1、能力提升植物组织培养和动物细胞培养技 术项 目植物组织培养动物细胞培养培养基无机盐、蔗糖、维生素、植物激素和有机添加剂(如甘氨酸、琼脂等)，属于固体培养基葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等，属于液体培养基取材较幼嫩的细胞、组织、器官动物胚胎或出生不久的幼龄的器官或组织原理细胞的全能性细胞的增殖培养过程动物胚胎或幼龄动物器官(分裂能力强)剪碎、胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理单个细胞，制细胞悬液、转入培养液中原代培养细胞贴壁、接触抑制重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理单个细胞，制细胞悬液、转入培养液中传代培养培养结果可以获得植株，也可以获得大量细胞只能获得大量细胞，不能得到生物个体应用 植物快速繁殖
2、与脱毒植物培养 生产细胞产品 制造人工种子 用于转基因植物的培育 生产蛋白质生物制品 培养皮肤移植的材料 检测有毒物质 用于生理、病理、药理学的研究相同点 都需要人工条件下的无菌操作， 都是合成培养基， 都需要适宜的温度、pH等条件(1) 细胞全能性的大小:受精卵生殖细胞体细胞;分裂的植物细胞(如根尖分生区、茎形成层)不分裂的植物细胞; 高度分化的动物细胞的全能性受到限制，严格来说只有其细胞核才具有全能性。(2) 植物组织培养的培养基大多数由无机营养成分、有机营养成分、激素和琼脂四部分组成。有机营养成分主要是小分子有机物，其中蔗糖具有提供营养和调节渗透压的作用。植物激素主要是生长素和细胞分裂素
3、，两者比值不同，对细胞发育方向的影响不同:生长素与细胞分裂素的比值高时利于根的分化，抑制芽的形成;生长素与细胞分裂素的比值低时利于芽的分化，抑制根的形成;生长素与细胞分裂素的比值相当时促进愈伤组织的生长，不分化。(3) 动物细胞进行培养时通常要添加血清，原因有两点:一是补充合成培养基中不足的成分;二是为动物细胞提供与内环境相似的生活环境。(4) 动物细胞培养中两次用到胰蛋白酶的目的:第一次是将动物胚胎或器官剪碎后，用胰蛋白酶分解组织细胞间质中的胶原蛋白，可使组织分散成单个细胞;第二次是由于细胞在培养瓶中贴壁生长，随着细胞的生长和繁殖，培养瓶中的细胞越来越多，当贴壁生长的细胞分裂生长到表面相互接
4、触时就停止增殖，这种现象叫接触抑制，所以需要定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离下来，进行传代培养。典例1下列关于动物细胞培养和植物组织培养的叙述，错误的是()A. 动物细胞培养和植物组织培养所用培养基不同B. 动物细胞培养和植物组织培养过程中都要用到胰蛋白酶C. 烟草叶片离体培养能产生新个体，小鼠杂交瘤细胞可离体培养增殖D. 动物细胞培养可用于检测有毒物质，茎尖培养可用于植物脱除病毒植物体细胞杂交与动物细胞融合技术项目植物细胞杂交(实例:番茄马铃薯植株)动物细胞融合(实例:单克隆抗体的制备)过程第1步原生质体的制备(酶解法)正常小鼠的处理(注射灭活抗原)第2步原生质体的融合(物化法)动物细胞融合
5、(物化生法)第3步杂种细胞的筛选和培养杂交瘤细胞的筛选和培养第4步杂种植株鉴定提纯单克隆抗体(特异性强、灵敏度高)流程图 去壁， 诱导原生质体融合， 再生出细胞壁(原生质体融合成功的标志)原理/理论基础细胞膜的流动性、植物细胞的全能性细胞膜的流动性、细胞增殖融合前处理用酶解法获得相应的原生质体用胰蛋白酶等处理动物组织获得单个细胞(先注射特定抗原免疫处理正常小鼠)促融因子物理法:电刺激、离心、振动化学法:聚乙二醇(PEG)物化法:与植物原生质体融合相同生物法:灭活的仙台病毒意义和用途 克服远缘杂交不亲和的障碍 培育作物新品种研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等，最重要的用途是制备单克隆
6、抗体(1) 植物体细胞杂交属于无性生殖，最终的结果是得到完整的杂种植株。(2) 动物细胞融合特有的诱导方法是用灭活的病毒处理。(3) 单克隆抗体制备中两次筛选的目的 第一次筛选:通过选择培养基筛选出杂交瘤细胞; 第二次筛选:通过克隆化培养、抗体检测，筛选出能产生所需抗体的细胞群。典例2下列关于细胞工程的叙述，错误的是()A. 电刺激可以诱导植物原生质体的融合或动物细胞的融合B. 用花粉离体培养获得的抗病植株，其细胞仍具有全能性C. 通过体细胞杂交技术培育杂种植株的过程不涉及染色体数目变异D. 动物细胞离体培养更需关注培养基的渗透压细胞核移植与克隆动物原理动物细胞核的全能性过程应用 加速家畜遗传
7、改良进程，促进优良畜群繁殖; 保护濒危物种，增加存活数量; 转基因克隆动物作为生物反应器生产医用蛋白; 转基因克隆动物作为异种移植的供体; 人的核移植胚胎干细胞诱导分化形成的组织、器官用于组织及器官的移植(1) 核移植时受体细胞选用去核卵母细胞的原因: 卵母细胞的细胞质可使体细胞核的全能性得以表达; 卵母细胞体积比较大，容易操作; 卵母细胞细胞质多，营养丰富，能为早期胚胎的形成提供营养。(2) 用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，因为10代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型。细胞核移植技术中也可直接将供体细胞注入去核卵母细胞中，卵母细胞去核的方法是显微操作法。典例3(2014梅州模拟)(多选)进行动物克隆繁殖的基本过程如下图所示。下列叙述正确的是()A. 该过程的技术基础是动物细胞培养B. 克隆蛙需经过核移植、胚胎体外培养和胚胎移植获得C. 高等哺乳动物胚胎移植是胚胎工程其他技术的最后一道工序D. 动物克隆繁殖属于无性繁殖，甲细胞可以是体细胞而不能是胚胎干细胞