鲫鱼单尾鳍发育的基因_ 产生。（2）实验中还有214条幼鱼没有发育成双尾鳍，可能的原因有：_（写出三点原因）（3）推测106条双尾鳍鱼发育成熟后相互交配，生出的子代小鱼尾鳍的性状是_（单尾鳍或双尾鳍），理由是_。（4）如果对注射了核酸的双尾鳍金鱼的受精卵进行胚胎分割，应在_期进行，分割时必须将_平分。【答案】（1）RNA 转录（2）没有成功注入核酸；注入的核酸没有控制翻译；翻译产物没有影响性状发育（3）双尾鳍 遗传物质没有改变，单尾鳍性状的出现属于不遗传的变异（4）桑椹胚或囊胚
60、内细胞团【考点定位】遗传信息的转录和翻译、胚胎移植29(2016年湖北沙市中学、沙市五中高考仿真模拟联考生物试卷）科学家采用不同方法培育良种牛的过程请据图回答有关问题：（1）与一般的繁育良种动物方式相比较，胚胎移植的优势是 。为提高良种奶牛的繁殖能力，在获取卵母细胞之前需用促性腺激素对奶牛进行处理，目的是 。（2）“转基因牛”D培育过程中，常用受精卵作为外源基因的受体细胞，主要原因是 。（3）图中数字标号代表的结构为 ，将来发育为 ，cd过程需对其均等分割的目的是 。A、B牛基因型是否相同？ 。（4）在培育良种牛的过程中，都运用了动物细胞培养技术在动物细胞培养过程中，为防止杂菌的污染而要加入一
61、定量的 。【答案】（1）可充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力 超数排卵（2）受精卵的全能性易于表达（3）内细胞团 胎儿的各种组织 有利于胚胎的恢复和进一步发育 相同（4）抗生素（4）在动物细胞培养过程中，为防止杂菌的污染而要加入一定量的抗生素。【考点定位】胚胎移植；胚胎分割移植30(2016届江西上高第二中学高三全真模拟理科综合理科综合生物卷）以下是通过生物学技术制备抗体的两个途径模式简图：（1）在获取抗体之前，需要向健康人体注射特定抗原（如乙肝疫苗），图中细胞A在人体主要参与 免疫。（2）过程的完成采用的主要方法是 ，依据的生物学原理是 。过程需要 酶。（3）在基因表达载体中，氨苄青霉素抗性基因的作用是 ，启动子的作用是 。（4）如果想用棉花产生该种抗体，则过程的受体细胞通常选用 ，经过筛选后再侵染棉花体细胞，转化成功后通过 技术获得能产抗体的转基因棉花植株。【答案】（1）体液（2）灭活的病毒处理； 细胞膜具有流动性；逆转录酶、DNA聚合酶（3）作为标记基因，鉴别并筛选出含有目的基因的受体细胞筛选出来；有RNA聚合酶的识别和结合的部位，驱动V1基因的转录（4）土壤农杆菌； 植物组织培养【考点定位】基因工程的原理及技术