1、第2讲微生物的培养和应用一、单项选择题(每小题给出的四个选项中只有一个符合题目要求)1下列关于统计菌落数目方法的叙述，错误的是(C)A采用平板计数法获得的菌落数往往少于实际的菌落数B当样品的稀释度足够高时，一个活菌会形成一个菌落C为了保证结果准确，一般采用密度较大的平板进行计数D在某一浓度下涂布三个平板，若三个平板统计的菌落数差别不大，则应以它们的平均值作为统计结果解析当两个或多个活菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此统计的菌落数往往比活菌的实际数目少。一般选择菌落数在30300的平板计数，密度过大会使计数结果偏小，影响结果的准确性。至少涂布3个平板，作为重复组，取其平均值计数能增强
2、实验的说服力和准确性。2下列是从土壤中筛选纤维素分解菌的实验步骤，正确的是(C)土壤取样称取10 g土壤加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中吸取0.1 mL进行平板涂布依次稀释至101、102、103、104、105、106、107稀释度AB.CD.解析在分离土壤中某细菌时，应先选取土样(10 g)，然后加无菌水获得土壤浸出液，并进行不同倍数稀释，最后将稀释液涂布到培养基表面进行培养，并分离和计数。3(2019甘肃武威十八中高三月考)关于培养基的配制说法不正确的是(B)A在配制培养乳酸杆菌的培养基时，需加入维生素B微生物的适应性强，配制培养基时可以不考虑pHC虽然各种培养基的具体配方不同，但一般
3、都含有碳源、氮源、水和无机盐D配制培养基时要注意各种养分的浓度和比例解析培养基除需要满足碳源、氮源、水和无机盐几种营养物质外，还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求，如培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，A正确；B错误；虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有碳源、氮源、水和无机盐，C正确；不同微生物的生长对各种营养物质的需求不同，配制培养基时要注意各种养分的浓度和比例，D正确。4(2020北京高三期末)下列有关微生物培养的叙述正确的是(D)A通常使用液体培养基分离获得细菌单菌落B若培养基需要调节pH，应该在灭菌后进行C用显微镜直接计数固体培养基中微生物数量D倒置平板可防
4、止培养基被滴落的冷凝水污染解析常用固体或半固体培养基分离获得细菌单菌落，液体培养基无法分离，A错误；若培养基需要调节pH，应该在灭菌前进行，B错误；显微镜直接计数法是测定培养液中微生物数量的方法，固体培养基上用稀释涂布法直接计数单个菌落数，C错误；平板倒置是避免冷凝的液体掉到培养基上，污染培养基，D正确。5(2018上海高三)下表是培养某种细菌的培养基。以下叙述错误的是(B)蛋白胨乳糖蔗糖K2HPO4伊红美蓝蒸馏水10 g5 g5 g2 g0.4 g0.065 g1 000 mLA该培养基属于选择培养基B表中为该细菌提供碳源的只有乳糖C表中为该细菌提供氮源的只有蛋白胨D该培养基可以用来鉴定该细
5、菌是否是大肠杆菌解析由表中成分可知，该培养基属于选择培养基，A正确； 表中提供碳源的有蛋白胨、乳糖、蔗糖，B错误； 表中为该细菌提供氮源的只有蛋白胨，C正确； 要鉴别所分离出的细菌是否为大肠杆菌，则应该在培养基中加入伊红美蓝，观察是否出现黑色菌落，D正确。 6(2019四川成都七中高三)关于平板划线法和涂布平板法的叙述不正确的是(B)A只能应用于固体培养基接种B都可以用于微生物的计数C接种培养后均可获得单菌落D接种用具都需进行严格灭菌解析平板划线法和涂布平板法均是在固体培养基表面操作，A正确。平板划线法和涂布平板法均可以分离菌落，但平板划线法不需要考虑浓度，不能用于微生物的计数，B错误，C正确
6、。二者均需对接种用具消毒，D正确。7下列关于微生物的培养和分离的叙述中，不正确的是(B)A细菌能在培养基中以二分裂方式迅速增殖B噬菌体和大肠杆菌都可直接在蛋白胨培养基中增殖C灭菌的目的是消灭与培养菌竞争的杂菌D分离得到的菌种采用临时保藏的不足在于保存时间短，容易被污染或产生变异解析细菌的增殖方式通常是二分裂增殖，能在液体培养基中以二分裂方式迅速扩增，A正确；噬菌体是病毒，必须在活细胞中才能增殖，不能在普通培养基中增殖，B错误；灭菌是消灭与培养菌相竞争的杂菌，防止污染培养物，C正确；分离得到的菌种可以采用临时保藏的方法，首先，将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，在合适的温度下培养。当菌落长成后，
7、将试管放入4 的冰箱中保藏。但是这种方法存时间不长，容易被污染或产生变异，D正确。二、不定项选择题(每小题给出的选项中有一个或多个符合题目要求)8(2020北京高三期末)空气中的微生物在重力等作用下会有一定程度沉降。某生物兴趣小组欲利用平板培养基测定教室内不同高度空气中微生物的分布情况。下列关于实验的叙述正确的是(ABC)A在配制培养基时必须添加琼脂等凝固剂成分B将平板培养基放置在教室相同地点的不同高度C本实验需要设置不开盖的平板培养基作为对照D菌落数在20200之间的平板才可以用于计数解析平板为固体培养基，故需要加入琼脂等凝固剂成分，A正确；根据实验目的可知，自变量是教室相同地点的不同高度，
8、所以需将平板培养基放置在教室相同地点的不同高度，B正确；本实验需要设置不开盖的平板培养基作为对照，不同高度下放置开盖平板培养基进行实验，C正确；为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平板进行计数，D错误。9漆酶属于木质素降解酶类，在环境修复、农业生产等领域有着广泛用途。如图是分离、纯化和保存漆酶菌株的过程，相关叙述正确的是(BC)A生活污水中含有大量微生物，是分离产漆酶菌株的首选样品B筛选培养基中需要加入漆酶的底物，通过菌落特征挑出产漆酶的菌落C在涂布平板上长出的菌落，再通过划线进一步纯化D斜面培养基中含有大量营养物，可在常温下长期保存菌株解析生活污水中含木质素的物质相对较少，产漆酶菌
9、株也较少，不宜作为分离产漆酶菌株的样品；产漆酶菌株可降解木质素，在筛选培养基中加入木质素可筛选产漆酶的菌株，筛选时可通过菌落特征挑出产漆酶的菌落；在涂布平板上生长的菌落可能还有其他杂菌，可再通过平板划线法进一步纯化；对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法，即在20 的冷冻箱中保存。10. (2020山东省普通高中学业水平等级考试)生长图形法是一种测定微生物营养需求的简便方法。为探究某嗜热菌所需生长因子的种类，研究小组把该菌的悬浮液与不含任何生长因子但含有其他必需营养物质的培养基混合后倒成平板，然后在平板上划分数区，将甲、乙、丙三种生长因子分别添加到不同区域，培养结果如图所示，下列说法正
10、确的是(AD)A倒成平板后直接培养可判断有无污染B倒成平板后需要进行灭菌处理C图示结果表明该菌需要生长因子乙或丙D生长图形法还可用于某些菌种的筛选解析平板上不含任何生长因子，若倒成平板后直接培养，出现菌落说明已被杂菌感染，因为该嗜热菌不能在缺乏生长因子的培养基中生长，A正确；制备平板时，先灭菌再倒平板，B错误；图中菌落生活在乙丙区域之间，说明同时需要乙和丙，C错误；不同菌种所需生长因子不同，可利用生长图形法筛选菌种，D正确。三、非选择题11(2019湖南茶陵三中高三月考)下图为5个不同浓度的土霉素溶液对大肠杆菌生长影响的实验结果。请回答下列相关问题：(1)培养基中通常加入琼脂作为凝固剂。为检测
11、培养基是否被污染，应采用的检测方法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生。(2)该实验是用稀释涂布平板法接种大肠杆菌，在接种前要对培养基进行高压蒸汽灭菌。根据图中结果，对大肠杆菌抑制作用最明显的土霉素浓度是(填图中数字)，依据是透明圈越大，抑制效果越明显。(3)为研究相同浓度的a、b、c三种不同抗生素对大肠杆菌生长的影响，根据上述研究方法，请仿照图绘制处理方法。解析(1)培养基中通常加入琼脂作为凝固剂。检测培养基是否被污染的方法是：将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生。(2)该实验是用稀释涂布平板法接种大肠杆菌；培养基需要
12、用高压蒸汽灭菌法灭菌。透明圈越大，抑制效果越明显，图中号圆纸片的抑菌圈最大，因此该浓度的土霉素对大肠杆菌抑制作用最明显。(3)该方案的自变量为相同浓度的a、b、c三种不同抗生素，注意在图中要标记清楚，根据对照原则，结合图中研究方法可绘制下图。12(2020福建高考模拟)乳酸杆菌是人体有益的微生物之一，常用于生产酸奶，其发酵产物为乳酸，能溶解周围环境中的难溶性碳酸钙。回答下列问题：(1)为检测某品牌酸奶中的乳酸杆菌含量是否达标，检验人员进行了相关实验。配置培养基：培养基中除含水、无机盐、碳源、氮源和琼脂外，还需添加维生素和CaCO3。稀释样品：取1 mL待测酸奶，用无菌水进行梯度稀释。接种培养：
13、用稀释涂布平板法接种，培养时控制的气体条件是无氧。观察计数：菌落周围出现的透明圈(或溶钙圈)就是乳酸杆菌的菌落，选择菌落数在30300的平板计数。每隔24小时统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，目的是可以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。(2)生产上不能用含有抗生素的牛奶发酵成酸奶，原因是抗生素会抑制乳酸菌(或细菌)的繁殖。解析(1)配置培养基：培养基中除含水、无机盐、碳源、氮源和琼脂外，还需添加维生素和CaCO3。稀释样品：取1 mL待测酸奶，用无菌水进行梯度稀释。接种培养：用稀释涂布平板法接种，乳酸菌是厌氧菌，培养时控制的气体条件是无氧。观察计数：菌落周围出现溶钙圈的
14、就是乳酸杆菌的菌落，选择菌落数在30300的平板计数。每隔24小时统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，目的是可以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。(2)生产上不能用含有抗生素的牛奶发酵成酸奶，因为抗生素会抑制乳酸菌的繁殖。13(2019山东高考模拟)自然界中某些酵母菌能分解木糖产生酒精，科学家欲从果园的葡萄上或土壤中分离筛选出这种酵母菌。请回答：(1)获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌入侵。实验室筛选微生物的原理是提供有利于目的菌株生长的条件，同时抑制或阻止其他微生物生长。制备的酵母菌培养基在进行倒平板操作时，为防止培养皿盖的冷凝水落入培养基造成污染，应将平板倒置。(2)
15、用无菌水将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中，取其液体用涂布器涂布接种于以木糖为唯一碳源的固体培养基上培养获得酵母菌菌落，用平板划线法纯化菌株时，划线的某个平板培养后，第一划线区域的第一条线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域的第一条线上无菌落，其他线上有菌落，造成这种现象的原因可能是接种环灼烧后未冷却或划线未从第一区域末端开始。(3)若要统计土样中的酵母菌数量，应采用稀释涂布平板法。在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板培养基培养一段时间，这样做的目的是检测培养基平板灭菌是否合格。解析(1)获得微生物纯净培养物的关键是防止外来杂菌入侵。实验室筛选微生物的原理是提供有利于目的菌株生长的条件，同
16、时抑制或阻止其他微生物生长。制备的酵母菌培养基在进行倒平板操作时，为防止培养皿盖的冷凝水落入培养基造成污染，应将平板倒置。(2)要获得能利用木糖的酵母菌，应该用以木糖为唯一碳源的固体培养基培养。在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线，这样做的目的是将聚集的菌种逐步减少以获得单个菌落。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落，造成划线无菌落可能的操作失误是接种环灼烧后未冷却或划线未从第一区域末端开始。(3)接种微生物常用平板划线法和稀释涂布平板法，其中只有稀释涂布平板法可以对微生物进行计数。在接种前，随机取若干灭菌
17、后的空白平板培养基先行培养一段时间，这样做的目的是检测培养基平板灭菌是否合格。14(2019山东高考模拟)生物降解法是常用的降解农药的方法，某研究小组为分离出能降解敌敌畏(一种有毒的有机农药)的细菌进行了以下相关操作。回答下列问题：(1)分离原理：土壤中的细菌能合成(分解敌敌畏的)酶，这种物质在把敌敌畏分解成无机物过程中发挥重要作用。(2)实验流程：从富含敌敌畏的环境中釆集土样配制成土壤菌液。从稀释10倍的菌液中取1 mL菌液，加入9_mL无菌水中，获得稀释100倍的悬液，如此操作直到稀释1 000倍。配制以敌敌畏为唯一碳源的培养基并灭菌，灭菌后倒平板。冷却后需将平板倒置，目的是防止皿盖上凝结
18、的水珠落入培养基造成污染。用稀释涂布平板法接种细菌，该方法能成功统计菌落数目的关键是选择恰当的稀释度，统计的菌落数通常比实际数目低的原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。解析(1)土壤中的细菌能将敌敌畏分解成无机物，说明该细菌能合成(分解敌敌畏的)酶。(2)从稀释10倍的菌液中取1 mL菌液，加入9 mL无菌水，就可以将菌液稀释到100倍。要将能分解敌敌畏的细菌分离出来，则实验中要配制以敌敌畏为唯一碳源的培养基，为防止皿盖上凝结的水珠落入培养基造成污染，灭菌后倒平板，冷却后需将平板倒置。接种该细菌采用稀释涂布平板法，该方法能成功统计菌落数目的关键是选择恰当的稀释度。当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，故统计的菌落数通常比实际数目低。
