1、模块提升课 第2课 微生物的培养与应用 1.培养基含有的五类物质:水、无机盐、碳源、氮源、生长因子。2.配制固体培养基的六个步骤:计算称量溶化分装灭菌倒平板。3.实验室常用的三大灭菌方法:(1)灼烧灭菌(2)干热灭菌(3)高压蒸汽灭菌。答题必备语句 4.微生物接种的两大常用方法:(1)平板划线法(2)稀释涂布平板法。5.测定微生物数量的两大常用方法:(1)稀释涂布平板法(2)显微镜直接计数法。6.筛选分解尿素的细菌的方法:用以尿素为唯一氮源的培养基。7.纤维素酶是复合酶:包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶等。易错易混辨析 1.混淆消毒和灭菌。提示:(1)方法不同:消毒法包括煮沸消毒法、巴氏消毒法、
2、紫外线或化学药剂消毒法;灭菌法包括灼烧、干热、高压蒸汽灭菌。(2)结果不同:消毒仅杀死一部分对人体有害的微生物,不包括芽孢和孢子;灭菌杀死物体上所有的微生物,包括芽孢和孢子。2.误认为蛋白质只作为氮源,不是碳源。提示:蛋白质是含碳、氮的有机物,既是碳源,也是氮源。3.误认为平板划线法能进行微生物计数。提示:平板划线法和稀释涂布平板法都能分离微生物,但只有稀释涂布平板法能进行微生物计数。1.工厂废水的妥善处理是减轻现代化工业水污染的重要举措。如图所示为筛选某种高效分解某化工厂的污水中有机化合物A的菌种的实验流程。请分析回答下列问题:典题精练提能(1)图中所配制的培养基应以_为唯一碳源,该培养基在
3、功能上属于_培养基。(2)实验过程中,“振荡”的目的是_,由此推断该目的菌的呼吸类型与乳酸菌的呼吸类型_(填“不同”或“相同”)。(3)转为固体培养基时,常采用平板划线法或_进行接种,两种方法在此过程中所用的接种工具分别是_和_,操作时对接种工具采用的灭菌方法是_灭菌。【解析】(1)分析实验可知,实验需要筛选某种高效分解某化工厂的污水中有机化合物A的菌种,因此图中所配制的培养基应以有机化合物A为唯一碳源,分离出能分解有机化合物A的微生物;这种培养基从功能上划分属于选择培养基。(2)实验过程中,“振荡”的目的是提高培养液中的溶解氧,由此可以判断该种微生物进行有氧呼吸,而乳酸菌只能进行无氧呼吸。(
4、3)转为固体培养基时,常采用平板划线法或稀释涂布平板法进行接种,两种方法在此过程中所用的接种工具分别是接种环和涂布器,操作时对接种工具采用的灭菌方法是灼烧灭菌。答案:(1)有机化合物A 选择(2)提高培养液中的溶解氧(合理即可)不同(3)稀释涂布平板法 接种环 涂布器 灼烧 2.幽门螺杆菌(Hp)感染是急慢性胃炎和消化道溃疡的主要致病因素,在患者体 内采集样本并制成菌液后,进行分离培养。实验基本步骤如下,请回答:(1)在微生物学中,将允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微 生物生长的培养基,称作_。(2)配制培养基时,要加入尿素和_指示剂,这是因为Hp含有_,它 能以尿素作为_源;
5、若有Hp,则菌落周围会出现_色环带。(3)步骤X表示_。在无菌条件下操作时,先将菌液稀释,然后将菌液_到培养基平面上。菌液稀释的目的是获得_菌落。(4)临床上用14C呼气试验检测人体是否感染Hp,其基本原理是Hp能将14C标记的_分解为NH3和14CO2。【解析】(1)选择培养基是指在微生物学中,将允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。使用选择培养基可以富集筛选目的微生物。(2)由于该细菌中合成脲酶,脲酶将尿素分解成氨,会使培养基碱性增强,pH升高,酚红指示剂变红。(3)步骤X表示接种。在无菌条件下操作时,先将菌液稀释,然后将菌液涂布到培养基平面上。菌液稀释的目的
6、是获得单个菌落。(4)用14C呼气试验检测人体是否感染Hp,其基本原理是Hp能将14C标记的尿素分解为NH3和14CO2。答案:(1)选择培养基(2)酚红 脲酶 氮 红(3)接种 涂布 单个(4)尿素 3.据报道,从部分企业生产的速冻食品中检出葡萄球菌超标,“细菌门”事件引起公众普遍关注。葡萄球菌能分解卵黄中的卵磷脂,在含卵黄的固体培养基上形成的菌落周围会出现特有的乳白色的乳浊环。请回答下列问题。(1)某兴趣小组欲检测某果汁类食品中是否含有葡萄球菌,请帮他们完善下列步骤。配制培养基:称取适量的牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂等,加入蒸馏水,搅拌加热至完全溶解后调节pH,分装到锥形瓶后进行_,在无
7、菌状态下加入卵黄液(100 mL的10%灭菌NaCl溶液中加一个鸡蛋黄,振荡均匀),摇匀后立即倒平板。接种:取待检测果汁2.5 mL加入22.5 mL灭菌生理盐水中,制成接种样液。实验组:将接种样液用_法接种在含卵黄的固体培养基上。对照组:将_用划线法接种在含卵黄的固体培养基上或不接种作为_对照。将上述接种后的培养皿同时放在36 的恒温箱中培养48 h。观察:观察培养基表面_。(2)培养基中的牛肉膏和蛋白胨为葡萄球菌的生长和繁殖提供_。葡萄球菌能耐受高浓度的NaCl溶液,所以在配制培养基时加入高浓度的NaCl溶液可以将它分离出来,此培养基属于_培养基。(3)若要统计某土壤样品中该活菌数目,宜采
8、用_法。【解析】(1)配制培养基时,分装之后要进行灭菌处理。因为对照组使用平板划线法,故实验组也要采用平板划线法;空白对照组不接种,或将无菌生理盐水接种在含卵黄的固体培养基上。观察实验结果是否有葡萄球菌的关键是观察培养基表面是否出现周围有乳浊环的菌落。(2)牛肉膏和蛋白胨能为葡萄球菌的生长和繁殖提供碳源和氮源;高浓度的NaCl溶液可以把葡萄球菌分离出来,故该培养基属于选择培养基。(3)要统计土壤中的活菌数目,最好采用稀释涂布平板法,显微镜直接计数不能区分死菌和活菌。答案:(1)灭菌 平板划线 无菌生理盐水 空白 是否出现周围有乳浊环的菌落(2)碳源和氮源 选择(3)稀释涂布平板 【方法规律】微生物的分离方法(1)利用该分离对象对某一营养物质的“嗜好”,专门在培养基中加入该营养物质,使该微生物大量增殖。这些物质主要是一些特殊的碳源、氮源,如纤维素可用来富集纤维素分解微生物,尿素可用来富集尿素分解微生物。(2)利用该分离对象对某种抑制物质的抗性,在混合培养物中加入该抑制物质,经培养后,因为原来占优势的其他微生物的生长受到抑制,而分离对象却可趁机大量增殖,使之在数量上占优势。