1、一、单项选择题1下列有关平板划线接种法的操作错误的是()A将接种环放在火焰上灼烧B将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环液C蘸取菌液和划线要在火焰旁进行D划线时要将最后一区的划线与第一区的划线相连2在涂布平板操作时错误的是()A将涂布器在酒精灯火焰上灼烧，直到烧红B取少量菌液滴加在培养基表面C将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃待酒精燃尽后，冷却810 s再用D涂布时可转动培养皿，使涂布均匀3平板冷凝后要将平板倒置，其原因是()A接种时再拿起来方便B在皿底上标记日期等方便C正着放置容易破碎D防止皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染4高温灭菌的原理是()A每种微生物生长的最适温度是一定的B每种微生物对高温
2、环境都不适应C高温破坏了细胞内的蛋白质、核酸，影响其生命活动D高温降低了环境中氧的浓度5欲从土壤中分离出能分解尿素的细菌，下列实验操作中不正确的是()A将土壤用无菌水进行一系列的梯度稀释B同一浓度的土壤稀释液应最多涂布三个平板C可将未接种的培养基在相同条件下培养作为对照D可用显微镜观察计数来测量尿素分解菌的数量6下列有关平板划线操作的叙述中，不正确的是()A第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物B每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种C在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液D划线结束后，灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细
3、菌污染环境和感染操作者7用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目，其结果与实际值相比()A比实际值高B比实际值低C和实际值一致D可能比实际值高，也可能比实际值低8在做分离分解纤维素的细菌实验中，加入刚果红应该在()制备培养基时梯度稀释时倒平板时涂布时长出菌落时A BC D二、多项选择题9下列生物学实验操作，能够顺利达到实验目的的是()A在固体培养基上涂布稀释的大肠杆菌培养液获得单菌落B在接种酵母菌的新鲜葡萄汁中通入无菌空气制作果酒C土壤浸出液接种于以尿素为唯一氮源的培养基上筛选分解尿素的细菌D在分离土壤中的尿素分解菌实验中，采集的土样经高温灭菌后，可以用于制取土壤稀释液10某学者欲研究被石油污染
4、过的土壤中细菌数量，并从中筛选出能分解石油的细菌。下列操作错误的是()A利用平板划线法对细菌进行计数B以石油为唯一氮源的培养基筛选C采用稀释涂布平板法分离菌种D称取和稀释土壤样品时应在火焰旁三、非选择题11(2016镇江丹徒模拟)大肠杆菌是一种兼性厌氧菌，在无氧条件下，发酵能将葡萄糖转换成多种有机酸并生成二氧化碳，某研究机构利用“滤膜法”对受污染的河流水体进行了大肠杆菌活菌数目的测定。回答下列相关问题：(1)研究人员向葡萄糖蛋白胨培养液中加入适量的溴麝香草酚蓝水溶液后，装入图甲所示的试管中，再将污水样滴加进去震荡摇匀，适宜条件下培养一段时间后可观察到溶液颜色的变化为_。(2)图乙滤膜的孔径应_
5、(填“大于”“小于”或“等于”)大肠杆菌。(3)制备图乙中牛肉膏蛋白胨固体培养基时，培养基的灭菌方法是_，待培养基冷却至_左右时进行倒平板。(4)为了鉴别大肠杆菌菌落，可向培养基中加入_染料，该研究机构通过统计_色菌落的数目，计算出单位体积样品中大肠杆菌数目。理论上他们的统计值要比实际值_(填“偏高”“偏低”或“相等”)理由是_。12(2017南通调研)牛、山羊等反刍动物的瘤胃中生活着多种厌氧微生物。为了分离出高效的纤维素分解菌，科学家从牛瘤胃中获取内容物，经过选择培养后，接种在鉴别培养基上初筛分离得到5个菌株，观察结果如下：菌株编号透明圈直径R菌株直径rR/r10.40.31.321.10.
6、61.732.00.82.542.10.92.350.550.31.8回答下列问题：(1)将选择培养后的菌种接种在经_法灭菌的鉴别培养基上。培养基成分中的纤维素能与_形成红色复合物，该培养基属于_(填“液体”或“固体”)培养基。(2)据表分析，_号菌株最可能具有较高产纤维素酶的能力且酶活性也较高，理由是_。为确定此结论可继续进行实验，对纤维素酶分解纤维素后所产生的_进行定量测定。13从自然界微生物中筛选某菌种的一般步骤是采集菌样富集培养纯种分离性能测定。富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件，使其群落的数量大大增加，从而分离出所需微生物的培养方法。(1)接种前要对培养基进行_处
7、理。在整个微生物的分离和培养过程中，一定要注意在_条件下进行。(2)不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯化。如培养纤维素分解菌的菌样应从_的环境中采集。(3)从土壤中筛选纤维素分解菌需要配制_培养基(按用途分类)，该培养基中需要加入纤维素粉作为唯一的_。(4)经过梯度稀释后，要将样品均匀涂布在用于鉴别纤维素分解菌的培养基上，在该培养基中需要加入的特殊染料是_，当形成菌落以后可以根据菌落周围是否产生_来筛选纤维素分解菌。某同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是_。答案精析1D2A将蘸过酒精的涂布器在酒精灯
8、火焰上引燃，然后在酒精灯火焰旁冷却，A错误；取少量菌液滴加在培养基表面，B正确；涂布器灭菌时，将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃待酒精燃尽后，冷却810 s再用，C正确；涂布时，涂布器可以不动，可转动培养皿，使涂布均匀，D正确。3D微生物实验室培养的关键在于防止杂菌污染，平板冷凝后，要将平板倒置，其原因是防止皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染，故选D。4C蛋白质是生命活动的主要承担者，遗传物质DNA控制蛋白质的合成，高温会破坏蛋白质和核酸的空间结构，使它们变性失活，因此高温灭菌的原理是：破坏了细胞内的蛋白质、核酸，影响其生命活动，C项正确。5B为防止土壤浸出液浓度过高，不能获得单菌落，要将土壤用
9、无菌水进行一系列的梯度稀释，A正确；同一浓度的土壤稀释液应至少涂布三个平板，防止偶然因素对实验结果的影响，B错误；可以将未接种的培养基在相同条件下培养作为对照，以判断培养基灭菌是否彻底，C正确；可以用显微镜观察计数来测量尿素分解菌的数量，D正确。6C7B用稀释涂布平板法对样品中活菌数目进行统计，只是一种估测，根据此方法的实验过程可知，在某一稀释度下涂布的平板菌体数具有一定的偶然性，并不是绝对均匀的，所以取若干个平板菌落数量的平均值比较接近样品中菌体数的真实值。用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目有可能几个细菌同时在一起，当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，而样品稀释度无论
10、多高都很难使其中的细菌都单个分布于培养基上，故计数结果比实际值低。8C常用的刚果红染色法有两种：一种是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应；另一种是在倒平板时就加入刚果红。综上所述，C项正确。9AC10AB分离菌种常用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法，但对活菌进行计数常用稀释涂布平板法而不能用平板划线法，所以A项错误。阅读题干可知实验目的是筛选出能分解石油的细菌，培养基的配方应以石油为唯一碳源，所以B项错误。对微生物进行分离和计数，应该用稀释涂布平板法，所以C项正确。微生物的分离和培养的关键技术是无菌技术，因此在微生物的分离和培养的过程中称取和稀释土壤等活动要在火焰旁进行，所以D项正确
11、。11(1)蓝色绿色黄色(2)小于(3)高压蒸汽灭菌50(4)伊红美蓝黑偏低两个或多个大肠杆菌连在一起时，平板上只能观察到1个菌落解析(1)大肠杆菌细胞呼吸产生的二氧化碳气体可使溴麝香草酚蓝水溶液由蓝变绿再变黄。(2)图乙滤膜的孔径应小于大肠杆菌，否则大肠杆菌会漏掉。(3)牛肉膏蛋白胨固体培养基一般采取高压蒸汽灭菌法，灭菌后一定要等冷却到50左右时才能倒平板。(4)为了鉴别大肠杆菌菌落，可向培养基中加入伊红美蓝染料，可以将大肠杆菌菌落染成黑色。由于多个菌落连在一起时会出现重叠现象，所以统计值比真实值要小。12(1)高压蒸汽灭菌刚果红固体(2)33号菌株R/r的值较大葡萄糖解析(1)微生物的培养
12、基一般用高压蒸汽灭菌法灭菌。培养基成分中的纤维素能与刚果红形成红色复合物，该培养基属于固体培养基。(2)据表分析，3号菌株R/r的值较大，其最可能具有较高产纤维素酶的能力且酶活性也较高。13(1)高压蒸汽灭菌无菌(2)富含纤维素(3)选择碳源(4)刚果红透明圈菌液浓度过高(土壤溶液稀释不够)解析(1)按照微生物的需求配制的培养基要进行高压蒸汽灭菌，取菌种的接种环要进行灼烧灭菌、操作要在酒精灯的火焰附近进行，培养要在无菌的恒温箱内。因此，全部的实验过程要在无菌条件下完成。(2)筛选菌种应从适于目的菌种生长、繁殖的环境中寻找，故培养纤维素分解菌应从富含纤维素的环境中收集。(3)目的菌能够降解纤维素，故应向培养基中添加纤维素来制作选择性培养基筛选目的菌种。纤维素是植物体内的多糖，被纤维素分解菌作用后可产生葡萄糖。(4)纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是菌液浓度过高。