1、第2讲微生物的培养与应用1从自然界微生物中筛选某菌种的一般步骤是采集菌样富集培养纯种分离性能测定。(1)不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是从合适的环境采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯化。例如，培养噬盐菌的菌样应从_环境中采集。(2)富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件，使其数量大大增加，从而分离出所需微生物的培养方法。对产耐高温淀粉酶微生物的富集培养应选择_的培养基，并在_条件下培养。(3)接种前要对培养基进行_处理。在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在_条件下进行。(4)如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，请分析接种的具体方法。
2、获得图A效果的接种方法是_，获得图B效果的接种方法是_。一同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是_，应当怎样操作才可避免此种现象？_。【答案】(1)海滩等高盐(2)以淀粉为唯一碳源高温(3)高压蒸汽灭菌无菌(4)稀释涂布平板法平板划线法菌液浓度过高增大稀释倍数(或培养过程被杂菌污染严格无菌操作；或用接种环划下一区域前接种环没有灭菌每划一个新区域前都要对接种环进行灭菌处理)(原因与操作要对应)2(2020年广东名校联考)为了分离和纯化高效分解石油的细菌，科研人员利用被石油污染过的土壤进行如图A所示的实验。(1)配制好的培养基灭菌通常可以使用_法。步骤与步骤中培养基成
3、分的最大区别是_。这种培养基从功能上看属于_(填“选择”或“鉴别”)培养基。(2)同学甲进行过程的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图B所示。该同学的接种方法是_；推测同学甲用此方法接种时出现图B结果可能的操作失误是_ _；在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是_。(3)同学乙也按照同学甲的接种方法进行了过程的操作：将1 mL样品稀释100倍，在3个平板上分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为56、58和57。据此可得出每升样品中的活菌数为_。这种计数方法得到的结果一般比实际值偏小，原因可能有_。(4)步骤需要振荡培养，其目的是提
4、高培养液溶氧量，同时使_，提高营养物质利用率。(5)步骤后取样测定石油含量的目的是_。【答案】(1)高压蒸汽灭菌步骤的培养基中石油是唯一碳源选择(2)稀释涂布平板法涂布不均匀检测培养基平板灭菌是否合格(3)5.7107当两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落(4)菌体和培养液充分接触(5)筛选出分解石油能力最好的细菌3(2020年河南安阳第一次调研)如图表示研究者从土壤中筛选分解尿素的细菌技术的相关实验，请据图回答下列问题：(1)进行过程和的目的分别是_和_；图中弧线箭头上“？”的具体操作是_。(2)进行培养基配制和灭菌时，灭菌与调节pH的先后顺序是_。倒平板时，待平板冷却凝固后
5、，应将平板倒过来放置，并用记号笔在皿底上标明培养微生物名称、平板上培养样品的稀释度、制作者姓名、培养日期及_等信息。纯化菌种时为了得到单一菌落，常采用的接种方法是_和_。(3)在以尿素为唯一氮源的培养基中加入_。培养后，若出现_色就可以鉴定其中含有能够分解尿素的细菌。(4)研究者可以通过观察培养形成的菌落的_、隆起程度等特征，来判断培养基上是否感染了其他细菌。在实验中，研究者每隔24小时统计一次菌落数目，并选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以防止_。【答案】(1)选择培养增加分解尿素的细菌的数量挑出菌落(2)先调节pH后灭菌培养基种类平板划线法稀释涂布平板法(3)酚红指示剂红(4)形状、
6、大小、颜色因培养时间不足导致遗漏细菌数目4某同学要分离土壤中能分解尿素的细菌，并统计每克土壤样品中活菌数目，培养基配方如下。将各种物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL，再经高温灭菌，制成固体培养基备用。KH2PO4Na2HPO4MgSO47H2O蛋白胨葡萄糖尿素琼脂1.4 g2.1 g0.2 g1.0 g10.0 g1.0 g15.0 g(1)根据培养基的成分判断，该同学能否分离出土壤中分解尿素的细菌？_(填“能”或“不能”)，原因是_ _。(2)培养基用_法灭菌，培养皿用_法灭菌，待培养基冷却到_(填“20”“30”“40”或“50”)左右时，在_附近倒平板，等平板冷却凝固后，将平板倒
7、过来放置，可以防止_，以免造成污染。(3)要统计每克土壤样品中活菌数目，宜采用_法接种，根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的_就能大约推测出样品中活菌数。(4)培养分解尿素的细菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是_。(5)某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为234，那么每克样品中的菌落数是(涂布平板时所用稀释液的体积为0.1 mL)_。【答案】(1)不能培养基含蛋白胨，尿素不是唯一氮源，不能选择出只以尿素为氮源的微生物(或培养基含蛋白胨，蛋白胨中含有氮元素)(2)高压蒸汽灭菌干热灭菌50酒精灯火焰培养皿盖上的水珠落入
8、培养基(3)(稀释)涂布平板菌落数目(4)将未接种的培养基在适宜温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生(5)2.341095聚对苯二甲酸乙二酯(PET)是塑料类水瓶的重要原料，科学家发现了以PET为碳源和能量来源的细菌，该发现对PET类材料的回收利用、环境治理意义重大。请回答下列问题：(1)实验小组欲从土壤中获取PET降解酶，需将土壤样品置于以_为唯一碳源的培养基中进行选择培养，其目的是_。(2)该实验小组选取PET浓度为800 mgL1的富集液进行系列稀释，分别取103、 104、105倍数的稀释液0.1 mL涂布于培养基上，每个稀释倍数涂布三个平板，各平板的菌落数分别为(286、
9、298、297)，(35、32、31)，(36、7、2)。不适合用于计数的为_倍数的稀释液，用另外两组稀释倍数的稀释液进行计数得到的细菌数不一致的原因可能是_ _。(3)倒平板时应使锥形瓶的瓶口通过火焰，目的是_。在倒平板的过程中，如果培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，则这个平板不能用来培养大肠杆菌，原因是_。用平板划线法纯化PET降解菌的过程中，在第二次及其后的划线操作时，须从上一次划线的末端开始划线，原因是_ _。(4)在保藏PET降解菌苗种时，可采取_的方法进行长期保存。【答案】(1)PET增加PET降解菌的浓度，以确保能分离得到目的菌(2)105稀释倍数为103时，更多的菌落混连在一起，
10、导致计数单菌落时结果小于稀释倍数为104组的结果(3)灭菌，防止微生物污染空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生使细菌数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而成的菌落(4)甘油管藏6(2018年河南郑州测试)筛选出抗盐细菌是培育抗盐农作物的重要环节，回答下列相关问题：(1)分离抗盐细菌的土壤应来自_。(2)培育微生物常用的培养基为牛肉膏蛋白胨培养基，如表是1 000 mL该培养基的营养构成，其中指的是_，指的是_，在该培养基的基础上如何改进才能用于分离抗盐细菌？_。培养基组分提供的主要营养牛肉膏5 g蛋白胨10 g碳源、和维生素NaCl5 g无机盐H2O定容至1 0
11、00 mL氢元素、氧元素(3)若要对获取的抗盐细菌样液进行计数，常采用_(填“固体”或“液体”)培养基，在牛肉膏蛋白胨培养的组分中添加_，即可得到该类培养基。统计时，通过统计培养基中菌落数即可间接计算出样液中细菌数的原因是_ _。(4)对最后抗盐细菌进行观察时，区分抗盐细菌与其他细菌，可通过它们形成的菌落的形状、大小、隆起程度和_等方面进行鉴别。【答案】(1)高盐土壤(2)碳源、氮源、磷酸盐和维生素氮源增加NaCl(无机盐)的含量(3)固体琼脂每个菌落基本都是由一个活细菌增殖而来(4)颜色7利用微生物分解淀粉生产糖浆具有广阔的应用前景。某研究所为了从长期种植马铃薯的土壤中分离出能够高效分解淀粉
12、的细菌，进行了如下实验。请进一步完善实验内容并回答相关问题：(1)实验步骤：配制以_为唯一碳源的固体培养基，为了使培养基凝固成固体，应该向培养基中加入的物质是_。将土壤样品接种到已灭菌的培养基上，在恒温培养箱中培养一段时间后，培养基上会出现_和透明圈。将接种针用_法灭菌后，从中的培养基上挑取一定量细菌，接种至_ _(填“固体”“半固体”或“液体”)培养基，在恒温摇床上培养24 h，使细菌大量繁殖。取与培养基中相同的成分及配比，并加入少量碘液，使制作的培养基呈蓝紫色，灭菌并调节pH，用_法将过程所获得大量繁殖的细菌接种到该培养基上。培养一段时间后，观察菌落周围培养基的颜色变化及其范围的大小，周围出现_的菌落即为初选菌落，经进一步分离、纯化后即可达到实验目的。(2)上述实验步骤中，倒平板和接种的操作都应在超净台上的_附近进行。(3)上述实验步骤中，从用途看，所用培养基属于_培养基，和所用培养基属于_培养基。【答案】(1)淀粉琼脂菌落灼烧液体稀释涂布平板较大透明圈(浅色范围大)(2)酒精灯火焰(3)选择鉴别