1、第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）专题二 微生物的利用考纲引领 1.微生物的分离和培养。2.某种微生物数量的测定。3.培养基对微生物的选择作用。考点一 微生物的实验室培养第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）1.培养基（1）概念：人们按照微生物对的不同需求，配制出供其生长繁殖的。营养物质营养物质水、碳源、氮源、无机盐pH氧气固体培养基第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）（4）判一判据物理状态的不同，培养基只有液体培养基和固体培养基两种类型（）培养基中一般都含有水、碳源、氮源和无机盐四种成分（）在配制培养基时，除满足营养需求外，还应考虑pH、O2及特殊营养物质
2、的需求（）第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）2.无菌技术（连一连）第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）3.纯化大肠杆菌（1）制备固体培养基的流程：称量灭菌倒平板平板划线法稀释涂布平板法第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）1.微生物和动植物营养要素的比较第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）【提示】培养基的营养构成（1）各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。（2）不同培养基要满足不同微生物对pH、特殊营养物质及氧气的需求。2.两种纯化细菌的方法的比较项目优点缺点平板划线法可以观察菌落特征，对混合菌进行分离不能计数稀释涂布平板
3、法可以计数，可以观察菌落特征吸收量较小，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）3.微生物的纯化培养方法平板划线法稀释涂布平板法注意事项（1）接种环的灼烧：第一次划线前：接种环上的微生物，避免污染培养物每次划线前：杀死残留菌种，保证每次划线菌种来自上次划线末端划线结束后：杀死残留菌种，避免污染环境和感染操作者（2）灼烧接种环之后，要冷却后再进行操作，以免温度太高杀死菌种（3）划线时最后一区域不要与第一区域相连（4）划线用力要大小适当，防止用力过大将培养基划破（1）稀释操作时：每支试管及其中的9 mL水、移液管等均需灭菌；操作时，试管口和移液管应在离火
4、焰12 cm处（2）涂布平板时：涂布器用体积分数为70%酒精消毒，取出时，让多余酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精酒精灯与培养皿距离要合适，移液管管头不要接触任何物体第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）培养基的制备、灭菌与消毒、微生物的纯化和培养过程及菌液划线分离与涂布分离法是近年高考的热点与焦点所在。预计2015年高考仍会呈现，题型为非选择题。真题回顾 判断微生物的实验室培养的正误。（1）在琼脂固体培养基上长出的单个菌落含有多种细菌（2011重庆卷T2A）（）第十一单元 生物技术实践高考总复习
5、生物（RJ）（2）在培养基中加入青霉素可抑制真菌而促进细菌生长，向液体培养基中通入氧气能促进破伤风杆菌的生长（2011重庆卷T2BC）（）（3）对新配制的培养基灭菌时所用的设备是高压蒸汽灭菌锅。实验前需对超净工作台进行消毒处理（2010山东卷T34（2）（）（4）用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板（2009安徽卷T6A）（）（5）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行灭菌；操作者的双手需要进行清洗和消毒（2009宁夏卷T40（2）（）第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）考点分向考向一 培养基、无菌技术1.（2013江苏单科）某研究小组从
6、有机废水中分离微生物用于废水处理。下列叙述正确的是（）A.培养基分装到培养皿后进行灭菌B.转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线C.接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养D.培养过程中每隔一周观察一次第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）【解析】在配制培养基的过程中要先灭菌后倒平板，A错误；转换划线角度后要对接种环进行灼烧灭菌再进行划线，B正确；接种后放置在恒温培养箱中进行培养，C错误；培养过程中一般要隔天观察一次，D错误。【答案】B2.细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌（）A.接种环、手、培养基B.高压锅、手、接种环第十
7、一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）C.培养基、手、接种环D.接种环、手、高压锅【解析】一般说来灭菌是指彻底杀灭微生物使其永远丧失生长繁殖的能力，对于培养基、操作器皿和接种环等都需要灭菌。消毒仅指杀死物体表面或内部一部分对人体有害的病原菌而对被消毒的物体基本无害，操作者的手臂需要消毒。高压蒸汽灭菌锅是灭菌设备，通常用于培养基的灭菌。用酒精擦拭双手是消毒的一种方法。火焰灼烧，可以迅速彻底地灭菌，适用于微生物的接种工具，如接种环。【答案】C第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）【认知纠偏】消毒和灭菌的比较第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）第十一单元 生物技术实践高考
8、总复习 生物（RJ）考向二 微生物的纯化分离3.平板划线操作时划出了五个区域，在适宜条件下培养后，观察到的结果是（）A.从第一区域到第五区域菌落数逐渐增加B.从第一区域到第五区域菌落数逐渐减少C.五个区域内的菌落数差不多D.中间区域菌落数较多，两端区域菌落数较少【解析】在划线过程中，微生物细胞数量随着划线次数的增加而减少。【答案】B第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）4.下图甲、乙是微生物接种常用的两种方法，请回答：（1）图甲是利用法进行微生物接种，图乙是利用法进行微生物接种。这两种方法所用的接种工具分别是和；对这两种接种工具进行灭菌和消毒的方法依次是和酒精消毒。第十一单元 生物技
9、术实践高考总复习 生物（RJ）（2）接种操作为什么一定要在火焰附近进行？_。（3）接种后，在固体培养基上培养细菌时为什么进行倒置培养？_。（4）如图是采用上述接种方法接种后培养的效果图解，其接种方法是（填图甲或图乙）。第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）【解析】图甲和图乙分别是平板划线法和稀释涂布平板法，这两种方法所用的接种工具分别是接种环和涂布器。由于在酒精灯火焰附近存在着无菌区域，因此接种常在火焰附近进行。在微生物培养过程中会产生水，对微生物的生长造成影响，故需要倒置培养。【答案】（1）平板划线稀释涂布平板接种环涂布器灼烧灭菌（2）火焰附近存在着无菌区域（3）避免培养过程产生的
10、水分影响微生物的生长（4）图乙第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）【题后升华】平板划线操作的注意事项：第一次划线及每次划线之前都需要灼烧接种环。灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。划线时最后一区不要与第一区相连。划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）考点二 分解尿素的细菌的分离与计数1.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数（1）分离原理：土壤中细菌之所以能分解尿素，是由于它们体内能合成，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起到作用。（2）统计菌落数目：统计样品中的活菌一般用法。（3）实验流程：土壤取样微生物的
11、培养与观察细菌的。脲酶催化稀释涂布平板样品的稀释计数第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）【解惑】由于两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。2.（判一判）（1）以尿素为唯一氮源且含酚红的培养基可选择和鉴别尿素分解菌（）（2）利用稀释涂布平板法只能分离微生物不能对微生物进行计数（）（3）选择菌落数在300个以上的培养皿进行计数（）（4）若筛选尿细菌，则配制的培养基特点是氮源只含尿素（）第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）【警示】在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值，并根据平板所对应的稀释度计算出样
12、品中细菌的数目。如果某个平板的菌落数与其他差别甚远，说明该平板操作过程中出现失误，应舍弃。1.筛选菌株的原理微生物的选择培养：在选择培养基的配方中，把尿素作为培养基中的唯一氮源，原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）2.统计菌落数目的方法（1）显微镜直接计数法原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。方法：用计数板计算。缺点：不能区分死菌与活菌。（2）间接计数法（活菌计数法）原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约
13、含有多少活菌。第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）操作：a.设置重复组，增强实验的说服力与准确性。b.为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平板进行计数。计算公式：每克样品中的菌株数（CV）M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数。第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）3.鉴定分解尿素的细菌（1）原理：；由于NH3的产生，培养基碱性增强，pH升高，因此可通过检测pH的变化来判断该化学反应是否发生。（2）方法：以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌，若指示剂变红，则pH升高，说明该种
14、细菌能分解尿素。第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）4.对照原则的运用（1）判断培养基中是否有杂菌污染，需将未接种的培养基同时进行培养。（2）判断选择培养基是否具有筛选作用，需设立牛肉膏蛋白胨培养基进行接种后培养，观察两种培养基上菌落数目，进行对比得出结论。第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）微生物的分离、计数与鉴定是微生物技术领域的重点内容之一，广泛应用于食品加工、微生物污染测定等行业，具有重要实践价值，相关内容在近年高考中多有体现，应高度重视。真题回顾 判断土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的正误。（1）只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素（）第十一单元 生物技术实践高
15、考总复习 生物（RJ）（2）筛选分解尿素的细菌应以尿素作为培养基中的唯一氮源（）（3）统计样品中的活菌一般用平板划线法（）（4）在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变蓝，则说明筛选到分解尿素的细菌（）考点分向考向一 微生物的分离与培养1.（2012浙江自选）幽门螺杆菌（Hp）感染是急慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。在患者体内采集样本并制成菌液后，进行分离培养。实验基本步骤如下：第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）请回答下列有关问题。（1）在配制培养基时，要加入尿素和酚红指示剂，这是因为Hp含有，它能以尿素作为氮源；若有Hp，则菌落周围会出现色环带。第十一单元 生
16、物技术实践高考总复习 生物（RJ）（2）下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是灭菌。A.高压蒸汽 B.紫外灯照射C.70%酒精浸泡D.过滤（3）步骤X表示。在无菌条件下操作时，先将菌液稀释，然后将菌液到培养基平面上。菌液稀释的目的是为了获得菌落。（4）在培养时，需将培养皿倒置并放在中。若不倒置培养，将导致。第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）【解析】（1）幽门螺杆菌（Hp）含有脲酶，能以尿素为氮源，在加入尿素和酚红指示剂的培养基中培养Hp，由于尿素经脲酶的降解可产生碱性的NH3，NH3能使培养基中的酚红由红黄色变成红色，故菌落周围会出现红色环带。（2）由于尿素加热会分解，对尿素溶液进行
17、灭菌最好用G6玻璃漏斗过滤。（3）微生物的分离和培养步骤是：配制培养基灭菌、倒平板接种培养。为获得单菌落，接种操作前应先将菌液稀释，第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）然后将菌液涂布到培养基平面上即可。（4）微生物培养时需将培养皿倒置并放在恒温培养箱中，若不倒置培养，则无法形成单菌落。（5）幽门螺杆菌能将标记的尿素分解为NH3和，故临床上常用呼气试验检测人体内幽门螺杆菌的存在。【答案】（1）脲酶红（2）D（3）接种涂布单（4）恒温培养箱 无法形成单菌落（5）尿素第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）【归纳拓展】选择培养基及应用实例（1）选择培养基在培养基中加入某种化学物质
18、，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长。目的是培养、分离出特定微生物。（2）选择培养基应用实例培养基中加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌。培养基中加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。培养基中缺乏氮源时，可以分离固氮微生物，因为非固氮微生物不能在此培养基上生存。第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也具有分离效果。如石油是唯一碳源时，可以抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，达到分离能消除石油污染的微生物的目的。改变微生物的培养条件，也可以达到分离微生物的目的，如将培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生
19、物。第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）考向二 微生物的数量测定2.自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一般要将它们分离提纯，然后进行数量的测定。下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题。实验步骤：（1）制备稀释倍数为的系列稀释液。（2）为了得到更加准确的结果，你选用法接种样品。（3）适宜温度下培养。第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）结果分析：（1）测定大肠杆菌数时，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确可信的是，其理由是_。A.一个平板，统计的菌落数是230B.两个平板，统计的菌落数是220和260，取平均值240C.
20、三个平板，统计的菌落数分别是210、50和520，取平均值260D.四个平板，统计的菌落数分别是210、300、240和250，取平均值250第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）（2）一同学在稀释倍数为105的培养基中测得平板上菌落数的平均值为234，那么每毫升样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1 mL）。（3）用这种方法测定的大肠杆菌密度，实际活菌数量要比测得的数量，因为_。第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）【解析】实验步骤：为了得到更加准确的结果，应用稀释涂布平板法接种样品。结果分析：（1）选取多个菌落数相差不大的平板计数，取其平均值。（2）。（3
21、）因为菌落可能由两个或多个细菌连在一起生长而成，所以实际活菌数量要比测得的数量多。第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）【答案】实验步骤：（2）稀释涂布平板结果分析：（1）D在设计实验时，一定要涂布至少三个平板作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性；在分析实验结果时，要考虑所设置的重复组的结果是否合理（2）（3）多当两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）考点三 分解纤维素的微生物的分离1.纤维素酶（1）组成：一种酶，它至少包括三种组分，即。C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶复合纤维二糖第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（R
22、J）2.筛选方法（1）方法：刚果红染色法，即通过是否产生来筛选纤维素分解菌。（2）培养基：以为唯一碳源的选择培养基。3.筛选流程土壤取样梯度稀释将样品涂布到的培养基上挑选产生的菌落。透明圈纤维素选择培养鉴别纤维素分解菌透明圈第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）1.两种菌株筛选原理的比较土壤中分解尿素的细菌分解纤维素的微生物选择培养基的成分：尿素作为唯一的氮源鉴定方法：在培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变红，pH升高，说明细菌能分解尿素选择培养基的成分：纤维素作为唯一的碳源鉴定方法：刚果红染色法，即刚果红与纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，培养基出现以纤维素分解菌为中心的透明圈
23、第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）2.选择培养基与鉴别培养基的比较种类制备方法原理用途举例选择培养基培养基中加入某些化学物质依据某些微生物对某些物质或环境条件的嗜好、抗性而设计从众多微生物中分离所需的微生物加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌鉴别培养基培养基中加入某种指示剂或化学药品依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中的特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设计鉴别不同种类的微生物伊红美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）3.分离纤维素分解菌的几个关键步骤（1）分离纤维素分解菌的实验中先用选择培养基，再用鉴别培养基。选择培养基为液体培养基，以
24、纤维素作为碳源和能源的微生物可以正常生长，而其他绝大多数微生物不能正常生长；因培养基中无凝固剂，为液体培养基，利用液体培养基能使营养成分充分消耗，以增加纤维素分解菌的浓度。（2）鉴别培养基含琼脂，为固体培养基，因为要在培养基上形成我们肉眼可见的菌落。刚果红染色法应用的就是此培养基。第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）【易混易错】对选择培养基的选择方法区分不清（1）在培养基中加入某种化学物质。例如，加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌；加入高浓度的食盐可以得到金黄色葡萄球菌。这里的加入是在主要营养成分完整的基础上加入。（2）改变培养基中的营养成分。例如缺乏氮源时可以分离出固氮微生物；石油
25、作为唯一碳源时，可以分离出能消除石油污染的微生物。（3）改变微生物的培养条件。例如，将培养基放在高温环境下培养，可以得到耐高温的微生物。第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）微生物的分离，计数与鉴定是微生物技术领域的重点内容之一，考题多以非选择题的形式出现，微生物的生存及培养结合在一起考查，通过生产生活中有关微生物计数、微生物分离与培养等实际问题进行考查。真题回顾 判断微生物的分离与计数的正误。（1）测定培养液中微生物数量，可选用显微镜直接计数法（2010山东卷T34（3）（）第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）（2）透明圈是刚果红与纤维素形成的复合物，可根据是否出现透明
26、圈来判断有无纤维素分解菌（2011山东T34（4）改编）（）（3）在“检测土壤中细菌总数”的实验中，确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数（2009安徽卷T6D）（）（4）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的比例合适（2009宁夏卷T40（3）（）第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）考点分向考向一 纤维素分解菌的分离与鉴定1.纤维素分解菌能够产生纤维素酶分解纤维素。回答下列问题：（1）在筛选纤维素分解菌的过程中，通常用染色法，这种方法能够通过颜色反应直接对纤维素分解菌进行筛选。
27、甲同学在实验时得到了如图所示的结果，则纤维素分解菌位于（）第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）A.B.C.D.（2）乙同学打算从牛胃中分离纤维素分解菌并计数，与分离醋酸菌相比，进行培养时除了营养不同外，最主要的实验条件差别是_。该同学采用活菌计数法统计的菌落数目往往比活菌的实际数目。第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）（3）丙同学在提取和分离纤维素酶的过程中，为了抵制外界酸和碱对酶活性的影响，采取的措施是向提取液和分离液中添加。若探究纤维素酶活性的最适温度，如何设置对照？_。第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）【解析】（1）刚果红与纤维素形成的红色复合物在纤
28、维素被分解后将不再形成，则在培养基上出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。（2）牛胃是一个厌氧的环境，所以其中的纤维素分解菌与需氧的醋酸菌培养条件有所不同。因是活菌计数法，所以部分死亡菌无法计数。另外当两个或多个细菌连在一起时平板上只观察到一个菌落，所以偏小。（3）探究最适温度可设置一系列的温度梯度相互对照，其他无关变量要适宜。【答案】（1）刚果红A（2）保证无氧环境 小（低）（3）缓冲溶液 不同的温度梯度之间相互对照第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）考向二 富集培养2.富集培养是微生物学中最强有力的技术手段之一。主要是指利用不同微生物间生命活动特点的不同，制定环境条件使仅适应该条件
29、的微生物旺盛生长，从而使其在群落中的数量大大增加，人们能够更容易地从自然界中分离到所需的特定微生物。富集条件可根据所需分离的微生物的特点，从物理、化学、生物及综合多个方面进行选择，如温度、pH、紫外线、高压、光照、氧气、营养等许多方面。下图描述了采用富集方法从土壤中分离能降解对羟基苯甲酸的微生物的实验过程。第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）（1）本实验所需培养基为，碳源为。（2）实验原理是_。（3）重复培养的目的是_。第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）（4）的菌落中大部分是降解的微生物。（5）为组，为组，设置的目的是_。（6）采用法，接种到的培养基中，在 操 作 过
30、 程 中 为 防 止 污 染 应 注 意 的 事 项 是_。第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）【解析】富集培养的培养基是一种选择培养基，可用于具有某种代谢特点的微生物，本题就是为了选择出能分解对羟基苯甲酸的微生物。该实验的培养基的碳源为对羟基苯甲酸；全过程包括筛选扩大培养纯化鉴定。【答案】（1）选择培养基对羟基苯甲酸（2）利用以对羟基苯甲酸为唯一碳源的选择培养基，经富集培养，选择出能降解对羟基苯甲酸的微生物（3）增大分解对羟基苯甲酸微生物的比例（4）对羟基苯甲酸（5）对照实验说明通过富集培养的确得到了欲分离的目标微生物（6）单细胞挑取接种环在火焰上灼烧灭菌，烧红的接种环在空气中冷
31、却，同时打开皿盖挑取菌种接种到试管中，并塞好棉塞，接种环在火焰上灼烧，杀灭残留物第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）1.（2012山东基本能力）除了高温加热以外，其它灭菌方法还有（）A.紫外线照射 B.真空包装C.用保鲜膜密闭D.添加防腐剂【解析】此题考查灭菌的方法。灭菌是使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物（包括芽孢和孢子）。本题中真空包装、添加防腐剂、用保鲜膜密闭都起到了抑菌作用，紫外线照射使细菌的蛋白质变性，核酸受破坏，是灭菌方法。【答案】A第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）2.（2012北京卷）高中生物学实验中，在接种时不进行严格无菌操作对实验结果影响最
32、大的一项是（）A.将少许干酵母加入到新鲜的葡萄汁中B.将毛霉菌液接种在切成小块的鲜豆腐上C.将转基因植物叶片接种到无菌培养基上D.将土壤浸出液涂布在无菌的选择培养基上第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）【解析】在酿制葡萄酒的过程中，如果灭菌不彻底会影响葡萄酒的品质，但影响不大；在制作腐乳的过程中，发酵过程有多种微生物的参与，所以该过程不进行严格的无菌操作对结果影响不大；在植物组织培养过程中，如果灭菌不彻底，杂菌产生的物质会影响外植体的生长，甚至杀死外植体，导致培养失败，对结果影响最大；土壤浸出液本身就含有大量的杂菌，另外在选择培养基上只能生存我们所要筛选的细菌，所以无菌操作不严格，
33、对结果影响也不会太大。【答案】C第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）3.（2009安徽卷）下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是（）A.用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板B.取倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于各组平板上第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）C.将实验组和对照组平板倒置，37 恒温培养2448小时D.确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数【解析】采用稀释涂布平板法统计菌落数目时，一般选择菌落数在30300的平板进行计数。【答案】D第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）
34、4.（2011重庆卷）下列有关细菌培养的叙述，正确的是（）A.在琼脂固体培养基上长出的单个菌落含有多种细菌B.在培养基中加入青霉素可抑制真菌而促进细菌生长C.向液体培养基中通入氧气能促进破伤风杆菌的生长D.在半固体培养基中接种细菌培养后可以观察其运动第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）【解析】菌落就是由单个细菌或同种细胞繁殖成的具有一定形态结构特征的子细胞群体，一个菌落就是一个种群，所以单个菌落就只有一种细菌。青霉素能抑制细菌的细胞壁的形成从而抑制细菌的繁殖。破伤风杆菌是厌氧型的生物。半固体培养基中可以观察细菌的运动。【答案】D第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）5.（
35、2013全国课标）临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。回答下列问题：（1）为了从样本中获取致病菌单菌落，可用法或法将样本接种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。（2）取该单菌落适当稀释，用法接种于固体培养基表面，在37 培养箱中培养24 h，使其均匀生长，布满平板。第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）（3）为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有A、B、C、D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病
36、菌对抗生素A；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B；含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小，说明；含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素D的。第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）（4）根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选用抗生素。【答案】（1）划线稀释涂布（或涂布）（2）涂布（3）敏感不敏感该致病菌对C的敏感性比对A的弱耐药菌（4）A第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）6.（2011新课标全国卷）有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选
37、出能高效降解原油的菌株。回答问题：（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以为唯一碳源的固体培养基上。从功能上讲，该培养基属于培养基。（2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即和。第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）（3）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力_。（4）通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、和。无菌技术要求实验操作应在酒精灯附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）【解析】（1）可以将所需要的微生物从混杂的微生物群中分离出来的培养基为
38、选择培养基。欲筛选出能降解原油的菌株，则培养基中应只含有原油而无其他碳源，这样不能降解原油的细菌在此培养基上不能生存，能降解原油的细菌才能在只含原油这一碳源的培养基上生存。（2）分离纯化菌种时，接种的方法有平板划线法和稀释涂布平板法，其目的都是使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）从而能在培养基表面形成单菌落，以便于纯化菌种。（3）降解原油能力越强的菌株，在菌落周围形成的分解圈越大。（4）实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌（如接种环）、干热灭菌（如培养皿）和高压蒸汽灭菌（如培养基）等。无菌技术要求整个实验操作都要在酒精灯火焰附近进行，以避免周围微生物的污染。【答案】（1）原油选择（2）平板划线法稀释涂布平板法（3）强（4）干热灭菌 高压蒸汽灭菌 火焰第十一单元 生物技术实践高考总复习 生物（RJ）
