1、限时规范训练五1.下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是()A.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、水B.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、葡萄糖、琼脂、水C.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、尿素、琼脂、水D.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水答案A解析能选择出分解尿素的细菌的培养基必须以尿素为唯一氮源，B、D两项不符合。C项缺少有机碳源，分解尿素的微生物不能正常生长。2.从土壤中分离能分解尿素的细菌，可以利用选择培养基，其成分中一定有()尿素有机氮化物无机盐 有机碳化物水 无机碳化物A.
2、 B.C. D.答案A解析分离能分解尿素的细菌，故培养基中应以尿素为唯一氮源，另外，水、无机盐和碳源、能源是细菌生长所必不可少的。有机碳在这里既是碳源又是能源，因为分解尿素的细菌是异养微生物，所以不能利用无机碳化物。3.测定土壤中细菌数量一般选用104、105和106倍的稀释液进行平板培养，而测定真菌的数量一般选用102、103和104倍稀释液，其原因是()A.细菌个体小，真菌个体大B.细菌易稀释，真菌不易稀释C.细菌在土壤中数量比真菌多D.随机的，没有原因答案C解析土壤中的微生物大约70%90%是细菌，真菌的数量比细菌数量少。样品的稀释度越高，在平板上生长的菌落数目就越少。在实际操作中，通常
3、选用一定稀释范围内的样品液进行培养，以保证获得菌落数在30300之间，适于平板计数，所以细菌的稀释倍数要高于真菌的稀释倍数。4.想要对土壤中分解尿素的细菌进行分离与计数，下列操作需要在酒精灯火焰旁进行的有()土壤取样 称取土壤稀释土壤溶液 涂布平板微生物的培养A. B.C. D.答案D解析对土壤中分解尿素的细菌进行分离与计数时，称取土壤、稀释土壤溶液和涂布平板都在火焰旁进行；土壤取样在野外进行；微生物的培养在恒温箱中进行。5.产生标准形态菌落的细菌的最初数目和培养基分别是()A一个细菌、液体培养基 B.许多细菌、液体培养基C.一个细菌、固体培养基 D.许多细菌、固体培养基答案C解析菌落是一个细
4、菌或几个细菌的子细胞群体，形成于固体培养基上，有一定的形态结构，因此肉眼可见。同种细菌形成的菌落，形态结构是相同的。由多种细菌形成的菌落，不可能具有比较标准的形态，因为这些细菌不是同一种细菌，也不可能在培养基的同一个点上。6.用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，可用于计数的为()A.涂布了一个平板，统计的菌落数是230B.涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238C.涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和256，取平均值163D.涂布了三个平板，统计的菌落数分别是210、240和256，取平均值235答
5、案D解析在设计实验时，一定要涂布至少三个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性；C项中虽涂布了三个平板，但是，其中一个平板的计数结果与另两个相差太大，说明在操作过程中可能出现了失误，因此不能用这三个平板的计数来求平均值。7.下图是从葡萄果实上获取酵母菌菌种的简要操作步骤。在下列相关叙述中不正确的是()葡萄果实收集冲洗液选择培养基培养扩大培养A.图中接种的方法有平板划线法和稀释涂布平板法B.图中步骤都必须确保是无菌操作C.图中选择培养基为固体，而扩大培养的培养基为液体D.扩大培养酵母菌过程中为加快酵母菌繁殖需要通入空气答案D解析微生物培养中，常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，A
6、项正确；微生物培养过程必须保证无菌操作，以防止杂菌污染，确保目的菌种的大量繁殖，B项正确；在进行酵母菌筛选时常用固体培养基，进行扩大培养时常用液体培养基，C项正确；酵母菌为兼性厌氧微生物，在扩大培养酵母菌时，为加快酵母菌繁殖需通入无菌空气，否则会造成杂菌污染，D项错误。8.多氯联苯是一种对人体有很大危害的有机物，为油状液体，污染土壤后，很难清除。研究发现部分酵母菌具有分解多氯联苯的作用。为消除这种污染，科研人员计划从受污染的土壤中筛选出高效分解多氯联苯的菌株。(1)筛选分解多氯联苯的菌株时，应将土壤样品_，接种到以_为唯一碳源的培养基上，从功能上讲，该培养基属于_。(2)对初步提取到的菌株要进
7、行_，一般操作方法有两种，如图是_法。(3)若要测定培养液酵母菌的菌体数，可在显微镜下直接计数。若用_法统计菌落数，在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板进行培养一段时间，这样做的目的是_。(4)将1 mL酵母菌溶液稀释100倍，在3个平板上用稀释涂布平板法分别接入0.1 mL稀释液，经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为56、57、58，据此可得出每升溶液中酵母菌活菌数为_。答案(1)稀释(或溶解)多氯联苯选择培养基(2)纯化平板划线(3)稀释涂布平板检验培养基平板灭菌时是否成功(或倒平板时是否感染杂菌或是否彻底灭菌)(4)5.7107个解析(1)由题意可知：筛选分解多氯联苯的菌株时，应将
8、土壤样品稀释(溶解)后接种到以多氯联苯为唯一碳源的培养基上。在该培养基中，只有能降解多氯联苯的微生物才能生长，而其他微生物不能生长，所以从功能上讲，该培养基属于选择培养基。(2)对初步提取到的菌株要进行纯化。图中采用的操作方法是平板划线法。(3)若要测定培养液中酵母菌的菌体数，既可在显微镜下用血细胞计数板直接计数，也可选用稀释涂布平板法统计活菌数目。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板培养一段时间，其目的是检验培养基平板灭菌是否成功(或倒平板时是否感染杂菌或是否彻底灭菌)。(4)将1 mL酵母菌溶液稀释100倍，在3个平板上用稀释涂布平板法分别接入0.1 mL稀释液，经适当培养后，3个平板
9、上的菌落数分别为56、57、58，据此可得出每升溶液中酵母菌活菌数为(565758)30.11001035.7107个。9.给无氮培养基接种土壤稀泥浆的正确方法是()A.打开培养皿盖，取一根接种环沾取少许稀泥浆，轻轻地点接在培养基的表面上B.取一根接种环在酒精灯的火焰上灭菌后沾取少许稀泥浆，略微打开培养皿盖，在培养基的表面轻点C.打开培养皿盖，取一根接种环在酒精灯的火焰上灭菌后沾取少许稀泥浆，在培养基的表面轻点D.略微打开培养皿盖，取一根接种环在酒精灯的火焰上灭菌，冷却后沾取少许稀泥浆，在培养基的表面轻点答案D解析接种过程中要防止外来杂菌的入侵，左手将培养皿打开一条缝隙，右手将接种环在火焰上灭
10、菌，冷却后沾取少许稀泥浆，在培养基的表面轻点，用未冷却的接种环沾取稀泥浆会杀灭菌种。10.实验测定链霉素对3种细菌的抗生素效应，用3种细菌在事先准备好的琼脂平板上画3条等长的平行线(3条线均与图中的链霉素带接触)，将平板置于37 条件下恒温培养3天，结果如图所示。从实验结果分析，以下叙述不正确的是()A.链霉素能阻止结核杆菌的生长B.链霉素对结核杆菌比对霍乱菌更有效C.链霉素对结核杆菌比对伤寒菌更有效D.链霉素可以用于治疗伤寒病人答案D解析由题图可知，此培养基含有链霉素，该培养基上接种的三种细菌中，霍乱菌和结核杆菌都可以被链霉素杀灭，并且链霉素对结核杆菌杀灭的有效程度大于对霍乱菌的有效程度，而
11、伤寒菌的生长不受链霉素影响，所以D项错误。11.三个培养皿中分别加入10 mL不同的培养基，然后接种相同的大肠杆菌样液。培养36 h后，计算菌落数，结果如下表。下列相关叙述正确的是()培养皿培养基成分菌落数琼脂、葡萄糖35琼脂、葡萄糖、生长因子250琼脂、生长因子0A.该实验采用的是液体培养基B.该实验采用平板划线法接种C.和对照，说明大肠杆菌的生长不需要生长因子D.和对照，说明大肠杆菌的生长需要葡萄糖答案D解析培养基中加入了琼脂，故为固体培养基；对微生物进行计数时宜采用稀释涂布平板法接种；与中有葡萄糖、生长因子两种变量，不能得出相应结论；和对照，自变量是有无葡萄糖，且经培养后，中菌落数为25
12、0，中菌落数为0，说明大肠杆菌的生长需要葡萄糖。12.苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如图所示，为土壤样品。下列相关叙述错误的是()A.图中培养目的菌株的选择培养基中应加入苯酚作为碳源B.如果要测定中活细菌数量，常采用稀释涂布平板法C.若图中为对照实验，则其中应以苯酚作为唯一的碳源D.使用平板划线法可以在上获得单菌落答案C解析用苯酚作为选择培养基中的碳源和能源物质，会影响其他微生物生长。测定培养液中活细菌数目常采用稀释涂布平板法。若为对照实验，
13、则中应含除苯酚外的其他碳源，以苯酚作为唯一碳源。使用稀释涂布平板法或平板划线法都可以在上获得单菌落。13.广东省是我国甘蔗生产区之一。甘蔗是一种高光效的C4植物，单位面积产量很高，种植面积日益扩大，目前已成为南方地区燃料酒精生产的重要原料。利用甘蔗生产燃料酒精的一般工艺流程为：甘蔗榨汁(蔗糖)酵母发酵蒸馏成品(燃料酒精)。(1)具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精发酵菌种，对野生酵母菌进行诱变后通过筛选可以得到具有这些特性的突变菌，诱变及筛选过程如下：步骤1：野生菌液体培养一段时间后接受紫外线照射诱变处理。步骤2：制备选择培养基。在基本培养基的基础上，注意_和_，加琼脂后灭菌，制成固体平板
14、。步骤3：将紫外线照射后的菌液稀释涂布平板。步骤4：根据_，筛选出突变菌。(2)上述步骤2、3和4的依据分别是_。答案(1)添加高浓度蔗糖(葡萄糖)调低pH是否能在选择培养基上生长(2)提供高糖和酸性的筛选环境；获得单菌落；能生长的菌落具有耐高糖和耐酸的特性解析(1)要筛选耐高糖和耐酸的菌种，培养基中必须加入高浓度蔗糖并调低pH，能在选择培养基上生长的菌体即为所需菌种。(2)步骤2是给其提供高糖和酸性的筛选环境；步骤3是为了获得单菌落；步骤4是根据能生长的菌落具有耐高糖和耐酸的特性筛选出突变菌。14.某化工厂的污水池中含有一种有害的难以降解的有机化合物A。研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微
15、量元素配制的培养基，成功筛选到能高效降解化合物A的细菌(目的菌)。实验的主要步骤如图所示。请分析回答下列问题：(1)培养基中加入化合物A的目的是筛选_，这种培养基属于_培养基。(2)目的菌生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的_，实验需要振荡培养，由此推测目的菌的代谢类型是异养_(填“需氧”或“厌氧”)型。(3)培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量_的培养液，接入新的培养液中连续培养，使目的菌的数量_(两空均填“增加”或“减少”)。(4)转为固体培养基时，常采用_和稀释涂布平板法进行接种，在前一种方法接种过程中所用的接种工具是_，这种工具在操作时采用的灭菌方法是_。(5)某同学计划统计污水池
16、中目的菌的总数，他选用104、105、106稀释液进行涂布平板，每种稀释液都设置3个重复组，各吸取0.1 mL稀释液涂布平板，在适宜条件下培养一段时间后，对平板的菌落数进行统计，结果如下：稀释度/倍104105106平板123123123平板菌落数/个432421445786774968为了保证结果准确，应选择上述稀释_倍的平板菌落数作为统计结果，计算出每毫升样品中目的菌菌株数为_个。(6)测定微生物的数量常采用_法，其统计的数值往往比实际数目低，原因是_。答案(1)目的菌选择(2)化合物A需氧(3)减少增加(4)平板划线法接种环灼烧灭菌(5)1057.3107(6)稀释涂布平板两个或多个细胞
17、连在一起时，观察到的只是一个菌落解析(1)培养基中加入化合物A的目的是筛选目的菌，这种培养基属于选择培养基。(2)目的菌生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的化合物A，因为除了化合物A，培养基的成分中没有其他的氮源和碳源。实验需要振荡培养，振荡可以增大培养液中的溶氧量，由此推测目的菌的代谢类型是异养需氧型。(3)培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量减少的培养液，接入新的培养液中连续培养，使目的菌的数量增大。(4)接种用到的方法一般有平板划线法和稀释涂布平板法，前一种方法的接种工具是接种环，这种工具在操作时采用的灭菌方法为灼烧灭菌。(5)应选取菌落数在30300之间的平板进行计数，所以稀释10
18、5倍的平板符合要求，则每毫升样品中目的菌菌株数为(786774)30.11057.3107个。(6)利用稀释涂布平板法计算的活菌数比实际值偏小，因为可能有两个或多个细胞形成一个菌落。15.蛋白酶在生物医药和日用化工等生产领域具有重要的经济价值。某同学为筛选产蛋白酶的高产菌株，做了如下实验步骤(配制了下列培养基，在适宜条件下培养)：步骤取样培养基培养结果土壤样品葡萄糖、(NH4)2SO4、K2HPO43H2O、KH2PO4、NaCl、CaCl2、MgSO47H2O，加水定容培养液a1 mL培养液a同上菌落挑取单菌落细菌培养基培养液b(1)为实现筛选目的，步骤所使用的培养基配方中，应去除_并加入高
19、浓度的_。(2)为实现目的菌的分离和计数，步骤所使用的培养基中还应加入_制成平板，采用的接种方法是_，实验结果如图A。(3)步骤应挑取图A中_处的菌落，本步骤的目的是_。(4)图B是该蛋白酶和其他酶的热稳定性数据，即酶在不同温度下保温足够长的时间，再在酶活性最高的温度下测其酶活性。在该蛋白酶的工业化生产过程中，通常需对发酵液在6070 条件下保温一定时间，其作用是_。答案(1)葡萄糖蛋白质(2)琼脂稀释涂布平板法(3)a快速增加目的菌的种群数量(扩大培养)(4)大幅度降低发酵液中其他酶的活性解析(1)培养基中添加特定的成分以促进目标微生物生长而抑制其他微生物生长，用于进行微生物筛选。由题意可知
20、，为筛选产蛋白酶的高产菌株，步骤所使用的培养基配方中，应去除葡萄糖并加入高浓度的蛋白质。(2)为实现目的菌的分离和计数，步骤所使用的培养基中还应加入琼脂(凝固剂)制成平板，采用的接种方法为稀释涂布平板法。(3)图A中a处的菌落透明圈最大，故其菌种分解蛋白质的能力最强，所以步骤应挑取图A中a处的菌落，本步骤的目的是快速增加目的菌的种群数量(即扩大培养)。(4)图B曲线表明，6070 条件下，蛋白酶的活性维持在较高水平，而此时其他酶的活性很低，因此在该蛋白酶的工业化生产过程中，通常需将发酵液在6070 条件下保温一定时间，可大幅度降低发酵液中其他酶的活性。 限时规范训练五1.下列能选择出分解尿素的
21、细菌的培养基是()A.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、水B.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、葡萄糖、琼脂、水C.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、尿素、琼脂、水D.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水答案A解析能选择出分解尿素的细菌的培养基必须以尿素为唯一氮源，B、D两项不符合。C项缺少有机碳源，分解尿素的微生物不能正常生长。2.从土壤中分离能分解尿素的细菌，可以利用选择培养基，其成分中一定有()尿素有机氮化物无机盐 有机碳化物水 无机碳化物A. B.C. D.答案A解析分离能分解尿素
22、的细菌，故培养基中应以尿素为唯一氮源，另外，水、无机盐和碳源、能源是细菌生长所必不可少的。有机碳在这里既是碳源又是能源，因为分解尿素的细菌是异养微生物，所以不能利用无机碳化物。3.测定土壤中细菌数量一般选用104、105和106倍的稀释液进行平板培养，而测定真菌的数量一般选用102、103和104倍稀释液，其原因是()A.细菌个体小，真菌个体大B.细菌易稀释，真菌不易稀释C.细菌在土壤中数量比真菌多D.随机的，没有原因答案C解析土壤中的微生物大约70%90%是细菌，真菌的数量比细菌数量少。样品的稀释度越高，在平板上生长的菌落数目就越少。在实际操作中，通常选用一定稀释范围内的样品液进行培养，以保
23、证获得菌落数在30300之间，适于平板计数，所以细菌的稀释倍数要高于真菌的稀释倍数。4.想要对土壤中分解尿素的细菌进行分离与计数，下列操作需要在酒精灯火焰旁进行的有()土壤取样 称取土壤稀释土壤溶液 涂布平板微生物的培养A. B.C. D.答案D解析对土壤中分解尿素的细菌进行分离与计数时，称取土壤、稀释土壤溶液和涂布平板都在火焰旁进行；土壤取样在野外进行；微生物的培养在恒温箱中进行。5.产生标准形态菌落的细菌的最初数目和培养基分别是()A一个细菌、液体培养基 B.许多细菌、液体培养基C.一个细菌、固体培养基 D.许多细菌、固体培养基答案C解析菌落是一个细菌或几个细菌的子细胞群体，形成于固体培养
24、基上，有一定的形态结构，因此肉眼可见。同种细菌形成的菌落，形态结构是相同的。由多种细菌形成的菌落，不可能具有比较标准的形态，因为这些细菌不是同一种细菌，也不可能在培养基的同一个点上。6.用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，可用于计数的为()A.涂布了一个平板，统计的菌落数是230B.涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238C.涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和256，取平均值163D.涂布了三个平板，统计的菌落数分别是210、240和256，取平均值235答案D解析在设计实验时，一定要涂布至少三个
25、平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性；C项中虽涂布了三个平板，但是，其中一个平板的计数结果与另两个相差太大，说明在操作过程中可能出现了失误，因此不能用这三个平板的计数来求平均值。7.下图是从葡萄果实上获取酵母菌菌种的简要操作步骤。在下列相关叙述中不正确的是()葡萄果实收集冲洗液选择培养基培养扩大培养A.图中接种的方法有平板划线法和稀释涂布平板法B.图中步骤都必须确保是无菌操作C.图中选择培养基为固体，而扩大培养的培养基为液体D.扩大培养酵母菌过程中为加快酵母菌繁殖需要通入空气答案D解析微生物培养中，常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，A项正确；微生物培养过程必须保证无菌操作，
26、以防止杂菌污染，确保目的菌种的大量繁殖，B项正确；在进行酵母菌筛选时常用固体培养基，进行扩大培养时常用液体培养基，C项正确；酵母菌为兼性厌氧微生物，在扩大培养酵母菌时，为加快酵母菌繁殖需通入无菌空气，否则会造成杂菌污染，D项错误。8.多氯联苯是一种对人体有很大危害的有机物，为油状液体，污染土壤后，很难清除。研究发现部分酵母菌具有分解多氯联苯的作用。为消除这种污染，科研人员计划从受污染的土壤中筛选出高效分解多氯联苯的菌株。(1)筛选分解多氯联苯的菌株时，应将土壤样品_，接种到以_为唯一碳源的培养基上，从功能上讲，该培养基属于_。(2)对初步提取到的菌株要进行_，一般操作方法有两种，如图是_法。(
27、3)若要测定培养液酵母菌的菌体数，可在显微镜下直接计数。若用_法统计菌落数，在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板进行培养一段时间，这样做的目的是_。(4)将1 mL酵母菌溶液稀释100倍，在3个平板上用稀释涂布平板法分别接入0.1 mL稀释液，经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为56、57、58，据此可得出每升溶液中酵母菌活菌数为_。答案(1)稀释(或溶解)多氯联苯选择培养基(2)纯化平板划线(3)稀释涂布平板检验培养基平板灭菌时是否成功(或倒平板时是否感染杂菌或是否彻底灭菌)(4)5.7107个解析(1)由题意可知：筛选分解多氯联苯的菌株时，应将土壤样品稀释(溶解)后接种到以多氯联苯为
28、唯一碳源的培养基上。在该培养基中，只有能降解多氯联苯的微生物才能生长，而其他微生物不能生长，所以从功能上讲，该培养基属于选择培养基。(2)对初步提取到的菌株要进行纯化。图中采用的操作方法是平板划线法。(3)若要测定培养液中酵母菌的菌体数，既可在显微镜下用血细胞计数板直接计数，也可选用稀释涂布平板法统计活菌数目。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板培养一段时间，其目的是检验培养基平板灭菌是否成功(或倒平板时是否感染杂菌或是否彻底灭菌)。(4)将1 mL酵母菌溶液稀释100倍，在3个平板上用稀释涂布平板法分别接入0.1 mL稀释液，经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为56、57、58，据此可
29、得出每升溶液中酵母菌活菌数为(565758)30.11001035.7107个。9.给无氮培养基接种土壤稀泥浆的正确方法是()A.打开培养皿盖，取一根接种环沾取少许稀泥浆，轻轻地点接在培养基的表面上B.取一根接种环在酒精灯的火焰上灭菌后沾取少许稀泥浆，略微打开培养皿盖，在培养基的表面轻点C.打开培养皿盖，取一根接种环在酒精灯的火焰上灭菌后沾取少许稀泥浆，在培养基的表面轻点D.略微打开培养皿盖，取一根接种环在酒精灯的火焰上灭菌，冷却后沾取少许稀泥浆，在培养基的表面轻点答案D解析接种过程中要防止外来杂菌的入侵，左手将培养皿打开一条缝隙，右手将接种环在火焰上灭菌，冷却后沾取少许稀泥浆，在培养基的表面
30、轻点，用未冷却的接种环沾取稀泥浆会杀灭菌种。10.实验测定链霉素对3种细菌的抗生素效应，用3种细菌在事先准备好的琼脂平板上画3条等长的平行线(3条线均与图中的链霉素带接触)，将平板置于37 条件下恒温培养3天，结果如图所示。从实验结果分析，以下叙述不正确的是()A.链霉素能阻止结核杆菌的生长B.链霉素对结核杆菌比对霍乱菌更有效C.链霉素对结核杆菌比对伤寒菌更有效D.链霉素可以用于治疗伤寒病人答案D解析由题图可知，此培养基含有链霉素，该培养基上接种的三种细菌中，霍乱菌和结核杆菌都可以被链霉素杀灭，并且链霉素对结核杆菌杀灭的有效程度大于对霍乱菌的有效程度，而伤寒菌的生长不受链霉素影响，所以D项错误
31、。11.三个培养皿中分别加入10 mL不同的培养基，然后接种相同的大肠杆菌样液。培养36 h后，计算菌落数，结果如下表。下列相关叙述正确的是()培养皿培养基成分菌落数琼脂、葡萄糖35琼脂、葡萄糖、生长因子250琼脂、生长因子0A.该实验采用的是液体培养基B.该实验采用平板划线法接种C.和对照，说明大肠杆菌的生长不需要生长因子D.和对照，说明大肠杆菌的生长需要葡萄糖答案D解析培养基中加入了琼脂，故为固体培养基；对微生物进行计数时宜采用稀释涂布平板法接种；与中有葡萄糖、生长因子两种变量，不能得出相应结论；和对照，自变量是有无葡萄糖，且经培养后，中菌落数为250，中菌落数为0，说明大肠杆菌的生长需要
32、葡萄糖。12.苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如图所示，为土壤样品。下列相关叙述错误的是()A.图中培养目的菌株的选择培养基中应加入苯酚作为碳源B.如果要测定中活细菌数量，常采用稀释涂布平板法C.若图中为对照实验，则其中应以苯酚作为唯一的碳源D.使用平板划线法可以在上获得单菌落答案C解析用苯酚作为选择培养基中的碳源和能源物质，会影响其他微生物生长。测定培养液中活细菌数目常采用稀释涂布平板法。若为对照实验，则中应含除苯酚外的其他碳源，以苯酚作为唯
33、一碳源。使用稀释涂布平板法或平板划线法都可以在上获得单菌落。13.广东省是我国甘蔗生产区之一。甘蔗是一种高光效的C4植物，单位面积产量很高，种植面积日益扩大，目前已成为南方地区燃料酒精生产的重要原料。利用甘蔗生产燃料酒精的一般工艺流程为：甘蔗榨汁(蔗糖)酵母发酵蒸馏成品(燃料酒精)。(1)具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精发酵菌种，对野生酵母菌进行诱变后通过筛选可以得到具有这些特性的突变菌，诱变及筛选过程如下：步骤1：野生菌液体培养一段时间后接受紫外线照射诱变处理。步骤2：制备选择培养基。在基本培养基的基础上，注意_和_，加琼脂后灭菌，制成固体平板。步骤3：将紫外线照射后的菌液稀释涂布平
34、板。步骤4：根据_，筛选出突变菌。(2)上述步骤2、3和4的依据分别是_。答案(1)添加高浓度蔗糖(葡萄糖)调低pH是否能在选择培养基上生长(2)提供高糖和酸性的筛选环境；获得单菌落；能生长的菌落具有耐高糖和耐酸的特性解析(1)要筛选耐高糖和耐酸的菌种，培养基中必须加入高浓度蔗糖并调低pH，能在选择培养基上生长的菌体即为所需菌种。(2)步骤2是给其提供高糖和酸性的筛选环境；步骤3是为了获得单菌落；步骤4是根据能生长的菌落具有耐高糖和耐酸的特性筛选出突变菌。14.某化工厂的污水池中含有一种有害的难以降解的有机化合物A。研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功筛选到能高效降解
35、化合物A的细菌(目的菌)。实验的主要步骤如图所示。请分析回答下列问题：(1)培养基中加入化合物A的目的是筛选_，这种培养基属于_培养基。(2)目的菌生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的_，实验需要振荡培养，由此推测目的菌的代谢类型是异养_(填“需氧”或“厌氧”)型。(3)培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量_的培养液，接入新的培养液中连续培养，使目的菌的数量_(两空均填“增加”或“减少”)。(4)转为固体培养基时，常采用_和稀释涂布平板法进行接种，在前一种方法接种过程中所用的接种工具是_，这种工具在操作时采用的灭菌方法是_。(5)某同学计划统计污水池中目的菌的总数，他选用104、105、1
36、06稀释液进行涂布平板，每种稀释液都设置3个重复组，各吸取0.1 mL稀释液涂布平板，在适宜条件下培养一段时间后，对平板的菌落数进行统计，结果如下：稀释度/倍104105106平板123123123平板菌落数/个432421445786774968为了保证结果准确，应选择上述稀释_倍的平板菌落数作为统计结果，计算出每毫升样品中目的菌菌株数为_个。(6)测定微生物的数量常采用_法，其统计的数值往往比实际数目低，原因是_。答案(1)目的菌选择(2)化合物A需氧(3)减少增加(4)平板划线法接种环灼烧灭菌(5)1057.3107(6)稀释涂布平板两个或多个细胞连在一起时，观察到的只是一个菌落解析(1
37、)培养基中加入化合物A的目的是筛选目的菌，这种培养基属于选择培养基。(2)目的菌生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的化合物A，因为除了化合物A，培养基的成分中没有其他的氮源和碳源。实验需要振荡培养，振荡可以增大培养液中的溶氧量，由此推测目的菌的代谢类型是异养需氧型。(3)培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量减少的培养液，接入新的培养液中连续培养，使目的菌的数量增大。(4)接种用到的方法一般有平板划线法和稀释涂布平板法，前一种方法的接种工具是接种环，这种工具在操作时采用的灭菌方法为灼烧灭菌。(5)应选取菌落数在30300之间的平板进行计数，所以稀释105倍的平板符合要求，则每毫升样品中目的菌
38、菌株数为(786774)30.11057.3107个。(6)利用稀释涂布平板法计算的活菌数比实际值偏小，因为可能有两个或多个细胞形成一个菌落。15.蛋白酶在生物医药和日用化工等生产领域具有重要的经济价值。某同学为筛选产蛋白酶的高产菌株，做了如下实验步骤(配制了下列培养基，在适宜条件下培养)：步骤取样培养基培养结果土壤样品葡萄糖、(NH4)2SO4、K2HPO43H2O、KH2PO4、NaCl、CaCl2、MgSO47H2O，加水定容培养液a1 mL培养液a同上菌落挑取单菌落细菌培养基培养液b(1)为实现筛选目的，步骤所使用的培养基配方中，应去除_并加入高浓度的_。(2)为实现目的菌的分离和计数
39、，步骤所使用的培养基中还应加入_制成平板，采用的接种方法是_，实验结果如图A。(3)步骤应挑取图A中_处的菌落，本步骤的目的是_。(4)图B是该蛋白酶和其他酶的热稳定性数据，即酶在不同温度下保温足够长的时间，再在酶活性最高的温度下测其酶活性。在该蛋白酶的工业化生产过程中，通常需对发酵液在6070 条件下保温一定时间，其作用是_。答案(1)葡萄糖蛋白质(2)琼脂稀释涂布平板法(3)a快速增加目的菌的种群数量(扩大培养)(4)大幅度降低发酵液中其他酶的活性解析(1)培养基中添加特定的成分以促进目标微生物生长而抑制其他微生物生长，用于进行微生物筛选。由题意可知，为筛选产蛋白酶的高产菌株，步骤所使用的培养基配方中，应去除葡萄糖并加入高浓度的蛋白质。(2)为实现目的菌的分离和计数，步骤所使用的培养基中还应加入琼脂(凝固剂)制成平板，采用的接种方法为稀释涂布平板法。(3)图A中a处的菌落透明圈最大，故其菌种分解蛋白质的能力最强，所以步骤应挑取图A中a处的菌落，本步骤的目的是快速增加目的菌的种群数量(即扩大培养)。(4)图B曲线表明，6070 条件下，蛋白酶的活性维持在较高水平，而此时其他酶的活性很低，因此在该蛋白酶的工业化生产过程中，通常需将发酵液在6070 条件下保温一定时间，可大幅度降低发酵液中其他酶的活性。
