1、选考章末检测卷(十二)第十二章生物技术实践1(201610月浙江选考，节选)(一)请回答从土壤中分离产脲酶细菌和脲酶固定化实验的有关问题：(1)配制LB固体培养基：取适量的蛋白胨、酵母提取物、NaCl，加入一定量的蒸馏水溶解，再加入_，灭菌备用。(2)配制尿素固体培养基：先将适宜浓度的尿素溶液用_灭菌过的G6玻璃砂漏斗过滤，因为G6玻璃砂漏斗_，故用于过滤除菌。然后将尿素溶液加入已经灭菌的含有酚红的培养基中，备用。(3)取适量含产脲酶细菌的104、105两种土壤稀释液，分别涂布接种到LB固体培养基和尿素固体培养基上，培养48 h，推测固体培养基上生长的菌落数最少的是_(A.105稀释液尿素固体
2、培养基B105稀释液LB固体培养基C104稀释液尿素固体培养基D104稀释液LB固体培养基)。在尿素固体培养基上产脲酶细菌菌落周围出现_，其原因是细菌产生的脲酶催化尿素分解产生_。(4)制备固定化脲酶时，用石英砂吸附脲酶，装柱。再用蒸馏水洗涤固定化酶柱，其作用是_。【解析】(1)LB固体培养基的成分组成是：蛋白胨、酵母提取物、氯化钠、蒸馏水、琼脂。(2)尿素固体培养基的制备：先将含有酚红的固体培养基高压蒸汽灭菌，待冷却至60 时，加入灭菌的尿素溶液，但要注意尿素溶液的加入需用到高压蒸汽灭菌的G6玻璃漏斗过滤，用其过滤的原因是孔径小、细菌不能通过，便于除菌。(3)LB固体培养基含有的营养元素全面
3、，培养基上会有较多菌落，而尿素培养基只以尿素为唯一氮源，培养基上有较少菌落。尿素培养基上细菌产生的脲酶将尿素分解为NH3，使菌落周围的含酚红的培养基变成红色环。(4)制备固定化脲酶，可用吸附法将脲酶固定在石英砂上，用10倍体积的蒸馏水冲洗固定化酶柱，目的是除去未吸附的游离的脲酶。 【答案】(1)琼脂(2)高压蒸汽孔径小，细菌不能滤过(3)A红色环氨(或NH3)(4)除去游离的脲酶2下图为“大肠杆菌的培养和分离”实验的基本流程，请回答下列问题：(1)A过程配制的是通用细菌培养基，称为_培养基。配制时除了加入特定的营养物质以外，还要加入一定量的氯化钠，以维持_。对培养基酸碱度的调节，应该在B过程的
4、_(填“前面”或“后面”)进行。(2)与C过程相比，D过程培养基中增加的物质是_。E过程所需的温度是_。(3)D过程后，一个菌体便会形成一个_，这种分离方法是_的通用方法，也是筛选特定菌株的最简便方法之一。(4)植物组织培养时，先配制MS培养基，再加入一定比例的植物激素，当生长素相对较多时，可促进_。(5)植物组织培养和微生物培养都需要无菌操作，下列不适宜用高压蒸汽灭菌的是_。A接种环和镊子B三角瓶和广口瓶C发芽培养基和生根培养基D用于培养的幼茎和幼芽【解析】(1)LB液体培养基是通用的细菌培养基，LB固体平面培养基则用于划线分离，培养基中加入氯化钠的作用是维持培养基的渗透压，培养基需调整好酸
5、碱度后才能进行灭菌，若灭菌后再进行酸碱度调整，又会产生新的污染。(2)在液体培养基的基础上加入一定量的琼脂就成了固体培养基，培养好后的菌种应置于4 冰箱中保存。(3)通过划线分离可使一个菌体繁殖出一个菌落。(4)植物组织培养中，若生长素多，有助于生根；若细胞分裂素多，则利于生芽。(5)高压蒸汽灭菌常用于培养基、培养器材等的灭菌，而用于培养的幼茎和幼芽则不能进行任何的灭菌操作，否则会导致细胞死亡。【答案】(1)LB培养基的渗透压前面(2)琼脂4 (3)(单)菌落消除污染杂菌(纯化菌种)(4)生根(5)D3下图是利用土壤中L微生物提取脲酶，并进行纯化和固定化的实验流程。请回答下列问题：(1)筛选微
6、生物L时，用_作为培养基中的唯一氮源，加入_作凝固剂。接种时应采用_(方法)。(2)下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是_。A高压蒸汽灭菌B紫外灯照射C用70%的酒精浸泡D过滤(3)对微生物L进行扩大培养时宜采用_培养基，并采用_方法对接种环进行灭菌。(4)脲酶宜采用共价偶联法进行固定化，可通过检测固定化脲酶的_来确定其应用价值。除此法外，酶的固定化方法还包括_、_及交联法等。【解析】(1)微生物L能产生脲酶，脲酶能分解尿素，因此微生物L能利用尿素作为其生长的氮源，所以筛选微生物L时，须用尿素作为培养基中的唯一氮源，由于琼脂是未被提纯的混合物，其内含一定量的含氮化合物，所以要用经纯化的琼脂糖作为
7、凝固剂。利用涂布分离法更易形成单菌落，故纯化微生物L应采用涂布分离法。(2)由于尿素加热会分解，所以对尿素溶液进行灭菌的最适方法是用G6玻璃砂漏斗过滤。(3)对微生物L进行扩大培养时应采用液体培养基；接种环用灼烧的方法进行灭菌。(4)检测固定化酶的应用价值时需要检测该酶的活性。酶的固定化方法有吸附法、共价偶联法、交联法和包埋法等。【答案】(1)尿素琼脂糖涂布分离法(2)D(3)液体灼烧(4)活性包埋法吸附法4现在人们吃什么都讲究天然，所以目前市场上果汁饮料、果酒、果醋越来越受到人们的青睐。请回答下列问题：(1)苹果醋是最受欢迎的饮料之一，其在生产过程中利用了_的发酵作用，过程需将温度控制在_。
8、(2)喝剩的葡萄酒放置一段时间后会变酸的原因是_。(3)在果酒的酿造过程中，如果果汁灭菌不严格，含有醋杆菌，在酒精发酵旺盛时，醋杆菌能否将果汁中的糖发酵为醋酸？_(填“能”或“不能”)。请说明理由：_。(4)若要提高果醋的产量，发酵过程中关键是要提供_、_等条件。【解析】(1)苹果醋制作的原理：醋杆菌在氧气充足的条件下，将糖类或酒精转化成醋酸；酵母菌的最适生长温度范围是2530 ，因此过程需将温度控制在2530 。(2)喝剩的葡萄酒放置一段时间后会变酸，是由于空气中的醋杆菌混入葡萄酒后发酵产生了醋酸。(3)在无氧环境下，酒精发酵旺盛，而醋杆菌是好氧细菌，在果酒发酵的无氧环境下无法生存，因此在果
9、酒酿造过程中，醋杆菌不能将果汁中的糖发酵为醋酸。(4)若要提高果醋的产量，发酵过程中关键是要提供有氧环境、适宜的温度和pH等条件。【答案】(1)醋杆菌2530 (2)空气中的醋杆菌混入葡萄酒后发酵产生了醋酸(3)不能醋杆菌是好氧细菌，而果酒发酵需在无氧环境下进行，醋杆菌无法生存(4)有氧环境适宜的温度和pH5培育脱毒草莓的目的是利用植物组织培养技术避免病毒感染草莓幼苗，从而提高草莓的生命力和产量。脱毒草莓具有栽培容易、增产效果显著、周期短、经济效益高等特点，是发展我国高效农业和绿色有机农业的首选经济作物。请回答下列问题：(1)培育脱毒植物的原理是植物细胞具有_。外植体形成愈伤组织需要经过_过程
10、，愈伤组织形成幼苗需要经过_过程。整个培养过程要在_条件下进行。(2)对培养基进行灭菌时，多采用_法，而在微生物培养实验中对接种环或涂布器灭菌时，则用_法。(3)进行植物组织培养需配制MS培养基，培养基中常用的凝固剂是_。该培养基中常需要添加_、_等植物激素。欲利于根的分化，植物激素的用量比例应为_。【解析】(1)植物细胞具有全能性，这是植物组织培养的理论基础。培养的外植体要经过脱分化和再分化过程才能形成幼苗，整个过程要保持无菌操作。(2)培养基常采用高压蒸汽灭菌，玻璃器皿常采用干热灭菌，接种环等金属器具常采用灼烧灭菌。(3)配制培养基时常用的凝固剂是琼脂，生长素与细胞分裂素等植物激素可调节脱
11、分化和再分化过程。当生长素多于细胞分裂素时，利于生根。【答案】(1)全能性脱分化再分化无菌(2)高压蒸汽灭菌灼烧灭菌(3)琼脂生长素细胞分裂素生长素多于细胞分裂素(合理即可)6下图是泡菜的制作及测定亚硝酸盐含量的实验流程示意图。请回答下列问题： (1)测定亚硝酸盐含量的方法是_。在样品处理过程中，用_将pH调至_，在出现白色沉淀后，水浴加热至_。在绘制标准曲线时，应以_为横坐标，_为纵坐标。(2)泡菜腌制过程中，用水密封坛口的主要作用是_。【解析】(1)在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐可与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，这一产物再与N1萘基乙二胺偶联，形成紫红色产物，可用光电比色法测定亚硝酸盐的含量。在测定亚硝酸盐含量的过程中，首先要对样品进行处理，需用NaOH溶液将样品pH调至8.0，再水浴加热至60 。在绘制标准曲线时，以亚硝酸钠含量为横坐标，以光密度值为纵坐标。(2)在腌制泡菜的过程中，用水密封坛口的主要作用是为发酵创造无氧条件。【答案】(1)光电比色法NaOH溶液8.060 亚硝酸钠含量光密度值(2)为发酵创造无氧环境