1、第二课时一、学习目标1简述基因工程原理及基本操作程序。2尝试设计某一转基因生物的研制过程二、自主学习 自我检测1.基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤：_、_、_、_。2.目的基因的获取可以从_，也可以用_。目的基因主要是指_，也可以是一些_。获取目的基因的方法有以下几种：_、_、_。3.基因工程的核心是_。一个基因表达载体的组成除了_外，还必须有_、_以及_等。4将目的基因导入受体细胞转化是指_。将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是_，除此之外，还有_和_等方法。 _是转基因动物中采用最多，也是最为有效的一种将目的基因导入动物细胞的方法。 大肠杆菌细胞最常用的转化方法是：首先用_处理细胞
2、，使细胞处于一种_的生理状态，这种细胞称为_。5.目的基因的检测与鉴定要检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因，非常关键，检测方法是_。以_作为探针。要检测目的基因是否转录出了mRNA，检测方法是_。检测目的基因是否翻译成蛋白质，方法是_。除了上述分子检测外，有的还需要进行_的鉴定。三、合作探究1目的基因的获取思考并回答：（1）目的基因的获取方法有哪些？ （2）为什么要建立基因文库？怎么建立的？（3）如何从基因文库中获取目的基因？（4）为什么要建立cDNA文库？如何获取cDNA？（5）PCR技术的原理是什么？（6）如何获取引物？（7）PCR技术扩增的过程是？2.基因表达载体的构建思考
3、并回答：（1）为什么要构建基因表达载体？单独的DNA片段能不能稳定遗传？（2）基因表达载体的构成包括哪些元件？（绘制基因表达载体的模式图）（3）什么是启动子、终止子？他们位于哪里？有什么作用？ （4）为什么要有标记基因？它的作用是？3.将目的基因导入受体细胞思考并回答：（1）什么是转化？ （2）将目的基因导入植物细胞的方法有哪些？最常用的方法是？哪些细胞可以作为受体细胞？（结合示意图，了解农杆菌转化法的基本过程） （3）将目的基因导入动物细胞的基本操作程序是？要用到什么技术？哪些细胞可以作为受体细胞？（4）早期的基因工程为什么选择原核生物作为受体细胞？（5）大肠杆菌细胞最常用的转化方法是？4.
4、目的基因的检测与鉴定思考并回答：（1）目的基因的检测与鉴定可以从什么水平来做？（2）核酸杂交技术基本过程是？ 什么是探针？（3）如何检测目的基因是否翻译出蛋白质？（4）如何从个体生物学水平鉴定转基因抗虫棉？四、讲解提高基因工程的基本操作步骤主要方法、技术或组成步骤一：步骤二：步骤三：导入植物细胞：导入动物细胞：导入微生物细胞：步骤四：五、当堂训练1基因工程的操作步骤：制备重组DNA分子转化受体细胞筛选出获得目的基因的受体细胞，培养受体细胞并诱导目的基因的表达获取目的基因正确的操作顺序是 A B C D2基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的，在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤
5、是 A人工合成基因 B制备重组DNA分子C转化受体细胞 D目的基因的检测和表达3人的糖蛋白必须经内质网和高尔基体加工合成。通过转基因技术，可以使人的糖蛋白基因得以表达的受体细胞是 A大肠杆菌 B酵母菌 CT4噬菌体 D质粒DNA4下列关于基因工程的叙述，正确的是： A基因工程经常以抗菌素抗性基因为目的基因B细菌质粒是基因工程常用的运载体C通常用一种限制性内切酶处理含目的基因的DNA，用另一种处理运载体DNAD为育成抗除草剂的作物新品种，导入抗除草剂基因时只能以受精卵为受体5下图是利用基因工程技术生产人胰岛素的操作过程示意图，请据图作答。人胰岛细胞大肠杆菌胰岛素mRNAA人胰岛素人胰岛素大量的A
6、重复进行BCD（1）能否利用人的皮肤细胞来完成过程？为什么？ 。（2）过程必需的酶是 酶，过程必需的酶是 酶。（3）与人体细胞中胰岛素基因相比，通过过程获得的目的基因不含有非编码区和 。（4）若A中共有a个碱基对，其中鸟嘌呤有b个，则过程连续进行4次，至少需要提供胸腺嘧啶 个。（5）在利用AB获得C的过程中，必须用 切割A和B，使它们产生 ，再加入 ，才可形成C。（6）为使过程更易进行，可用 （药剂）处理D。6图为某种质粒表达载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点，ampR为青霉素抗性基因，tctR为四环素抗性基因，P为启动因子，T为终止子，ori为复制原点。已
7、知目的基因的两端分别有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。（1）将含有目的基因的DNA与质粒表达载体分别用EcoRI酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有_、 _、_三种。若要从这些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行 。（2）用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是 ；若接种到含青霉素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是 。（3）目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是 ，其合成的产物是 。（4）在上述实
8、验中，为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是 。7.人体细胞内含有抑制癌症发生的p53基因，生物技术可对此类基因的变化进行检测。 (1)目的基因的获取方法通常包括_和_。(2)上图表示从正常人和患者体内获取的p53基因的部分区域。与正常人相比，患者在该区域的碱基会发生改变，在上图中用方框圈出发生改变的碱基对；这种变异被称为_。(3)已知限制酶E识别序列为CCGG，若用限制酶E分别完全切割正常人和患者的p53基因部分区域(见上图)，那么正常人的会被切成_个片段；而患者的则被切割成长度为_对碱基和_对碱基的两种片段。(4)如果某人的p53基因部分区域经限制酶E完全切割后，共出现170、220、290和460碱基对的四种片段，那么该人的基因型是_(以P+表示正常基因，P-表示异常基因)。