1、专题提升练8一、单项选择题1.(2022广东模拟)蓝细菌(含特有色素藻蓝蛋白)可引起水华,应用细菌治理水华取得了一定效果。科研人员为研究溶藻细菌S7的溶藻效果,做了相关实验,下列说法错误的是()A.培养溶藻细菌S7和蓝细菌的培养基都需加入有机碳源、氮源等物质B.接种不同浓度的溶藻细菌S7培养液以探究接种溶藻的最适浓度C.每个浓度下应设置至少三个平行且可重复的实验组来排除实验误差D.可通过检测藻蓝蛋白含量反映不同浓度溶藻细菌S7的溶藻效果2.(2022山东枣庄模拟改编)为宣传正确佩戴口罩可降低呼吸道传染疾病的风险,某同学进行了相关实验。实验中将牛肉膏蛋白胨培养基置于距正确佩戴口罩的实验者口部前方
2、50 cm处,然后对着培养基讲话1 min或咳嗽2次,再进行微生物培养和观察。下列叙述错误的是()A.实验中牛肉膏蛋白胨应为固体培养基,并进行严格灭菌B.实验者对培养基进行处理后,放入20 恒温培养箱中培养12 dC.实验中还应设置不戴口罩直接讲话或咳嗽进行实验对照D.培养结束后可根据菌落的形状、大小、颜色等特征初步区分不同种的微生物3.(2022山东卷)青霉菌处在葡萄糖浓度不足的环境中时,会通过分泌青霉素杀死细菌,以保证自身生存所需的能量供应。目前已实现青霉素的工业化生产,关于该生产过程,下列说法错误的是()A.发酵液中的碳源不宜使用葡萄糖B.可用深层通气液体发酵技术提高产量C.选育出的高产
3、菌株经扩大培养后才可接种到发酵罐中D.青霉素具有杀菌作用,因此发酵罐不需严格灭菌4.(2022辽宁模拟)味精是谷氨酸的钠盐,利用谷氨酸棒状杆菌经过发酵可以生产谷氨酸,进而获得味精。在利用发酵罐生产味精的过程中,需要不停地进行搅拌,并严格控制发酵条件,以提高谷氨酸的产量和品质。下列关于谷氨酸生产的说法,正确的是()A.性状优良的谷氨酸棒状杆菌只能通过诱变育种获得B.发酵过程中的搅拌可满足菌体对氧气和养分的需求C.发酵过程中应控制pH,酸性条件下利于谷氨酸的生产D.发酵过程中添加新的营养液会改变培养条件,不利于增产5.(2022山东枣庄模拟)“不对称体细胞杂交法”可以将一个亲本的部分染色体或染色体
4、上的某些片段转移到另一个亲本体细胞内,获得不对称杂种植株。大剂量的X射线能随机破坏染色体结构,使其发生断裂、易位、染色体消除等。下列叙述正确的是()A.获取亲本原生质体时,需在蔗糖浓度低于细胞液浓度的缓冲液中进行B.可用X射线照射、高Ca2+高pH处理等方式诱导两亲本原生质体的融合C.与转基因技术相比,该法可转移控制优良性状的多基因甚至是未知基因D.“不对称体细胞杂交法”存在变异的不定向性,需对杂种植株进行大量筛选6.(2022辽宁锦州一模)克隆技术可用于繁殖性克隆和治疗性克隆,相关叙述错误的是()A.过程选用的“未受精的卵”一般为M期次级卵母细胞B.过程的细胞分裂方式是有丝分裂C.过程需将胚
5、胎移入经同期发情处理的受体母牛子宫内D.过程是在特定条件下诱导内细胞团发生基因突变的结果7.(2022北京一模)我国科研人员利用大鼠、小鼠两个远亲物种创造出世界首例异种杂合二倍体胚胎干细胞(AdESCs),具体流程如图。下列叙述不正确的是()A.单倍体囊胚1最可能由小鼠的卵细胞经体外诱导培养获得B.可用灭活病毒诱导孤雌与孤雄单倍体胚胎干细胞发生融合C.体外培养AdESCs需向培养液中添加动物血清等天然成分D.AdESCs的染色体组数与大鼠小鼠体细胞融合的杂种细胞相同8.(2022北京二模)乳酸菌是乳酸的传统生产菌,但耐酸能力较差,影响产量。酿酒酵母耐酸能力较强,但不产生乳酸。研究者将乳酸菌内催
6、化乳酸生成的乳酸脱氢酶基因(LDH)导入酿酒酵母,获得能产生乳酸的酵母工程菌株。如图为通过双酶切构建重组质粒的过程。GTG为原核生物偏好的编码起始密码子的序列,ATG为真核生物偏好的编码起始密码子的序列。相关叙述不正确的是()A.引物1的5端序列应包含BamH的识别序列B.引物1的5端序列应考虑将GTG改为ATGC.重组质粒以不能合成尿嘧啶的酵母菌株为受体D.酵母工程菌培育成功的标志是产生乳酸脱氢酶9.(2022山东卷)关于“DNA的粗提取与鉴定”实验,下列说法错误的是()A.过滤液沉淀过程在4 冰箱中进行是为了防止DNA降解B.离心研磨液是为了加速DNA的沉淀C.在一定温度下,DNA遇二苯胺
7、试剂呈现蓝色D.粗提取的DNA中可能含有蛋白质二、单项选择题10.(2022广东模拟)SIRT1基因被称为长寿基因,SIRT1蛋白对于延缓内皮细胞衰老,改善因衰老而引起的内皮细胞功能障碍具有重要作用。科学家研究白藜芦醇对人内皮细胞衰老凋亡、SIRT1基因的影响的部分实验结果如图所示。其中P1P35是指体外培养的人内皮细胞的传代次数。下列说法正确的是() 图1图2图3A.人内皮细胞传代培养时,需使用胰蛋白酶处理贴壁生长的内皮细胞B.随传代次数的增加,人内皮细胞内自由基减少,SIRT1基因的表达水平降低C.对照组应使用等量清水处理人内皮细胞,温度等与实验组保持一致D.适当浓度的白藜芦醇可以提高体外
8、培养的内皮细胞的凋亡率11.(2022广东模拟)抗体药物偶联物(ADC)是采用特定技术将具有生物活性的小分子药物连接到单克隆抗体上,实现对肿瘤细胞精准的选择性杀伤。ADC的结构及其发挥作用的机理如图所示,下列有关叙述不正确的是()A.ADC实现精准杀伤肿瘤细胞的基础是抗体与抗原特异性结合B.该肿瘤细胞死亡是在ADC诱导下细胞自动死亡的过程C.将特定抗原注射到小鼠体内,可以从小鼠血清中获得单克隆抗体D.对特定抗原筛选出的杂交瘤细胞进行克隆化培养可获得单克隆抗体12.(2022广东佛山二模)叶绿体具有自身的基因组和遗传信息表达系统,叶绿体中的蛋白质一部分由自身基因编码,一部分由核基因编码。核基因编
9、码的叶绿体蛋白质前端含有一段转运肽,可以引导其进入叶绿体。D1是叶绿体进行光反应依赖的一种核心蛋白,由自身的psbA基因编码。高温造成叶绿体内活性氧(ROS)的大量积累,ROS不但会破坏D1,还会抑制psbAmRNA的翻译。为了克服高温对作物产量的影响,我国科学家克隆了拟南芥叶绿体中的psbA基因,与高温响应的启动子连接,导入水稻细胞的核基因组中,培育出适应高温的转基因水稻。下列相关说法正确的是()A.D1核心蛋白主要分布在叶绿体基质中B.拟南芥叶绿体中psbA基因的复制需要用到DNA酶C.转基因水稻细胞核中转录产生的psbA mRNA进入叶绿体中进行翻译D.除高温响应的启动子外,目的基因ps
10、bA还要与编码转运肽的DNA片段连接三、非选择题13.(2022广东卷)研究深海独特的生态环境对于开发海洋资源具有重要意义。近期在“科学号”考察船对中国南海科考中,中国科学家采集了某海域1 146米深海冷泉附近沉积物样品,分离、鉴定得到新的微生物菌株并进一步研究了其生物学特性。回答下列问题。(1)研究者先制备富集培养基,然后采用法灭菌,冷却后再接入沉积物样品,28 厌氧培养一段时间后,获得了含拟杆菌的混合培养物,为了进行纯种培养,除了稀释涂布平板法,还可采用法。据题图分析,拟杆菌新菌株在以为碳源时生长状况最好。(2)研究发现,将采集的样品置于各种培养基中培养,仍有很多微生物不能被分离筛选出来,
11、推测其原因可能是(答一点即可)。(3)藻类细胞解体后的难降解多糖物质,通常会聚集形成碎屑沉降到深海底部。从生态系统组成成分的角度考虑,拟杆菌对深海生态系统碳循环的作用可能是。(4)深海冷泉环境特殊,推测此环境下生存的拟杆菌所分泌的各种多糖降解酶,除具有酶的一般共性外,其特性可能还有。14.(2022广东模拟)接种新冠病毒疫苗是建立群体免疫屏障、防止疫情暴发的主要手段。灭活疫苗是使用非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)进行病毒培养扩增,经-丙内酯灭活的病毒,保留抗原成分以诱导机体产生免疫应答,并加入氢氧化铝佐剂以提高免疫原性。回答下面的问题。(1)非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)培养是疫苗研发的主要环节
12、,培养非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)时,除了适宜的营养物质、温度等条件外,还需要控制的气体条件是95%空气与5%CO2的混合气体,CO2的主要作用是。在使用合成培养基时通常需加入血清,血清的作用是。(2)把新冠病毒毒株接种于Vero细胞培养液,在适宜条件下培养,在有细胞出现时,收获(填“细胞培养液”或“Vero细胞”),纯化后加入适宜浓度的-丙内酯灭活,并加入以提高免疫原性。(3)为检测某种灭活疫苗的安全性,某研究所选择了15只生理状况相同的大鼠,随机分为5组。A组每只注射0.5 g疫苗;B组每只注射5 g疫苗;C组每只注射50 g疫苗;D组每只注射5 mg疫苗;E组进行X操作。第1次免疫后,
13、第7天加强免疫,第21天攻毒,第35天解剖检验。A、B、C、D四组均出现新冠病毒抗体、且均未出现免疫病理反应。该实验的自变量是,因变量是;对E组的X操作是。该实验结果证明。15.(2022山东菏泽一模)普通棉花中含-甘露糖苷酶基因(GhMnaA2),其能在纤维细胞中特异性表达,产生的-甘露糖苷酶催化半纤维素降解,使棉纤维长度变短。科研人员通过构建反义GhMnaA2基因表达载体,利用农杆菌转化法导入棉花细胞,成功获得转基因棉花品种,具体过程如图。请分析回答下列问题。(1)基因表达载体除图示组成外,还有复制原点、(答两个)等。过程中所用的限制酶分别是、。(2)过程中用酶切法可鉴定正、反义基因表达载
14、体。用Sma和Not酶切正义基因表达载体获得0.1 kb、3.75 kb、5.25 kb、8.6 kb四种长度的DNA片段,则用Not酶切反义基因表达载体获得DNA片段的长度应是和。(3)导入细胞内的反义GhMnaA2能阻止-甘露糖苷酶合成,使棉纤维更长的原理是。(4)为什么不能用GhMnaA2探针进行DNA分子杂交来鉴定基因表达载体是否导入棉花细胞?16.(2022山东卷)某种类型的白血病由蛋白P引发,蛋白UBC可使P被蛋白酶识别并降解,药物A可通过影响这一过程对该病起到治疗作用。为探索药物A治疗该病的机理,需构建重组载体以获得融合蛋白FLAG-P和FLAG-P。P是缺失特定氨基酸序列的P,
15、FLAG是一种短肽,连接在P或P的氨基端,使融合蛋白能与含有FLAG抗体的介质结合,但不影响P或P的功能。(1)为构建重组载体,需先设计引物,通过PCR特异性扩增P基因。用于扩增P基因的引物需满足的条件是。为使PCR产物能被限制酶切割,需在引物上添加相应的限制酶识别序列,该限制酶识别序列应添加在引物的(填“3端”或“5端”)。(2)PCR扩增得到的P基因经酶切连接插入载体后,与编码FLAG的序列形成一个融合基因,如图甲所示,其中“ATGTGCA”为P基因编码链起始序列。将该重组载体导入细胞后,融合基因转录出的mRNA序列正确,翻译出的融合蛋白中FLAG的氨基酸序列正确,但P基因对应的氨基酸序列
16、与P不同。据图甲分析,出现该问题的原因是。修改扩增P基因时使用的带有EcoR识别序列的引物来解决该问题,具体修改方案是。图甲(3)融合蛋白表达成功后,将FLAG-P、FLAG-P、药物A和UBC按照图乙中的组合方式分成5组。各组样品混匀后分别流经含FLAG抗体的介质,分离出与介质结合的物质并用UBC抗体检测,检测结果如图丙所示。已知FLAG-P和FLAG-P不能降解UBC,由组结果的差异推测,药物A的作用是;由组或组的差异推测,P中缺失的特定序列的作用是。图乙图丙(4)根据以上结果推测,药物A治疗该病的机理是。专题提升练81.A解析:蓝细菌属于自养型生物,故培养基中不需要添加有机碳源,A项错误
17、;结合分析可知,该实验的目的是探究溶藻细菌S7的溶藻效果,实验中的自变量是溶藻细菌S7的浓度,故接种不同浓度的溶藻细菌S7培养液以探究接种溶藻的最适浓度,B项正确;每个浓度下应设置至少三个平行且可重复的实验组来排除实验误差,确保实验结果的可靠性,C项正确;由题干信息可知,蓝细菌含特有色素藻蓝蛋白,故通过检测藻蓝蛋白含量可反映不同浓度溶藻细菌S7的溶藻效果,D项正确。2.B解析:实验中牛肉膏蛋白胨培养基应为固体培养基,并进行严格灭菌处理,A项正确;分析题意可知,本实验是为了确定正确佩戴口罩可降低呼吸道传染疾病的风险,而人体的体温约为37 ,因此应设置与人体体温基本相同的温度,即在37 恒温培养箱
18、中培养12 d,B项错误;为宣传正确佩戴口罩可降低呼吸道传染疾病的风险,本实验的实验组为佩戴口罩对着培养基讲话1 min或咳嗽2次,实验中还应该设置不戴口罩直接讲话或咳嗽进行实验对照,C项正确;不同微生物的菌落具有其特殊的特征,在实验培养结束后,可根据菌落的形状、大小、色泽等特征初步区分不同种的微生物,D项正确。3.D解析:青霉菌处于葡萄糖浓度不足的环境中会通过分泌青霉素杀死细菌;提供相同含量的碳源,单位体积葡萄糖溶液中溶质微粒较多,会导致细胞失水,故发酵液中的碳源不宜使用葡萄糖,乳糖是二糖,可被水解为半乳糖和葡萄糖,是青霉菌生长的最佳碳源,可以被青霉菌缓慢利用而维持青霉素分泌的有利条件,A项
19、正确。青霉菌的代谢类型为异养需氧型,可用深层通气液体发酵技术提高产量,B项正确。选育出的高产青霉素菌株经扩大培养纯化后,才可接种到发酵罐中进行工业化生产,C项正确。为了防止细菌、其他真菌等微生物的污染,获得纯净的青霉素,发酵罐仍需严格灭菌,D项错误。4.B解析:性状优良的谷氨酸棒状杆菌可以从自然界中筛选出来,也可以通过基因工程育种或诱变育种获得,A项错误;发酵过程中的搅拌会使营养物质和菌种充分接触且能增加溶解氧的量,故可满足菌体对氧气和养分的需求,B项正确;谷氨酸的发酵过程中,中性和弱碱性条件利于谷氨酸的积累,酸性条件下容易形成谷氨酰胺和N-乙酰谷氨酰胺,C项错误;发酵过程中添加新的营养液利于
20、持续高效地获得发酵产品,D项错误。5.D解析:获取植物原生质体时,除使用纤维素酶和果胶酶外,还要在蔗糖浓度与细胞液浓度相当的缓冲液中进行,以免细胞过度吸水,A项错误;诱导原生质体融合的物理法包括电融合法、离心法等,化学方法包括PEG融合法、高Ca2+高pH融合法等,B项错误;转基因技术也可转移控制优良性状的多基因甚至是未知基因,C项错误;由于染色体变异具有不定向性,通过“不对称体细胞杂交法”得到的杂种植株中也存在着多种变异类型,因此需对杂种植株进行大量筛选,以获得满足要求的类型,D项正确。6.D解析:在核移植过程中,一般选用M期次级卵母细胞去核,作为体细胞核移植中细胞核的受体,A项正确;过程是
21、动物细胞培养的过程,细胞分裂方式是有丝分裂,B项正确;过程需将胚胎移入经同期发情处理的受体母牛子宫内,C项正确;过程是进行治疗性克隆的过程,需要在特定条件下诱导内细胞团发生细胞分化,形成各种组织或器官,进行疾病的治疗,D项错误。7.D解析:根据单倍体囊胚1能发育成孤雌单倍体胚胎干细胞,可知单倍体囊胚1最可能由小鼠的卵细胞经体外诱导培养获得,A项正确;诱导动物细胞融合的方法有:生物法(灭活的病毒)、物理法和化学法,因此可用灭活病毒诱导孤雌与孤雄单倍体胚胎干细胞发生融合,B项正确;体外培养AdESCs需向培养液中添加动物血清等天然成分,以补充动物细胞对特殊营养物质的需求,C项正确;根据题意可知,该
22、AdESCs是杂合二倍体胚胎干细胞,故细胞中有2个染色体组,但大鼠小鼠杂种细胞是由体细胞融合产生的,因此其通常含有4个染色体组,两者染色体组数不同,D项错误。8.D解析:设计引物1的5端序列,应考虑将编码起始密码子的序列由原核生物偏好的GTG转变为真核生物偏好的ATG,以便目的基因在酵母细胞中更好地表达;同时能通过双酶切以正确方向插入质粒,需要包含BamH的识别序列,A、B两项正确。结合题意可知,本过程中重组质粒以不能合成尿嘧啶的酵母菌株为受体,然后在缺乏尿嘧啶的选择培养基上,不能合成尿嘧啶的酿酒酵母菌株不能生存,导入重组质粒的酿酒酵母菌株因为获得了尿嘧啶合成酶基因而可以正常生存,从而起到筛选
23、作用,C项正确。结合题意可知,酵母工程菌培育成功的标志是产生乳酸,D项错误。9.B解析:低温时DNA酶的活性较低,过滤液沉淀过程在4 冰箱中进行是为了防止DNA降解,A项正确。离心研磨液是为了使细胞碎片沉淀,B项错误。沸水浴条件下,DNA遇二苯胺试剂呈现蓝色,C项正确。由于是粗提取,因此粗提取的DNA中很可能含有蛋白质,D项正确。10.A解析:传代培养时需要用胰蛋白酶处理贴壁生长的内皮细胞,然后分瓶继续培养,让细胞继续增殖,A项正确;据图示可知,随传代次数的增加,细胞的凋亡率逐渐增大,说明内皮细胞内自由基增多,SIRT1基因的相对表达水平先增大(P1P5)后减小(P5P35),B项错误;对照组
24、应使用等量的溶解白藜芦醇的溶剂处理人内皮细胞,温度等条件与实验组保持一致,C项错误;由图3可知,适当浓度的白藜芦醇可促进SIRT1基因的表达,从而降低体外培养的内皮细胞的凋亡率,D项错误。11.C解析:由于单克隆抗体的特异性强,能特异性识别抗原,因此可以把抗癌细胞的单克隆抗体跟放射性同位素、药物等相结合,借助单克隆抗体的定位导向作用将药物定向带到癌细胞,故ADC实现精准杀伤肿瘤细胞的基础是抗体与抗原特异性结合,A项正确;抗体进入细胞后,溶酶体裂解,释放药物,导致细胞凋亡,肿瘤细胞凋亡是细胞主动死亡的过程,B项正确;将特定抗原注射到小鼠体内,可以从小鼠血清中获得抗体,获得的抗体可能有多种,不是单
25、克隆抗体,C项错误;对特定抗原筛选出的杂交瘤细胞进行克隆化培养可获得单克隆抗体,D项正确。12.D解析:D1是叶绿体进行光反应依赖的一种核心蛋白,而光反应的场所是叶绿体的类囊体薄膜,据此可推测该蛋白分布在叶绿体的类囊体薄膜上,A项错误;拟南芥叶绿体中psbA基因的复制需要用到DNA聚合酶,DNA酶能催化DNA水解,B项错误;转基因水稻细胞核中转录产生的psbAmRNA在细胞质中的核糖体上进行翻译,C项错误;除高温响应的启动子外,由于目的基因导入的是水稻细胞的核基因组,而核基因组编码的蛋白质前端含有一段转运肽,据此可推测目的基因psbA还要与编码转运肽的DNA片段连接,D项正确。13.答案:(1
26、)高压蒸汽灭菌平板划线纤维素(2)某些微生物只有利用深海冷泉中的特有物质才能生存(或需要在深海冷泉的特定环境中才能存活)(3)拟杆菌作为分解者,将沉降到深海底部的难降解多糖物质分解为无机物,归还到非生物环境中,有利于碳循环的顺利进行(4)耐低温解析:(1)对培养基进行灭菌,一般采用高压蒸汽灭菌法。纯化细菌时,可以采用稀释涂布平板法和平板划线法。从图中可以看出,在以纤维素为碳源的培养基中,细胞数量最多,可推知拟杆菌新菌株在以纤维素为碳源时生长状况最好。(2)由于深海中的环境比较特殊,某些微生物只能利用深海冷泉中的特有物质才能生存,所以在培养基中进行培养、分离筛选时,仍有很多微生物不能被分离筛选出
27、来。(3)拟杆菌为异养生物,作为该生态系统的分解者,能将沉降到深海底部的难降解多糖物质分解为无机物,归还到非生物环境中,有利于碳循环的顺利进行。(4)深海冷泉温度较低,故生活在其中的拟杆菌所分泌的各种多糖降解酶,应具有耐低温的特性,才能高效降解各种多糖,保证拟杆菌的生命活动正常进行。14.答案:(1)维持培养液的pH为培养细胞提供必要的营养物质、激素和各种细胞生长增殖必需的微量物质(2)病变细胞培养液氢氧化铝佐剂(3)疫苗注射的剂量是否出现抗体及有无免疫病理反应不注射疫苗该种灭活疫苗是安全的,能有效预防新冠病毒且无免疫病理反应解析:(1)在动物细胞培养中,除了适宜的营养物质、温度等条件外,还需
28、要95%空气与5%CO2的气体条件,其中CO2的作用是调节培养液的pH;由于动物细胞生活的内环境还有一些成分尚未研究清楚,所以需要加入动物血清,以提供一个类似生物体内的环境,动物血清的作用是为培养细胞提供必要的营养物质、激素和各种细胞生长增殖必需的微量物质。(2)把新冠病毒毒株接种于Vero细胞培养液,在适宜条件下培养,在有细胞出现病变时,收获细胞培养液,纯化后加入适宜浓度的-丙内酯灭活,并加入氢氧化铝佐剂以提高免疫原性。(3)分析实验目的、分组、操作及结果可知,本实验探究疫苗注射的剂量是否对机体安全有影响,能否有效预防新冠病毒传染且无免疫病理反应,因此该实验的自变量是疫苗注射的剂量,因变量是
29、是否出现抗体及有无免疫病理反应;对E组的X操作是不注射疫苗,作为空白对照。由于A、B、C、D四组均出现新冠病毒抗体、且均未出现免疫病理反应,所以该实验结果证明该种灭活疫苗是安全的,能有效预防新冠病毒且无免疫病理反应。15.答案:(1)终止子、标记基因Hind 和BamHSma(2)5.35 kb12.35 kb(3)反义GhMnaA2转录的mRNA能与棉花细胞内的GhMnaA2转录的mRNA互补配对,从而抑制基因的表达(翻译)(4)因为棉花细胞中本来就有GhMnaA2,不管是否导入都能与该探针发生碱基互补配对解析:(1)基因表达载体除了图示组成(启动子和目的基因)外,还应包括复制原点、终止子、
30、标记基因等。根据题图可知,过程中所用的限制酶分别是Hind 和BamH、Sma。(2)过程中,用Sma和Not酶切正义基因表达载体获得0.1 kb、3.75 kb、5.25 kb、8.6 kb四种长度的DNA片段,则用Not酶切反义基因表达载体获得的DNA片段的长度应是0.1+5.25=5.35(kb)、3.75+8.6=12.35(kb)。(3)由于反义GhMnaA2转录的mRNA能与棉花细胞内的GhMnaA2转录的mRNA互补配对,从而抑制基因的表达(翻译),故导入细胞内的反义GhMnaA2能阻止-甘露糖苷酶合成,使棉纤维更长。(4)因为棉花细胞中本来就有GhMnaA2,不管基因表达载体是
31、否导入都能与该探针发生碱基互补配对,故不能用GhMnaA2探针进行DNA分子杂交来鉴定基因表达载体是否导入棉花细胞。16.答案:(1)能与P基因母链的一段碱基序列互补配对、短单链核酸5端(2)P基因编码链的第一个碱基与EcoR识别序列的最后两个碱基编码一个氨基酸,导致mRNA的密码子被错位读取在引物中的EcoR识别序列3端添加1个碱基(3)增强FLAG-P与UBC的结合参与P与UBC的结合(4)药物A通过增强P与UBC结合促进P降解解析:(1)通过PCR特异性扩增P基因时,由于DNA聚合酶不能从头复制DNA,因此需要引物,引物是与目的基因(P基因)进行碱基互补配对的短单链DNA或RNA;DNA
32、合成时,新链的延伸方向是5端3端,引物是人为添加的,因此需要在5端加上酶切位点便于保护目的基因。(2)融合基因转录出的mRNA序列正确,翻译出的融合蛋白中FLAG的氨基酸序列正确,但P基因对应的氨基酸序列与P不同,说明P基因的翻译过程出错。由题图可知,P基因编码链的第一个碱基(A)与EcoR识别序列的最后两个碱基(TC)编码一个氨基酸,导致mRNA的密码子被错误读取,导致翻译过程出错。可在修改扩增P基因时使用的引物中的EcoR识别序列的3端添加1个碱基解决该问题。(3)组仅添加UBC,用UBC抗体检测,不出现杂交带;组添加UBC和FLAG-P,出现杂交带;组添加UBC、药物A和FLAG-P,杂交带更加明显,说明药物A的作用是增强FLAG-P与UBC的结合。组或组的差异在于组使用FLAG-P,出现杂交带;组使用FLAG-P,不出现杂交带,据此推测P中缺失的特定序列参与P与UBC的结合。(4)根据(3)的分析推测,药物A通过增强P与UBC结合,从而促进P被蛋白酶识别并降解,达到治疗的目的。