1、第2节微生物的培养技术及应用一微生物的基本培养技术必备知识基础练1.下表为某培养基的配方,有关叙述正确的是()成分牛肉膏葡萄糖K2HPO4琼脂蒸馏水含量10 g10 g2 g适量定容至1 000 mLA.能在此培养基上生长的只有大肠杆菌B.该培养基调节合适的pH后就可以接种使用C.该培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖,属于氮源的物质是牛肉膏D.从物理性质看该培养基属于液体培养基答案C解析在此培养基上能生长多种微生物,不仅仅只有大肠杆菌,A项错误;该培养基调节合适的pH后要进行高压蒸汽灭菌才可以接种使用,B项错误;该培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖,属于氮源的物质是牛肉膏,C项正确;从物理性质
2、看该培养基含有琼脂,属于固体培养基,D项错误。2.下列关于无菌操作技术的说法,正确的是()A.液态的牛奶可用巴氏消毒法消毒B.培养基、接种环可用干热灭菌法灭菌C.消毒仅能杀死物体表面的芽孢和孢子D.干热灭菌需将条件控制在121 加热12 h答案A解析液态的牛奶不耐高温,可用巴氏消毒法消毒,可杀死牛奶中的微生物,并且使牛奶的营养成分基本不会被破坏,A项正确;培养基用高压蒸汽灭菌法灭菌,而接种环用灼烧灭菌法灭菌,B项错误;消毒能杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物,不包括芽孢和孢子,C项错误;干热灭菌要在160170 的热空气中保持23 h,D项错误。3.下列有关微生物培养技术的操作,正确的
3、是()A.为了防止污染,接种环经灼烧灭菌后应立即挑取菌种B.培养基灭菌后,应将pH调到适于微生物生长的范围C.倒平板时,应将打开的培养皿盖放在一边,防止培养基溅到皿盖上D.高压蒸汽灭菌后,通常将实验用具放入6080 的烘箱中烘干答案D解析为了防止污染,接种前接种环需经灼烧灭菌,但需等接种环冷却后再挑取菌种,防止菌种被高温杀死,A项错误;配制培养基时,应先调节pH到适于微生物生长的范围,再进行灭菌,B项错误;倒平板时,应将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙后倒入培养基,不能将培养皿盖完全打开放到一边,C项错误;高压蒸汽灭菌后,通常将实验用具放入6080 的烘箱中烘干,以除去灭菌时的水分,D项正确。4
4、.下列关于无菌操作的叙述,正确的是()A.接种时超净台内同时打开紫外灯和过滤风B.用平板划线法接种时,如果有四个划线区域,则接种环一共要灼烧五次C.用脱脂棉制成的棉塞塞住试管口,用牛皮纸包扎,放入高压蒸汽灭菌锅内灭菌D.在无菌条件下将丛壮苗转入生根培养基培养,所用的培养基必须用无菌水配制答案B解析使用超净台接种前30 min需打开紫外灯和过滤风,A项错误;用平板划线法接种时,每次接种前和最后一次接种后都要灼烧接种环灭菌,如果有四个划线区域,则接种环一共要灼烧五次,B项正确;棉塞不能用脱脂棉制成,因为脱脂棉容易吸水,吸水后容易造成污染,C项错误;在无菌条件下将丛壮苗转入生根培养基培养,培养基可用
5、无菌水或蒸馏水配制,D项错误。5.(2021吉林长春希望高中高二月考)下列关于微生物分离和培养的叙述,错误的是()A.应根据微生物代谢类型选择合适的培养基并控制好培养基的pHB.实验操作时应避免已灭菌的材料用具与周围物品接触C.待培养基冷却至室温后,在超净工作台内酒精灯火焰附近倒平板D.使用过的培养基应进行灭菌,不应直接丢弃答案C解析应根据微生物代谢类型选择合适的培养基并控制好培养基的pH,A项正确;实验操作时应避免已灭菌处理的材料用具与周围物品接触,以防止杂菌污染,B项正确;待培养基冷却至50 左右时,在酒精灯火焰附近倒平板,冷却到室温时培养基已经凝固,C项错误;使用过的培养基应进行高压蒸汽
6、灭菌处理后再丢弃,以防止杂菌污染环境,D项正确。6.防止杂菌入侵,获得纯净的培养物,是研究和应用微生物的前提。下列叙述错误的是()A.实验室里可以用紫外线或化学药物进行消毒B.接种环、接种针等金属用具,直接在酒精灯火焰上灼烧灭菌C.在实验室中,切不可吃东西、喝水,离开实验室时一定要洗手,以防止被微生物感染D.平板划线接种时,应先将皿盖打开并放置于桌面上,以便于划线操作答案D解析实验室里可以用紫外线或化学药物进行消毒,A项正确;接种环、接种针等金属用具,可直接在酒精灯火焰上灼烧灭菌,B项正确;在实验室中,切不可吃东西、喝水,离开实验室时一定要洗手,以防止被微生物感染,C项正确;用平板划线法接种时
7、,应在酒精灯火焰旁将培养皿打开一条缝隙进行划线,不可将皿盖完全打开放置于桌面上,D项错误。7.下列关于无菌操作的叙述,错误的是()A.煮沸消毒可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢B.加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌C.耐高温的、需要保持干燥的物品,可用干热灭菌法进行灭菌D.接种时灼烧接种环要冷却后再对菌种划线答案B解析100 煮沸56 min可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢,A项正确;指示剂和染料可能混有微生物,故加入培养基前需进行灭菌,B项错误;耐高温的、需要保持干燥的物品,可用干热灭菌法进行灭菌,C项正确;接种时灼烧接种环要冷却后再对菌种划线,以免接种环温度太高,杀死菌种,D项正确。8
8、.下列有关平板划线法的操作,正确的是()A.使用已灭菌的接种环、培养皿,操作过程中不再灭菌B.打开含菌种的试管需通过火焰灭菌,取出菌种后需马上塞上棉塞C.最后一次的划线与第一次的划线可以相连D.最后将平板倒置,放入恒温培养箱中培养答案D解析平板划线过程中,接种环在每次划线之前和之后均需灼烧灭菌,A项错误;打开含菌种的试管需通过火焰灭菌,取出菌种后还需通过火焰灭菌,再塞上棉塞,B项错误;最后一次的划线用于筛选出单个菌落,不能与第一次的划线相连,C项错误;划线操作结束后,将平板倒置,放入恒温培养箱中培养,D项正确。9.在生物技术上常利用大肠杆菌制成“工程菌”。某生物小组的同学,利用实验室提供的大肠
9、杆菌品系及其他必要材料,对该品系大肠杆菌进行了培养。请分析回答下列问题。(1)微生物在生长过程中对各种成分的需求量不同,故制备培养基时各成分要有合适的。培养基中含有的蛋白胨、淀粉可分别为微生物提供。(2)配制培养基时,各种成分在溶化后分装前必须调节,接种前要进行处理。(3)对培养基进行灭菌,应该采用的方法是法。(4)在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的倒平板操作时,平板冷凝后,应将平板放置,这样做的目的是防止皿盖上的水珠落入而造成污染。(5)甲同学采用平板划线法接种,获得单个菌落后继续筛选,在每次划线之前都要灼烧,他这样做的目的是。在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗?,为什么?。(6)实验结束时
10、,使用过的培养基应进行灭菌处理后才能倒掉,这样做的目的是。答案(1)浓度和比例氮源、碳源和维生素(2)pH灭菌(3)高压蒸汽灭菌(4)倒置培养基(5)接种环杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种需要杀死接种环上残留的菌种,避免细菌污染或感染操作者(6)避免细菌污染环境或感染操作者解析(1)微生物在生长过程中对各种成分的需求量不同,故制备培养基时各成分要有合适的浓度和比例,培养基中含有的蛋白胨、淀粉可为微生物提供氮源、碳源和维生素。(2)配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行pH的调节,接种前要对培养基进行灭菌处理。(3)对培养基进行灭菌,应该采用的方法是高压蒸汽灭菌法。(4)在制备牛肉膏蛋白
11、胨固体培养基的倒平板操作时,平板冷凝后,应将平板倒置放置,这样做的目的是防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染。(5)每次划线之前都要灼烧接种环,杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种,使下一次划线的菌种来自上次划线的末端,接种结束,对接种工具灭菌,其目的是杀死接种环上残留的菌种,避免细菌污染或感染操作者。(6)实验结束时,使用过的培养基应进行灭菌处理后才能倒掉,这样做的目的是避免细菌污染环境或感染操作者。关键能力提升练10.(多选)(2021山东潍坊现代中学高二开学)下表是某同学配制的一种培养基配方,下列有关叙述错误的是()成分蛋白胨乳糖K2HPO4伊红美蓝琼脂含量/g10.05.02.00.40
12、.06512.0将上述物质溶解后,用蒸馏水定容到1 000 mLA.若根据用途划分,该培养基属于选择培养基B.若用该培养基筛选土壤中的尿素分解菌,应将蛋白胨改成尿素C.在该培养基上生长的大肠杆菌,其菌落颜色呈红色D.该培养基中含有维生素,若培养霉菌需将pH调至中性或微碱性答案ACD解析根据用途划分,该培养基属于鉴别培养基,伊红和美蓝可用来鉴别大肠杆菌,A项错误;用该培养基筛选土壤中的尿素分解菌,需要将蛋白胨去掉,用尿素作为唯一的氮源,B项正确;在该培养基上生长的大肠杆菌,其菌落颜色为具有金属光泽的紫黑色,C项错误;该培养基的蛋白胨中含有维生素,若培养霉菌需将pH调至酸性,D项错误。11.(多选
13、)下图为酵母菌纯培养过程中的部分操作步骤,下列说法正确的是()A.步骤使用的培养基已经灭菌并调节过pHB.步骤接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落C.中每次划线前后都需要对接种环进行灼烧处理D.步骤操作时都需要在酒精灯火焰旁进行答案ACD解析步骤为倒平板,使用的培养基已经灭菌并调节过pH,A项正确;步骤为接种,接种环经火焰灭菌后应冷却后再挑取菌落,以防高温杀死酵母菌,B项错误;中每次划线前后对接种环进行灼烧处理,是为了杀死接种环上残留的菌种,使划线时接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端,从而通过划线次数的增加,使每次划线时菌种的数目逐渐减少,以便得到单菌落,C项正确;步骤操作时都需要在酒精灯
14、火焰旁进行,防止杂菌污染,D项正确。12.(2021广东深圳实验学校高二月考)某兴趣小组按下列配方配制培养基用于微生物的筛选和鉴定。编号成分含量NaCl5.0 gKH2PO4、NaHPO4适量MgSO47H2O0.2 g葡萄糖、乳糖10.0 gX适量琼脂15.0 g将上述物质溶解后,用蒸馏水定容到1 000 mL回答下列问题。(1)判断培养基灭菌是否合格以及培养条件是否符合要求的思路是。(2)上表成分中能为微生物提供氮源的物质是,KH2PO4和Na2HPO4的作用是。若在上述培养基中添加伊红美蓝,可用于鉴别,培养基上观察到的菌落即为该微生物的菌落。(3)纯化菌株时,划线的某个平板经过培养后,第
15、一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落,第二划线区域所划的第一条线上无菌落,其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有:;。答案(1)将未接种的培养基和接种菌液的培养基一同放入适宜条件下培养,观察未接种的培养基上是否有菌落生长以及接种的培养基上菌落的生长情况(2)X提供无机盐、调节培养基的酸碱度大肠杆菌紫黑色(3)接种环灼烧后未冷却划线未从第一区域末端开始解析(1)判断培养基灭菌是否合格可以将未接种的培养基和接种菌液的培养基一同放入适宜条件下培养,观察未接种的培养基上是否有菌落生长以及接种的培养基上菌落的生长情况。若未接种的培养基上长出菌落,这说明灭菌失败,需要重新配制培养基进行灭菌。(
16、2)培养基中一般都含有水、碳源、氮源、无机盐等营养物质,由培养基配方表分析可知,培养基成分中还缺少氮源,故表成分中能为微生物提供氮源的物质是X,KH2PO4和Na2HPO4是无机盐,它们的作用是提供无机盐、调节培养基的酸碱度。若在上述培养基中添加伊红美蓝,可用于鉴别大肠杆菌,培养基上观察到紫黑色的菌落即为该微生物的菌落。(3)纯化菌株时,划线的某个平板培养后,第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落,第二划线区域所划的第一条线上无菌落,其他划线上有菌落,结合第一区域的划线上不间断长满菌落,可推测接种环灼烧后未冷却导致接种环上的菌体受到灼伤,在划线未从第一区域末端开始的情况下会导致第二划线区域所
17、划的第一条线上无菌落,其他划线上有菌落。13.“掌心对掌心,手心压手背,十指交叉摩,手握关节搓,拇指围轴转,指尖掌心揉,手腕别放过。”七步洗手法可以清除手部的污物和微生物,是预防新冠病毒感染的有效措施之一。某生物实验小组设计了“比较洗手前后手上细菌分布情况”的探究活动:各小组成员分别将拇指在甲组培养基上轻轻按一下,然后用肥皂将该手洗干净,再将洗净后的拇指在乙组培养基上轻轻按一下。将这两组培养基放入恒温培养箱中,在适宜温度下培养24小时后,统计两组培养基中菌落数目。(1)该实验中用到的培养基中加入了牛肉膏、蛋白胨、NaCl和水,蛋白胨可以为微生物的生长提供等营养物质,为了使配制的溶液呈固体状态,
18、还需要加入。为了防止外来杂菌的入侵,可以将培养基放入以为介质的高压灭菌锅内灭菌1530 min。(2)实验中“将拇指在培养基上轻轻按一下”相当于微生物培养操作中的,该操作应该在酒精灯火焰附近进行,原因是。(3)统计甲、乙两组培养皿中的菌落,乙组中菌落数比甲少得多,实验结果说明肥皂洗手不能彻底清除手上的微生物。为避免手上微生物在无菌操作中污染培养基,洗过的手还应进行等方法处理(答出1种即可)。(4)有同学认为乙培养基中也有菌落产生,是因为培养过程受到杂菌污染,请你在本实验的基础上设计一个简单的方案验证他的猜想是否正确,并预期结果和结论。答案(1)碳源、氮源和维生素琼脂水蒸气(2)接种避免周围环境
19、中的微生物污染培养基(3)酒精棉球擦拭双手、戴消毒手套(4)再加一个不接种的相同培养基(空白培养基),与甲、乙培养基在相同条件下培养,若该培养基上没有生长菌落,说明培养过程未被杂菌污染,猜想错误;若该培养基上生长菌落,说明培养基中被杂菌污染,猜想正确解析(1)该实验中用到的培养基中加入了牛肉膏、蛋白胨、NaCl和水,蛋白胨来源于动物原料,含有糖类、维生素和有机氮等营养物质,故蛋白胨可以为微生物的生长提供碳源、氮源和维生素等营养物质,为了使配制的溶液呈固体状态,还需要加入琼脂。为了防止外来杂菌的入侵,可以将培养基放入以水蒸气为介质的高压灭菌锅内灭菌1530 min。(2)实验中“将拇指在培养基上轻轻按一下”相当于微生物培养操作中的接种,该操作应该在酒精灯火焰附近进行,这样能够保证接种时处于一个无菌的环境,防止周围环境中的微生物污染培养基。(3)为避免手上微生物在无菌操作中污染培养基,洗过的手还应用酒精棉球擦拭、戴消毒手套等方法处理。(4)若要验证乙培养基是否被污染,需要再加一个不接种的相同培养基作为对照,与甲、乙培养基在相同条件下培养,若该培养基上没有生长菌落,说明培养过程中未被杂菌污染,故猜想错误;若该培养基上生长菌落,则说明猜想正确。
