1、配套课时作业1.(2018江西赣中南五校一联)回答下列有关微生物培养与运用的问题：KH2PO41.4 gNa2HPO42.1 gMgSO47H2O0.2 gFeCl30.1 gX1 g维生素微量琼脂15 g(1)如上表是筛选异养型细菌的培养基配方。从物理性质上看该培养基属于_培养基，其中成分X除了为目的菌提供能源外，还能提供_。制备该培养基的一般操作顺序是计算称量_灭菌_。对培养基进行灭菌的常用方法是_。(2)如图A、B是纯化微生物培养的两种接种方法，C、D是接种后培养的效果。某同学接种培养后获得图C所示效果，则其采用的接种方法是_(选填“A”“B”)；接种时可能的失误操作是_。(3)微生物强
2、化采油是利用某些微生物能降解石油、增大石油的乳化度、降低石油黏度的原理，通过向油井中注入含微生物的水来提高采油率的新技术。为筛选和纯化该类微生物，应向培养基中添加_作为唯一碳源；培养一段时间后在培养基上形成降油圈，此时选取_就可获得高效菌株。答案(1)固体碳源和氮源溶化倒平板高压蒸汽灭菌法(2)B稀释涂布平板法涂布不均匀(3)石油降油圈大的菌落解析(1)题表中培养基的成分有凝固剂琼脂，因此该培养基为固体培养基。培养基除应含有水、无机盐、特殊营养物质(维生素等)外，还应有碳源和氮源。制备固体培养基的一般操作顺序是计算称量溶化灭菌倒平板。(2)图A运用接种环接种，表示的是平板划线法，相应培养效果如
3、图D所示；图B运用涂布器接种，表示的是稀释涂布平板法，相应培养效果如图C所示。图C所示培养基上菌落分布不均匀，可能是接种过程中涂布不均匀所致。(3)筛选和纯化能降解石油的微生物时，应以石油为唯一碳源。降油圈越大，说明该处微生物降解石油的能力越强。2(2018湖北八校二模)为了调查某学校附近河流的水质状况，该学校生物兴趣小组测定了河流水样中的细菌含量，并进行了细菌的分离等工作。回答下列问题：(1)如图，该小组采用的是_分离水样中的细菌。操作时，接种环通过_灭菌，在第二次及以后的操作时，总是从上一次的末端开始，这样做的目的是_。(2)该实验组将接种好的培养皿在恒温箱中培养时倒置，其目的是_；在培养
4、基上产生的单个菌落在生态学中可以被称为_。(3)根据培养皿上菌落的平均数可以计算河水中该细菌的密度，但计算的数据要比实际活菌的数目少，原因是_。除了上述的活菌计数法外，_也是测定微生物数量的常用方法。(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：_。答案(1)平板划线法灼烧将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落(2)防止形成的冷凝水滴落在培养基上产生杂菌污染种群(3)当两个或者多个细胞连在一起时平板上观察到的是一个菌落显微镜直接计数(4)振荡培养能提高培养液的溶解氧的含量，同时可以使菌
5、体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率解析(1)从图中可明显看到三个划线区域，这说明该小组采用的是平板划线法分离水样中的细菌。接种环是金属制品，可用灼烧灭菌。在第二次及以后的操作时，总是从上一次的末端开始，这样做的目的是将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落。(2)将接种好的培养皿在恒温箱中培养时倒置，其目的是防止形成的冷凝水滴落在培养基上产生杂菌污染。种群是生活在同一区域的同种生物全部个体的总和，因此在培养基上产生的单个菌落在生态学中可以被称为种群。(3)计算的数据要比实际活菌的数目少，原因是当两个或者多个细胞连在一起时平板上观察到的是一个菌落。除了上述的活菌计数法外，显微镜直接计数也是测定
6、微生物数量的常用方法。(4)振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快的原因是：振荡培养能提高培养液的溶解氧的含量，同时可以使菌体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率。3(2018河北邯郸一模)某化工厂的污水池中含有一种有害的难以降解的有机化合物A。研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功筛选到能高效降解化合物A的细菌(目的菌)。实验的主要步骤如图所示。请分析回答下列问题：(1)培养基中加入化合物A的目的是_，这种培养基属于_培养基。(2)“目的菌”生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的_。实验需要振荡培养，由此推测“目的菌”的代谢类型是_。(3)在上述实验操作过程中，获得
7、纯净“目的菌”的关键是_。(4)转为固体培养基时，常采用平板划线的方法进行接种，此过程中所用的接种工具是_，操作时采用的灭菌方法是_。(5)实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理才能倒掉，这样做的目的是_。(6)某同学计划统计污水池中“目的菌”的总数，他选用104、105、106稀释液进行平板划线，每种稀释液都设置了3个培养皿，从设计实验的角度看，还应设置的一组对照实验是_，此对照实验的目的是_。答案(1)筛选目的菌选择(2)化合物A异养需氧型(3)防止外来杂菌污染(4)接种环灼烧灭菌(5)防止造成环境污染(6)不接种的空白培养基检验培养基灭菌是否合格解析(1)该实验的目的是筛选“目的菌”
8、，故培养基中添加的化合物A起选择作用。(2)微生物正常生长需要碳源、氮源、无机盐等，由培养基中添加的物质种类知：化合物A应该给微生物生长提供碳源、氮源。培养过程需振荡，说明目的菌是需氧型微生物。(6)统计污水池中的“目的菌”时应设置空白对照，以用于检验培养基是否灭菌严格。4(2018山西太原一模)玉米秸秆含有大量的纤维素，用纤维素酶分解秸秆后的产物可以生产酒精。研究人员用化合物A、硝酸盐、磷酸盐以及微量元素配制培养基，成功地筛选到能产生纤维素酶的微生物。请分析回答：(1)纤维素酶至少包括_、_、_三种组分，在这三种酶的作用下，纤维素最终被水解成_。(2)培养基中加入的化合物A是_，为微生物的生
9、长提供碳源，这种培养基属于_培养基，对培养基进行灭菌时常用的灭菌法为_。(3)在筛选纤维素分解菌的过程中，通常用_染色法；如果培养基某部位出现_现象，则说明存在纤维素分解菌。(4)用获得的糖液发酵生产乙醇，常用的微生物是_，在_发酵液中，该菌可以生长繁殖，而绝大多数其他生物受到抑制。常用_法对该菌进行计数，检测是否产生酒精的常用试剂是_，会变为_色。(5)实验结束后，使用过的培养基应该进行_处理后才能倒掉，这样做的目的是保护环境。答案(1)C1酶CX酶葡萄糖苷酶葡萄糖 (2)纤维素选择高压蒸汽灭菌 (3)刚果红透明圈(4)酵母菌酸性且缺氧稀释涂布平板(其他答案正确也可)酸性重铬酸钾灰绿(5)灭
10、菌解析(1)纤维素的单体是葡萄糖，纤维素酶能够将纤维素水解成葡萄糖。纤维素酶是一种复合酶，包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。(2)根据题干信息可知，实验目的是筛选到能产生纤维素酶的微生物，因此培养基应以纤维素作为唯一碳源，这种培养基属于选择培养基，对培养基进行灭菌时常用的灭菌法为高压蒸汽灭菌。(3)刚果红可以与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，我们可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。(4)酵母菌无氧呼吸时产生乙醇，所以用获得的糖液发酵生产乙醇，常用的微生物是酵母菌，在酸性且缺氧发酵液中，该菌可以生长繁殖，而绝大多数其他生物
11、受到抑制，常用稀释涂布平板法对该菌进行计数。酒精与酸性的重铬酸钾发生反应，由橙色变为灰绿色。(5)实验结束后，为了保护环境和防止操作者被感染，对使用过的培养基应进行灭菌处理。5(2018山东菏泽一模)为探究大肠杆菌CV101菌株和CV103菌株的营养需求，某团队在营养成分相同的含醋酸盐的培养液中分别接种CV101菌株和CV103菌株，并置于相同且适宜的环境中培养，每隔一段时间统计两种菌株的生长状况。实验数据如下图所示，回答下列问题：(1)醋酸盐培养基从物理性质上来看属于_培养基，该培养基主要应用是_；从功能上来看属于_培养基。(2)由图可知：更适应醋酸盐培养基环境的菌株是_，其依据是_，原因是
12、_。(3)若要统计培养30小时后醋酸盐培养基中的CV101活菌数，可采用_法；为保证能在固体培养基上获得单个菌落，接种前，需取1 mL该菌液进行_处理。答案(1)液体扩大培养选择(2)CV101菌株在一定时间内，CV101菌株在该培养基中数量持续增多，而CV103菌株的数量减少且维持在较低水平CV101菌株能以醋酸盐为碳源(3)稀释涂布平板梯度稀释解析(1)根据题干信息分析，某团队在营养成分相同的含醋酸盐的培养液中分别接种CV101菌株和CV103菌株，因此该培养基属于液体培养基，有利于菌种的扩大培养；从功能上看其属于选择培养基。(2)据图分析可知，在一定时间内，CV101菌株在该培养基中数量
13、持续增多，而CV103菌株的数量减少且维持在较低水平，说明CV101菌株能以醋酸盐为碳源，因此CV101菌株是更适应醋酸盐培养基环境的菌株。(3)常用的微生物接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，其中后者可以用于菌种的计数；为保证能在固体培养基上获得单个菌落，接种前，需取1 mL该菌液进行梯度稀释处理。6(2018宁夏固原一中训练)某兴趣小组欲调查学校某区域土壤中微生物的种类，并进行了微生物的分离等工作。回答下列问题：(1)该小组采用稀释涂布平板法从土壤中分离分解纤维素的微生物，在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是_；分离得到的纯化单菌落属于_(填“种群”
14、或“群落”)；筛选纤维素分解菌常用_法，根据菌落周围是否出现_来判定。(2)该小组采用平板划线法分离土壤中的微生物，操作时，接种环通过_灭菌，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，这样做的目的是_。(3)鉴定土壤中微生物的种类，可以通过菌落的_(至少两点)等特征。在实验中小组每隔24小时统计一次菌落数目，并选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以防止_。答案(1)检测培养基灭菌是否合格种群刚果红染色透明圈(2)灼烧将聚集的菌体逐渐稀释以便获得单个菌落(3)形状、大小、隆起程度及颜色因培养时间不足导致遗漏菌落数目解析(1)在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段
15、时间，这样做的目的是检测培养基灭菌是否合格；分离得到的纯化单菌落是同种生物，属于种群；筛选纤维素分解菌常用刚果红染色法，根据菌落周围是否出现透明圈来判定。(2)接种环常采用灼烧灭菌法灭菌；在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，这样做的目的是将聚集的菌体逐渐稀释以便获得单个菌落。(3)鉴定土壤中微生物的种类，可以通过菌落的形状、大小、隆起程度及颜色等特征。在实验中小组每隔24小时统计一次菌落数目，并选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以防止因培养时间不足导致遗漏菌落数目。7为了分离和纯化高效分解石油的细菌，科研人员利用被石油污染过的土壤进行如图所示的实验。请回答下列问题：(
16、1)配制好的培养基通常使用_法灭菌。步骤与步骤中培养基成分相比，最大的区别是_。(2)步骤后取样测定石油含量的目的是_。(3)为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力_。(4)通常情况下，在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、_和_。无菌技术要求实验操作应在酒精灯_附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。答案(1)高压蒸汽灭菌步骤的培养基中石油是唯一碳源(2)筛选出分解石油能力最强的细菌(3)强(4)干热灭菌高压蒸汽灭菌火焰解析(1)培养基的灭菌方法常采用高压蒸汽灭菌法。步骤的培养基中石油是唯一的碳源，步骤会有其他有机物作为碳源。(2)步骤后取样测定石油的含量，可以得知石油被细菌分解的情况，如果含石油越少，则说明细菌分解的石油越多，这样可以筛选出分解石油能力最强的细菌。(3)降解石油能力越强的菌株，在菌落周围形成的分解圈越大。(4)实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌(如接种环)、干热灭菌(如培养皿)、高压蒸汽灭菌(如培养基)等。无菌操作要求在整个实验过程中操作都在酒精灯火焰附近进行，以避免周围微生物的污染。