1、专题2 微生物的培养与应用课题一 微生物的实验室培养一、培养基及无菌技术（一）培养基1、概念：人们按照微生物对 的不同需求，配制出的供其 的营养基质。2、培养基的种类：按物理性质分为 培养基和 培养基，按化学成分分为 培养基和 培养基，按用途分为 培养基和 培养基。2、培养基的成分一般都含有 。3、微生物在 培养基表面生长，可以形成肉眼可见的 ，是鉴定菌种的重要依据。（二）无菌操作1、无菌操作技术的目的是 。主要内容包括：（1）对实验操作 、操作者的 ，进行清洁和消毒。（2）将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行 。（3）为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在 附近进行。（4）实验
2、操作时应避免 的材料用具与 相接触。2、消毒与灭菌（1）消毒和灭菌的区别比较项目消毒灭菌条件使用较为 的理化方法使用 的理化因素结果杀死物体 的微生物（不包括 和 ） 杀死 的微生物，包括 和 适用 常用方法 二、大肠杆菌的纯化培养（一）、固体培养基的制备： ：依据牛肉膏蛋白胨培养基 的比例，计算各成分的用量。 ：牛肉膏比较粘稠，可用 称取，牛肉膏和蛋白胨都容易吸潮，称取时动作要迅速，称后要及时盖上瓶盖。 ： ：培养基 ：培养基要冷却到 左右时开始到平板（ ）要使锥形瓶的瓶口通过 到平板时，要用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，不要完全打开， 污染培养基。平板冷却后要将其 。目
3、的是 若培养基溅在皿盖和皿底之间的部位，则 。整个操作过程都要在 进行，避免杂菌污染。（二）纯化大肠杆菌1、纯化培养原理：设法在培养基上得到由 繁殖而来的肉眼可见的 ，即获得较纯的菌种。2、纯化培养的方法： 操作通过接种环在琼脂固体培养基表面 的操作，将聚集的菌种逐步 到培养基的表面。将菌液进行一系列 ，然后将不同 的菌液分别 到琼脂固体培养基是的表面，进行培养。注意事项每次划线之前之后及划线结束都要 。 灼烧接种环之后，要等其 后才能伸入菌液。在做第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的 开始划线划线时最后一区域不要与 相连。划线用力要大小适当，防止 培养基稀释操作中的每支试管及其中9
4、ml的水，移液管均需 ，操作时，试管口和移液管应在 。吸管头不要接触其他物品。吸管要在酒精灯火焰旁使用涂布器用 消毒后，在火焰上引燃，酒精燃尽 后再进行涂布。优点 缺点不能计数吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好3、培养：将接种后的培养基和一个 的培养基都放入37恒温箱中，培养12小时和24小时，分别记录观察。.三、课题延伸：菌种的保藏 适用对象 的菌种 的菌种培养类型 温度 方法菌落长成后在冰箱中保存，每36个月转移到新鲜培养基中将培养基的菌液与等体积灭菌后的 混合后置于冷冻箱中缺点 课题一 微生物的实验室培养答案：一、培养基及无菌技术（一）培养基1、营养物质 生长繁殖2、液体 固体 人工
5、合成 天然 选择 鉴别3、水、碳源（提供碳元素的物质）、氮源（提供氮元素的物质）和无机盐，此外还需要满足微生物对PH，特殊营养物质（如维生素、氨基酸和碱基等）以及对氧气的要求。4、固体 菌落（二）无菌操作1、防止外来杂菌的入侵（1）空间 衣着和手 消毒 （2）灭菌 （3）酒精灯火焰（4）已经灭菌处理 周围物品2、温和 强烈 表面或内部的部分 芽孢和孢子 物质内外所有 芽孢和孢子 食品、人双手、水源等 培养基、实验培养所用金属用具等煮沸消毒、巴氏消毒、化学药剂消毒 灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌二、大肠杆菌的纯化培养（一）、固体培养基的制备：计算 配方 称量 称量纸 熔化 加热后称量纸去除，加琼脂后用玻璃棒不断搅拌，防止琼脂糊底 灭菌 高压蒸汽灭菌 倒平板 50 低于44会凝固，温度太高会烫手 酒精灯火焰 瓶口的微生物 倒置 让水分挥发，防止水珠落入培养基 不能用来培养微生物 酒精灯火焰旁（二）纯化大肠杆菌1、一个细胞 菌落 2、平板划线法 稀释涂布平板法 连续划线 稀释分散 梯度稀释 稀释度 涂布灼烧接种环 灭菌 酒精灯火焰旁冷却 70%酒精 冷却末端第一区划破可以观察菌落特征，对混合菌进行分离 可以计数，可以观察菌落特征3、未接种三、课题延伸：菌种的保藏临时保藏法 甘油保藏法 频繁使用 长期保存 固体斜面培养基 液体培养基 4 -20 甘油 菌种易被污染或产生变异