1、课时跟踪练311(2020汕尾检测)下表为某微生物培养基的配方，请回答相关问题：成分含量成分含量Na2HPO43 g尿素1.0 gK2HPO41 gC6H12O630 gMgSO47H2O0.5 g琼脂15 gFeSO40.01 gH2O1 000 mLNH4NO30.3 g(1)按物理性质划分，该培养基属于_培养基，无论配制何种培养基，在原料称量、溶化之后都要先_，然后分装、包扎并灭菌，常用的灭菌方法是_。 (2)根据培养基的成分判断，该培养基能否用于分离土壤中分解尿素的细菌？_，原因是_。 (3)为检测尿素分解菌是否存在，还应加入_，如果存在，将出现_反应。 (4)微生物常用的接种方法有_
2、。 解析：(1)分析题中表格可知，该培养基中加入琼脂作为凝固剂，因此属于固体培养基，不论何种培养基，在各成分都溶化后分装前，要先调整pH，培养基常用的灭菌方法为高压蒸汽灭菌。(2)根据培养基的成分判断，该培养基中含有NH4NO3，尿素不是唯一氮源，因此该培养基不能用于分离土壤中分解尿素的细菌。(3)为检测尿素分解菌的存在与否，在以尿素为唯一氮源的选择培养基中加入酚红指示剂，如果存在尿素分解菌，则指示剂将变红色。(4)微生物常用的接种方法有平板划线法、稀释涂布平板法和稀释混合平板法。答案：(1)固体调pH高压蒸汽灭菌(2)不能培养基中含有NH4NO3，尿素不是唯一氮源(3)酚红红色(4)平板划线
3、法、稀释涂布平板法和稀释混合平板法2(2020眉山检测)某研究小组从牛的瘤胃中采集样本，进行分解尿素的微生物的分离与计数。实验基本步骤如图所示。(1)分解尿素的微生物含有_，因此，配制培养基时以尿素作为唯一氮源，尿素会被分解成_，使培养基的碱性增强。 (2)配制培养基时，需添加琼脂，琼脂起_的作用；培养基中添加_作为指示剂，可使目标菌落的周围产生红色环带。 (3)对尿素溶液进行灭菌的最适方法是_灭菌。 A高压蒸汽B干热C添加抗生素 D过滤E紫外线照射 F70%酒精浸泡(4)该小组在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是_；然后将1 mL瘤胃样液稀释1 000倍，在
4、3个平板上用涂布法分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板的菌落数分别为49、47和45。据此可得出每升瘤胃样液中分解尿素的微生物活菌数为_个，理论上，统计的菌落数往往_(填“低”“等”或“高”)于接种的实际活菌数目。 解析：(1)分解尿素的酶是脲酶，所以分解尿素的微生物含有脲酶。尿素含有C、H、O、N元素，其水解产物是二氧化碳、水和氨气，氨气使培养基的碱性增强。(2)琼脂是凝固剂，使培养基呈固态；培养基中的碱性物质可以与酚红反应产生红色环带。(3)对尿素溶液进行灭菌的最适方法是过滤灭菌。(4)空白平板的作用是检测培养基平板是否合格，根据题干提供的数据进行计算，每升瘤胃样液中分解尿素
5、的微生物活菌数为(494745)31 000101 0004.7108(个)。由于菌种可能重叠，所以统计的菌落数往往低于接种的实际活菌数目。答案：(1)脲酶(或分解尿素的酶)氨(或NH3)(2)凝固剂酚红(3)D(4)检测培养基平板灭菌是否合格4.7108低3(2020皖江名校联考) 牛的食物主要是草茎类，其中含有大量的纤维素。牛胃内的微生物在帮助消化和利用植物纤维素方面起了决定性的作用。回答下列问题：(1)纤维素是地球上含量最丰富的多糖类物质，组成纤维素的单体为_。牛胃中某些微生物能够产生纤维素酶，这种酶是一种复合酶，其中的_能使纤维素分解成纤维二糖。(2)实验室培养牛胃内的微生物，分离得到
6、高纯度纤维素分解菌的关键环节是_。为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在_附近进行；倒平板用的培养皿需要保持干燥，可以采用_法进行灭菌。 (3)为了从牛胃的食糜中分离出纤维素分解菌，配制的选择培养基要以_为唯一碳源。筛选纤维素分解菌时，常用的刚果红染色法有两种，一种是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应，另一种是_。在涂布平板时滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多，原因是_。 解析：(1)纤维素是一种多糖，其基本组成单位是葡萄糖；纤维素酶是一种复合酶，其中C1酶、CX酶能使纤维素分解成纤维二糖。(2)微生物分离和培养的关键环节是防止外来杂菌的入侵；为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在
7、酒精灯火焰附近进行；倒平板用的培养皿需要保持干燥，可以采用干热灭菌法进行灭菌。(3)为了分离出纤维素分解菌，配制的选择培养基要以纤维素为唯一碳源。筛选纤维素分解菌时，常用的刚果红染色法有两种，一种是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应，另一种是在倒平板时就加入刚果红。在涂布平板时滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多，原因是培养基表面的菌悬液过多会导致菌体堆积，影响分离效果。答案：(1)葡萄糖C1酶、CX酶 (2)防止外来杂菌的入侵酒精灯火焰干热灭菌(3)纤维素在倒平板时就加入刚果红培养基表面的菌悬液过多会导致菌体堆积，影响分离效果4(2020石家庄质检)为了分离和纯化高效分解石油的细菌，科研人
8、员利用被石油污染过的土壤进行如图所示的实验。(1)配制好的培养基通常使用_法灭菌。步骤与步骤中培养基成分相比，最大的区别是_。 (2)同学A进行步骤的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图乙所示。该同学的接种方法是_，出现图乙结果可能的失误操作是_。 (3)同学B也按照同学A的接种方法进行了步骤的操作：将1 mL样品稀释100倍，在3个平板上分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为56、58和57。据此可得出每升样品中的活菌数为_个。 (4)步骤需要振荡培养，原因是_。 (5)步骤后取样测定石油含量的目的是_。解析：(1)配制好的培养基通常使用高压蒸汽灭菌法灭菌。步
9、骤与步骤中培养基成分相比，最大的区别是步骤培养基中石油是唯一碳源。(2)同学A进行步骤的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如题图乙所示。该同学的接种方法是稀释涂布平板法，出现图乙结果可能的失误操作是涂布不均匀。(3)同学B也按照同学A的接种方法进行了步骤的操作：将1 mL样品稀释100倍，在3个平板上分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为56、58和57。据此可得出每升样品中的活菌数为(565857)30.11 0001005.7107(个)。(4)步骤需要振荡培养，原因是提高培养液中(溶解)氧的含量，通过振荡可使菌体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率。(5)
10、步骤后取样测定石油含量的目的是筛选出分解石油能力最强的细菌。答案：(1)高压蒸汽灭菌步骤培养基中石油是唯一碳源(2)稀释涂布平板法涂布不均匀(3)5.7107(4)提高培养液中(溶解)氧的含量，通过振荡可使菌体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率(5)筛选出分解石油能力最强的细菌5(2020宜昌模拟)农业生产上有一种广泛使用的除草剂在土壤中不易被降解，长期使用会污染土壤。为修复被污染的土壤，可按图示程序选育出能降解该除草剂的细菌。已知该除草剂(含氮有机物)在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明。请分析回答： (1)微生物接种是微生物学研究中最常用的基本操作技术，该技术的核心是_。(2
11、)在选育过程中，应将土壤浸出液接种于以该除草剂为唯一_的培养基上。通过比较单菌落周围_的大小，可筛选出高效的目的菌。实验结果如上图显示的AE五种菌株中，_是最理想菌株。(3)若想对初步筛选得到的目的菌进行纯化并计数，可采用的接种方法是_。将1 mL土壤溶液分别稀释10倍和100倍，每种稀释度各在3个平板上分别接入0.1 mL稀释液，经过适当培养后，6个平板上的菌落数分别为59、57、58和2、7、5，空白对照组的平板上没有菌落，则每升土壤溶液中活菌数的理论值为_个。实际上每升土壤溶液中的活菌数比通过统计所得的这一数值要大，因为_。(4)科研人员用放射线处理该细菌，获得突变株A和B，然后对突变株
12、A和B进行实验，结果如下表所示：接种的菌种一般培养基实验处理及结果A不生长添加营养物质甲，能生长B不生长添加营养物质乙，能生长AB能生长不添加营养物质甲、乙，能生长请分析突变株A和B混合在一起接种于一般营养基中能生长的最可能原因。_。解析：(1)微生物接种技术的核心是防止杂菌污染。(2)已知该除草剂为含氮有机物，在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明；降解该除草剂的细菌能分解培养基中的该除草剂，使培养基中出现透明圈。可见，在选育能降解该除草剂的细菌的过程中，应将土壤浸出液接种于以该除草剂为唯一氮源的培养基上。通过比较单菌落周围透明圈的大小，可筛选出高效的目的菌。实验结果图显示的AE五种
13、菌株中，E菌落周围的透明圈最大，因此E是最理想菌株。(3)对初步筛选得到的目的菌进行纯化并计数，可采用稀释涂布平板法进行接种。统计菌落数目时，一般选择菌落数在30300的平板进行计数，因此应选择稀释度为10倍的、分别接入0.1 mL稀释液的3个平板上的菌落数(分别为59、57、58)进行统计，则每升土壤溶液中活菌数的理论值为(595758)310(0.1103)5.8106(个)。由于统计结果是用菌落数来表示的，当两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，所以实际上每升土壤溶液中的活菌数比通过统计所得的这一数值要大。(4)分析表中信息可知：突变株A生长需要营养物质甲，突变株B生长需
14、要营养物质乙，据此可推知，突变株A和B混合在一起接种于一般培养基中能生长的最可能原因是：突变株A生长需要营养物质甲，突变株B可以提供；突变株B生长需要营养物质乙，突变株A可以提供。答案：(1)防止杂菌污染(无菌操作)(2)氮源透明圈E(3)稀释涂布平板法5.8106统计结果是用菌落数来表示的，当两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落(4)突变株A生长需要营养物质甲，突变株B可以提供；突变株B生长需要营养物质乙，突变株A可以提供6(2020西安期末检测)在农业生产研究上，常需要进行微生物的分离和计数。(1)下表为两种微生物的培养基配方：A组KH2PO4Na2HPO4MgSO47H2
15、O葡萄糖尿素琼脂1.4 g2.1 g0.2 g10.0 g1.0 g15.0 gB组纤维素粉NaNO3Na2HPO47H2OKH2PO4MgSO47H2OKCl酵母膏水解酪素5 g1 g1.2 g0.9 g0.5 g0.5 g0.5 g0.5 g注：上述两种培养基中的物质溶解后，均用蒸馏水定容至1 000 mL。从功能上来看，上述两种培养基均属于_培养基。如果要对土壤中分解尿素的细菌进行分离，则需要选择_(填“A”或“B”)培养基，该培养基中的碳源是_。在分离尿素分解菌所用的培养基中可加入_指示剂，根据指示剂的颜色可鉴定某种细菌能否分解尿素，若有分解尿素的细菌，培养基将会呈现_。(2)如图是某
16、同学采用的接种微生物的方法，请回答下列问题：本实验采用的接种微生物的方法是_法，把聚集的菌种逐步_分散到培养基的表面，为达到这一目的，操作上应注意：_ (至少答两项)。三位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中细菌数量，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下统计结果：甲同学涂布了两个平板，统计的菌落数是236和260，取平均值248。乙同学涂布了三个平板，统计的菌落数是210、240和250，取平均值233。丙同学涂布了三个平板，统计的菌落数是21、212和256，取平均值163。在三位同学的统计中，_同学的统计结果是正确的。解析：(1)据题表中的培养基的配方分析可知，A组培养基中的氮源为
17、尿素，是筛选尿素分解菌的选择培养基。B组培养基中的碳源是纤维素，是筛选纤维素分解菌的选择培养基。对土壤中分解尿素的细菌进行分离时，需要使用以尿素为唯一氮源的选择培养基，故应当选择A组培养基，该培养基中的碳源是葡萄糖。尿素分解菌可以用酚红指示剂进行鉴定。尿素分解菌产生的脲酶能够将尿素分解为氨而使pH升高，使酚红指示剂呈红色。(2)据图分析可知，图示表示平板划线法接种，是把聚集的菌种逐步稀释到培养基的表面，操作上应注意每次划线前要灼烧接种环；冷却后从上一次划线的末端开始划线。在进行平板菌落计数时，应选择菌落数在30300之间的平板，同时为减小误差应选择至少3个或3个以上的平板进行计数并取平均值，在三位同学的统计中，乙同学的统计结果是正确的。答案：(1)选择A葡萄糖酚红红色(2)平板划线稀释每次划线前要灼烧接种环；冷却后从上一次划线的末端开始划线乙
