1、第2讲微生物的培养和利用2015备考最新考纲1微生物的分离和培养。2.某种微生物数量的测定。3.培养基对微生物的选择作用。4.利用微生物发酵来生产特定的产物以及微生物在其他方面的应用。考点1微生物的实验室培养(5年15考)(2013新课标全国卷、四川理综、江苏卷，2012北京卷、浙江、山东，2011天津)一、培养基1概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质2营养构成3培养基的种类及用途划分标准培养基的种类特点用途物理性质液体培养基不加凝固剂工业生产半固体培养基加凝固剂，如琼脂观察微生物的运动、鉴定固体培养基微生物的分离与鉴定、活菌计数、菌种保藏化学成分天然培养基
2、含化学成分不明确的天然物质工业生产合成培养基培养基成分明确(用化学成分已知的化学物质配成分类、鉴定用途选择培养基培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长培养、分离出特定微生物(如在培养酵母菌和霉菌时，可在培养基中加入青霉素；在培养金黄色葡萄球菌时，可在培养基中加入高浓度的食盐等)鉴别培养基根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品鉴别不同种类的微生物，如可用伊红美蓝培养基检测饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌(若有，菌落呈深紫色，并带有金属光泽)特别提醒 自养微生物与异养微生物所需的营养物质不同：自养微生物所需的碳源、氮源来自含碳、含氮的无机物，
3、而异养微生物需要的碳源、氮源来自含碳、含氮的有机物，因此可根据培养基中营养物质判断微生物的代谢类型。含氮无机物不但能给自养微生物提供氮源，也能作为能源物质，提供能量，如NH3既作为硝化细菌的氮源也作为能源。二、无菌技术1消毒2灭菌3消毒和灭菌比较比较项目理化因素的作用强度消灭微生物的数量芽孢和孢子能否被消灭消毒较为温和部分生活状态的微生物不能灭菌强烈全部微生物能三、微生物的纯化培养及菌种的保藏1原理在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。2制备固体培养基的流程3纯化大肠杆菌的方法常用的微生物接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法。(1)平板划线法
4、：是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。(如下图示)(2)稀释涂布平板法：是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。(如下图所示)系列稀释操作(如下图所示)涂布平板操作(如下图所示)(3)两种纯化细菌的方法的比较项目优点缺点适用范围平板划线法可以观察菌落特征，对混合菌进行分离不能计数适用于好氧菌稀释涂布平板法可以计数，可以观察菌落特征吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延适用于厌氧菌和兼性厌氧菌4.培养接种后的培养皿放入恒温箱内培养5菌种保藏(1)临时保藏(2)长期保存法：甘油管藏法
5、，放在20_下保存特别提醒 (1)配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的注意事项倒平板的适宜温度是50 左右，温度过高会烫手，过低培养基又会凝固。平板需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。(2)平板划线操作的注意事项第一次划线及每次划线之前都需要灼烧接种环。灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。划线时最后一区不要与第一区相连。划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。微生物培养与分离的考查1(2013江苏)某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。下列叙述正确的是()。A培养基分装到培养皿后进行灭菌B转换划线角度后需灼烧接种环
6、再进行划线C接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养D培养过程中每隔一周观察一次解析本题考查微生物的分离和培养过程中的操作要求和培养条件等相关知识，意在考查考生的知识运用能力和实验处理能力。培养微生物的过程中应先灭菌再倒平板，A错误；每一次划线前都要进行接种环的灼烧灭菌，B正确；接种后的培养皿应在恒温培养箱中进行培养，光照会影响温度等条件；培养过程中观察间隔的时间一般不超过24 h。答案B微生物实验室培养的拓展应用2(2013新课标全国理综)临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。回答下列问题：
7、(1)为了从样本中获取致病菌单菌落，可用_法或_法将样本接种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。(2)取该单菌落适当稀释，用_法接种于固体培养基表面，在37 培养箱中培养24 h，使其均匀生长，布满平板。(3)为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有A、B、C、D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A_；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B_；含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小，说明_；含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能
8、是抗生素D的_ _。(4)根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好选用抗生素_。解析(1)在微生物的培养过程中，常用来分离微生物的方法是稀释涂布平板法或平板划线法。(2)为了使微生物在培养基上能够均匀分布，一般用稀释涂布平板法将微生物接种在培养基上。(3)在抗药性检验过程中，如果在菌落周围出现透明圈，说明此种抗生素可抑制该细菌；透明圈的大小表示此种抗生素抗菌效果的强弱。据此可判断抗菌效果强弱依次是A、C、B；D的透明圈中出现了一个菌落，说明该菌落对此种抗生素具有耐药性。答案(1)平板划线稀释涂布(或涂布)平板(2)稀释涂布平板(涂布)(3)敏感不敏感该致病菌对C的敏感性比对A的弱耐药菌(4)A归
9、纳比较1培养基的配制原则(1)目的要明确：配制时应根据微生物的种类、培养目的等确定配制的培养基种类。(2)营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。(3)pH要适宜：细菌为6.57.5，放线菌为7.58.5，真菌为5.06.0，培养不同微生物所需pH不同。2培养基的营养构成(1)各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源和无机盐；(2)不同培养基还要满足不同微生物对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。3微生物和动植物营养要素的比较项目碳源氮源能源无机盐、水动物糖类、脂肪等蛋白质或其降解物同碳源都需要，种类及功能基本相同微生物异养型糖类、脂肪、醇、有机酸蛋白质或其降解物、铵盐、硝酸盐、N
10、2等同碳源自养型CO2、碳酸盐等NH3、铵盐、硝酸盐等氧化无机物或利用光能绿色植物铵盐、硝酸盐光能考点2分解尿素的细菌的分离与计数(5年9考)(2012浙江卷，2010全国、重庆卷、安徽卷)一、实验原理1分离原理土壤中细菌之所以能分解尿素，是由于它们体内能合成脲酶，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起到催化作用。2筛选菌株的原理微生物的选择培养：在选择培养基的配方中，把尿素作为培养基中的唯一氮源，原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。二、统计菌落数目的方法(1)显微镜直接计数法原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。方法：用血球计数板计算。缺点：
11、不能区分死菌与活菌。(2)间接计数法(活菌计数法)原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。操作：a设置重复组，增强实验的说服力与准确性。b为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平板进行计数。计算公式：每克样品中的菌株数(CV)M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。三、实验流程土壤取样样品的稀释微生物的培养与观察细菌的计数。注意事项(1)在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值，并根据平板所对应的
12、稀释度计算出样品中细菌的数目，如果某个平板的菌落数与其他差别甚远，说明该平板操作过程中出现失误，应舍弃。(2)统计的菌落往往比活菌的实际数目低。这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。思维激活判断正误(1)只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素 ()。(2)筛选分解尿素的细菌应以尿素作为培养基中的唯一氮源()。(3)统计样品中的活菌一般用平板划线法()。(4)在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变蓝，则说明筛选到分解尿素的细菌()。答案(1)(2)(3)(4)微生物分离与计数的考查 (2012浙江自选，17)幽
13、门螺杆菌(Hp)感染是急慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。在患者体内采集样本并制成菌液后，进行分离培养。实验基本步骤如下：请回答下列有关问题。(1)在配制培养基时，要加入尿素和酚红指示剂，这是因为Hp含有_，它能以尿素作为氮源；若有Hp，则菌落周围会出现_色环带。(2)下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是_灭菌。A高压蒸汽 B紫外灯照射C体积分数为70%酒精浸泡 D过滤(3)步骤X表示_。在无菌条件下操作时，先将菌液稀释，然后将菌液_到培养基平面上。菌液稀释的目的是为了获得_菌落。(4)在培养时，需将培养皿倒置并放在_中。若不倒置培养，将导致_。(5)临床上用14C呼气试验检测人体是否感染Hp
14、，其基本原理是Hp能将14C标记的_分解为NH3和14CO2。解析此题考查微生物的分离与培养知识。(1)幽门螺杆菌(Hp)含有脲酶，能以尿素为氮源，在加入尿素和酚红指示剂的培养基中培养Hp，由于尿素经脲酶的降解可产生碱性的NH3，NH3能使培养基中的酚红由红黄色变成红色，故菌落周围会出现红色环带。(2)由于尿素加热会分解，对尿素溶液进行灭菌最好用G6玻璃砂漏斗过滤。(3)微生物的分离和培养步骤是：配制培养基灭菌、倒平板接种培养。为获得单菌落，接种操作前应先将菌液稀释，然后将菌液涂布到培养基平面上即可。(4)微生物培养时需将培养皿倒置并放在恒温培养箱中，若不倒置培养，则无法形成单菌落。(5)幽门
15、螺杆菌能将14C标记的尿素分解为NH3和14CO2，故临床上常用14C呼气试验检测人体内幽门螺杆菌的存在。答案(1)脲酶红(2)D(3)接种涂布单(4)恒温培养箱无法形成单菌落(5)尿素拓展归纳1鉴定分解尿素的细菌(1)原理：CO(NH2)2H2OCO22NH3；由于NH3的产生，培养基碱性增强，pH升高，因此可通过检测pH的变化来判断该化学反应是否发生。(2)方法：以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌，若指示剂变红，则pH升高，说明该种细菌能分解尿素。2对照原则的运用(1)判断培养基中是否有杂菌污染，需将未接种的培养基同时进行培养。(2)判断选择培养基是否具有筛选作用，需设
16、立牛肉膏蛋白胨培养基进行接种后培养，观察两种培养基上菌落数目，进行对比得出结论。考点3分解纤维素的微生物的分离(5年4考)(2013四川卷，2010全国卷、宁夏卷、重庆卷)1纤维素酶纤维素酶是一种复合酶，它包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，具有催化分解纤维素的作用，其作用过程如下：纤维素纤维二糖葡萄糖2纤维素分解菌的筛选原理红色复合物红色消失，出现透明圈即可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。3筛选方法(1)方法：刚果红染色法，即通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。(2)培养基：以纤维素为唯一碳源的选择培养基。4筛选流程土壤取样选择培养梯度稀释将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上挑选产生透
17、明圈的菌落。(1)土壤取样：选择富含纤维素的环境(2)将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上A制备鉴别培养基：主要碳源是CMCNaB刚果红染色法a先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应b倒平板时加入刚果红(3)进一步鉴定a为确定得到的菌是否是纤维素分解菌，还需进行发酵纤维素酶的实验b测定方法一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量测定5分离纤维素分解菌的几个关键步骤(1)分离纤维素分解菌的实验中先用选择培养基，再用鉴别培养基。选择培养基为液体培养基，以纤维素作为碳源和能源的微生物可以正常生长，而其他绝大多数微生物不能正常生长；因培养基中无凝固剂，为液体培养基，利用液体培养基能使
18、营养成分充分消耗，以增加纤维素分解菌的浓度。(2)鉴别培养基含琼脂，为固体培养基，因为要在培养基上形成我们肉眼可见的菌落。刚果红染色法应用的就是此培养基。易错警示！对选择培养基的选择方法区分不清(1)在培养基中加入某种化学物质。例如，加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌；加入高浓度的食盐可以得到金黄色葡萄球菌。这里的加入是在主要营养成分完整的基础上加入。(2)改变培养基中的营养成分。例如缺乏氮源时可以分离出固氮微生物；石油作为唯一碳源时，可以分离出能消除石油污染的微生物。(3)改变微生物的培养条件。例如，将培养基放在高温环境下培养，可以得到耐高温的微生物。菌种筛选的拓展应用(2013四川理综)普通
19、酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，有人将地衣芽孢杆菌的淀粉酶基因转入酵母菌中，经筛选得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌种(过程如图甲所示)。(1)图甲中，过程需要的酶有_。为达到筛选目的，平板内的固体培养基应以_作为唯一碳源。过程需重复几次，目的是_。(2)某同学尝试过程的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图乙所示。该同学的接种方法是_；推测该同学接种时可能的操作失误是_。(3)以淀粉为原料，用工程酵母菌和普通酵母菌在相同的适宜条件下密闭发酵，接种_菌的发酵罐需要先排气，其原因是_。(4)用凝胶色谱法分离淀粉酶时，在色谱柱中移动速度较慢的蛋白质，相对分子质量较_。解析本题综合考查基因工程、微生
20、物的培养、蛋白质的分离等相关知识，意在考查考生的理解能力和综合运用能力。(1)由题目所给信息可以直接看出，工程酵母菌比普通酵母菌利用淀粉的能力强。在以淀粉为唯一碳源的培养基上，工程酵母菌可以正常增殖，而普通酵母菌不能正常增殖。(2)微生物接种最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法，根据图乙菌落分布情况可确定该同学所采用的接种方法是后者；由图乙中菌落过于集中可推测该同学接种时可能的操作失误是涂布不均匀。(3)在以淀粉为原料的培养液中，普通酵母菌繁殖慢，发酵产生气体少；工程酵母菌繁殖快，发酵产生气体多。(4)当相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较大的蛋白质不易进入凝胶内部的通道，只
21、能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快；相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢。答案(1)限制性核酸内切酶、DNA连接酶淀粉进一步筛选纯化获得分解淀粉能力强的酵母菌(2)稀释涂布平板法涂布不均匀(3)工程酵母工程酵母菌分解淀粉产生葡萄糖的能力强，导致酒精发酵产生CO2的速率更快(4)小归纳总结1两种菌株筛选原理的比较土壤中分解尿素的细菌分解纤维素的微生物选择培养基的成分：尿素作为唯一的氮源 鉴定方法：在培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变红，pH升高，说明细菌能分解尿素选择培养基的成分：纤维素作为唯一的碳源 鉴定方法：刚果红染色法，即刚果红与纤维素形成红色复合物
22、，当纤维素被分解后，培养基出现以纤维素分解菌为中心的透明圈1 选择培养基与鉴别培养基的比较种类制备方法原理用途举例选择培养基培养基中加入某些化学物质依据某些微生物对某些物质或环境条件的嗜好、抗性而设计从众多微生物中分离所需的微生物加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌鉴别培养基培养基中加入某种指示剂或化学药品依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中的特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设计鉴别不同种类的微生物伊红美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌3.选择培养基应用实例(1)选择培养基在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长。目的是培养、分离出特定微生物。(2)选择
23、培养基应用实例培养基中加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌。培养基中加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。培养基中缺乏氮源时，可以分离固氮微生物，因为非固氮微生物不能在此培养基上生存。当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也具有分离效果。如石油是唯一碳源时，可以抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，达到分离能消除石油污染的微生物的目的。改变微生物的培养条件，也可以达到分离微生物的目的，如将培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物。1(2012北京卷，5)高中生物学实验中，在接种时不进行严格无菌操作对实验结果影响最大的一项是 ()。A将少许干酵母加入到新鲜的葡萄汁中B将
24、毛霉菌液接种在切成小块的鲜豆腐上C将转基因植物叶片接种到无菌培养基上D将土壤浸出液涂布在无菌的选择培养基上解析在酿制葡萄酒的过程中，如果灭菌不彻底会影响葡萄酒的品质，但影响不大；在制作腐乳的过程中，发酵过程有多种微生物的参与，所以该过程不进行严格的无菌操作对结果影响不大；在植物组织培养过程中，如果灭菌不彻底，杂菌产生的物质会影响外植体的生长，甚至杀死外植体，导致培养失败，对结果影响最大；土壤浸出液本身就含有大量的杂菌，另外在选择培养基上只能生存我们所要筛选的细菌，所以无菌操作不严格，对结果影响也不会太大。答案C2(2012全国)下列关于细菌的叙述，正确的是 ()。A不同种类细菌的生长均需要相同
25、碳源B常用液体培养基分离获得细菌单菌落C细菌大量培养过程中，芽孢形成于细菌生长的调整期D培养基中含有高浓度NaCl有利于金黄色葡萄球菌的筛选解析本题考查微生物的营养、代谢与类群，意在考查考生对教材知识的理解与掌握。不同种类的微生物的代谢类型可能不同，自养型微生物需要无机碳源，而异养型微生物需要的是有机碳源；分离菌种常用的是固体培养基；芽孢形成于细菌生长的稳定期；高浓度的NaCl能抑制其他微生物的生长，对金黄色葡萄球菌不起抑制作用，所以含高浓度NaCl的培养基可用于筛选金黄色葡萄球菌。答案D3(2011重庆理综)下列有关细菌培养的叙述，正确的是 ()。A在琼脂固体培养基上长出的单个菌落含有多种细
26、菌B在培养基中加入青霉素可抑制真菌而促进细菌生长C向液体培养基中通入氧气能促进破伤风杆菌的生长D在半固体培养基中接种细菌培养后可以观察其运动解析菌落就是由单个细菌或同种细胞繁殖成的具有一定形态结构特征的子细胞群体，一个菌落就是一个种群，所以单个菌落就只有一种细菌。青霉素能抑制细菌的细胞壁的形成从而抑制细菌的繁殖。破伤风杆菌是厌氧型的生物。半固体培养基中可以观察细菌的运动。答案D4(经典高考)回答下列关于微生物的问题。高温淀粉酶在大规模工业生产中有很大的实用性，研究者从热泉中筛选了高效产生高温淀粉酶的嗜热菌，其筛选过程如图所示。(1)过程称为_，过程是为了_。(2)号培养基称为_(按功能分)；该
27、培养基中除了加入淀粉外，还需加入另一种重要的营养成分_。A琼脂 B葡萄糖 C硝酸铵 D碳酸氢钠(3)一般对配制的培养基采用高压灭菌，其中“高压”是为了_。答案(1)稀释筛选单个菌落(或筛选)(2)选择培养基C(3)杀死培养基中的细菌芽孢5(经典高考)氯苯化合物是重要的有机化工原料，因其不易降解，会污染环境。某研究小组依照下列实验方案(图1)筛选出能高效降解氯苯的微生物SPl菌。培养基配方如表。培养基的组成液体培养基蛋白胨牛肉膏氯苯氯化钠硝酸铵无机盐(无碳)蒸馏水号10 g5 g5 mg5 g1 L号50 mg5 g3 g适量1 L号2080 mg5 g3 g适量1 L(1)配制号固体培养基时，
28、除添加号液体培养基成分外，还应添加1%的_。(2)培养基配制时，灭菌与调pH的先后顺序是_。(3)从用途上来说，号培养基和号培养基分别属于_培养基和_培养基。在号培养基中，为SP1菌提供氮源的成分是_。(4)在营养缺乏或环境恶劣时，SPl的菌体变成一个圆形的休眠体，这种休眠体被称为_。(5)将SPl菌接种在含不同浓度氯苯的号培养液中培养，得到生长曲线(如图2)。从图2可知，SP1菌在_培养条件下最早停止生长，其原因是_。解析本题考查培养基的配制原则以及微生物的实验室培养过程，意在考查考生的图表信息转换与分析能力。(1)固体培养基中需加入琼脂作为凝固剂。(2)先配制培养基后灭菌，调pH属于培养基
29、的配制过程中的一个环节，故先调pH后灭菌。(3)从用途上看，号培养基为通用培养基(基本培养基)；号培养基是选择培养基，以氯苯为唯一的碳源，其中为SP1菌提供氮源的成分是硝酸铵。(4)芽孢是在一定条件下，细胞质高度浓缩脱水所形成的一种抗逆性很强的球形或椭圆形的休眠体。(5)由图示可知SP1菌在20 mg/L氯苯培养条件下最早停止生长，20 mg/L氯苯可提供的碳源较少，碳源最早耗尽，影响菌体的生长繁殖。答案(1)琼脂(2)先调pH，后灭菌(3)通用选择硝酸铵(4)芽孢 (5)20 mg/L氯苯碳源最早耗尽(时间：30分钟)一、选择题1(2013东城区检测)欲从土壤中分离出能分解尿素的细菌，下列实
30、验操作中不正确的是 ()。A将土壤用无菌水进行一系列的梯度稀释B同一浓度的土壤稀释液应至少涂布三个平板C可将未接种的培养基在相同条件下培养作为对照D用加入刚果红指示剂的培养基可筛选出分解尿素的细菌解析本题考查微生物的分离与培养，意在考查考生的实验分析能力。为了获得单个菌落，应将土壤用无菌水进行一系列的梯度稀释，A正确；为了使结果更加准确，同一浓度的土壤稀释液至少要涂布3个平板进行重复实验，然后计算平均值，B正确；加入刚果红的培养基用来筛选纤维素分解菌，D错误。答案D2(2013广东深圳一模，2)某学者欲研究被石油污染过的土壤中细菌数量，并从中筛选出能分解石油的细菌。下列操作错误的是 ()。A利
31、用平板划线法对细菌进行计数B用以石油为唯一碳源的培养基筛选C采用稀释涂布平板法分离菌种D称取和稀释土壤时应在火焰旁解析平板划线法能对细菌分离纯化，但不能对细菌进行计数，稀释涂布平板法可以分离菌种还可进行计数，A项错误。答案A3(2013成都模考)分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是 ()。加尿素不加尿素加琼脂不加琼脂加葡萄糖不加葡萄糖加硝酸盐不加硝酸盐A BC D解析土壤中分解尿素的细菌能够利用尿素作为氮源，因此若培养基中氮源只有尿素，分解尿素的细菌能生长，其他微生物不能生长；分离微生物要用固体培养基，必须加入琼脂；土壤中分解尿素的细菌属于异养型微生物，需要加葡萄糖作为碳源。答案B4(2
32、013成都模考)关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述错误的是 ()。A操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯C等培养基冷却至50 左右时进行倒平板D待平板冷却凝固510 min后将平板倒过来放置解析操作顺序为先灭菌再倒平板；牛肉膏会黏附在称量纸上，应该将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯；培养基冷却至50 左右既没有凝固，同时又不烫手，可以进行倒平板；为了防止冷却过程中培养皿盖上凝集的水珠对平板的污染，培养基冷却凝固后就要将平板倒过来放置。答案A5(2013淮阴期末质量调研，14)如图是微生物平板划线示意图。划线的顺序为12345。下列操作方法正确的是(
33、)。A操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌B划线操作应在火焰上进行C在5区域中才可以得到所需菌落D在12345区域中划线前后都要对接种环灭菌解析本题考查平板划线操作方法。在每次划线前后都要对接种环进行灭菌，接种环的灭菌方法应是在火焰上灼烧，接种时划线操作是在火焰旁进行。在5个区域中，只要有单个活细菌，通过培养即可获得所需菌落。答案D6(2012东城区检测)下列关于微生物分离和培养的叙述，错误的是 ()。A微生物培养前，需对培养基进行消毒B测定土壤样品中的细菌数目，常用菌落计数法C分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度D分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中的唯一氮源解析微生物培养前，需对
34、培养基进行灭菌，而不是消毒；测定土壤样品中的细菌数目，常用菌落计数法；分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度，因为不同的微生物在土壤中的含量不同；分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中的唯一氮源。答案A7(经典高考)下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是 ()。A用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板B取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于各组平板上C将实验组和对照组平板倒置，37 恒温培养2448 hD确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数解析本题以“检测土壤中细菌总数”实验为命题点，考查
35、考生对基础知识的识记情况。在细菌计数时，为保证结果准确，一般选择菌落数目在30300的平板进行计数。答案D二、非选择题8(203潍坊三模A卷)白僵菌高孢粉是国家林业局推广的高效生物杀虫剂之一，应用于多种林木和农作物害虫的防治。白僵菌分生孢子在寄主表皮、气孔或消化道上，遇适宜条件开始萌发，生出芽管。同时产生脂肪酶、蛋白酶、几丁质酶等溶解昆虫的表皮，通过芽管入侵虫体，在虫体内生长繁殖，消耗寄主体内养分，产生各种毒素，形成大量菌丝和孢子，布满虫体全身。请回答下面的问题：(1)从自然菌样中筛选较理想的生产用菌种的一般步骤是：采集菌样富集培养_性能测定。白僵菌的菌样应从_采集。(2)分离白僵菌菌种的培养
36、基属于_培养基。在配制白僵菌培养基时常加入蔗糖、硫酸铵、硝酸钾等成分，蔗糖属于_营养物质。(3)白僵菌纯化培养常用的接种方法是_和_。(4)分离与培养过程中，培养基和接种工具都要进行_处理，利用高温可以使微生物的_等物质发生变性。答案(1)纯化分离感病昆虫(2)选择碳源(3)平板划线法稀释涂布平板法或稀释混合平板法(4)灭菌蛋白质和核酸9(2013山东潍坊一模，34)某实验小组欲从土壤中筛选出能分泌淀粉酶的芽孢杆菌，设计实验步骤如下，请给予合理的补充。(1)采样与培养：将采集的土样混匀后称取1 g，置于经过_法灭菌处理的_(填“固体”或“液体”)培养基中，28 振荡培养。(2)接种与选择：为避
37、免培养液中菌体浓度过高，需将培养液进行_处理之后，将菌液涂布接种于以_为唯一碳源的固体培养基上，30 条件下培养。为避免污染，需将培养皿呈_状态放置。(3)筛选与纯化：将适量的碘液滴加在平板中的菌落周围，如果菌落周围的现象是_，则说明此种菌能够_。从平板中挑取实验效果明显的目的菌株，采用_法接种于新的培养基平板，可对菌株进行进一步的纯化。答案(1)高压蒸汽灭菌液体(2)系列稀释(或“梯度稀释”)淀粉倒置(3)出现透明圈分泌淀粉酶使淀粉发生水解 (平板)划线10(2013枣庄一模)为验证某种中药牙膏是否像其广告宣传的一样具有较强的抑菌功效，某生物兴趣小组的同学设计了如下实验(符合无菌操作要求)。
38、请分析下述实验过程并回答下列问题。用无菌水漱口，向漱口液中加入适量的该中药牙膏；配制牛肉膏蛋白胨固体培养基；将上述样品接种到培养基上，在适宜条件下进行培养；一段时间后，对培养结果进行观察并进行菌落计数(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的一般步骤是：计算、称量、溶化、灭菌、_；培养基在分装前往往要进行_。(2)本实验样品接种时最好采用_法。培养一段时间后，培养基表面长出菌落，每一个标准菌落来源于样品中的_。(3)食品安全检测时通常采用大肠杆菌作为致病微生物的指示菌，为测定哪些菌属于大肠杆菌，可选用_培养基对菌落进行鉴定，大肠杆菌的菌落在该培养基上呈现黑色。(4)本实验设计中的一个明显错误是_，请加
39、以改正_ _。(5)证明所用培养基已经彻底灭菌的方法是_。答案(1)倒平板高压蒸汽灭菌(2)稀释涂布平板一个活菌(3)伊红美蓝(4)没有设置对照实验应将漱口液分为两份，一份加牙膏，一份不加牙膏分别接种培养(5)对未接种的培养基进行培养，如无菌落出现，则证明培养基已彻底灭菌11(2013淄博二模)生物乙醇是以生物质为原料生产的可再生能源，工业上利用微生物将木屑、废纸(主要成分为木质纤维)转化为乙醇的基本工艺流程如图所示，请回答：(1)筛选微生物X菌种的培养基中，应以_为唯一碳源，在培养基中加入_，并根据水解圈的大小来筛选微生物X。(2)微生物筛选常用的接种方法有_和_。(3)下表为筛选时，同一培
40、养基上的单细胞形成的菌落情况：菌落编号菌落直径/mm水解圈直径/mm菌落特征27菌丝较粗而长，菌落干燥呈绒毛状或棉絮状，有霉味1225313311微生物X应是_，筛选时应挑选_号菌落，理由是_。(4)微生物Y主要是_。答案(1)纤维素刚果红(2)平板划线法稀释涂布平板法 (3)霉菌生长速度快，纤维素酶产量(活性)高 (4)酵母菌12苹果醋具有营养丰富，增加机体免疫力，护肤养肝等多种功效，以鲜苹果汁为原料利用发酵瓶制作果酒和果醋的过程简图如下，请分析并回答：(1)过程甲中使用的微生物是_。将鲜苹果汁装入发酵瓶时，要留有大约_的空间，经过1012天后，在酸性条件下用重铬酸钾检测样液，如果颜色变为_
41、色，说明产生了酒精。(2)过程乙中使用的微生物是_，可以从食醋中分离纯化获得，步骤如下：第一步：配制_(填“固体”或“液体”)培养基。第二步：对培养基进行高压蒸汽灭菌。第三步：接种。微生物常用的接种方法有稀释涂布平板法和平板划线法。第四步：培养。温度控制在_范围内。第五步：挑选符合要求的_。(3)在_的条件下，如果缺少糖源，乙中的微生物将甲过程的产物变为_，再将其变为醋酸。解析(1)制作果酒应选用酵母菌。将鲜苹果汁装入发酵瓶时，要留有大约的空间。重铬酸钾溶液与酒精反应呈灰绿色。(2)制作果醋应选用醋酸菌；分离纯化菌种需要固体培养基；醋酸菌生长的最适温度为3035 。(3)氧气充足时，如果缺少糖
42、源，醋酸菌会将乙醇变为乙醛，再将其变为醋酸。答案(1)酵母菌灰绿(2)醋酸菌固体3035菌落(3)氧气充足(有氧)乙醛13(2013西安统考)35%40%的甲醛水溶液(福尔马林)可作为防腐剂，其防腐的原理是使蛋白质变性。自然界中有能分解甲醛的细菌和真菌。下图为分离和纯化分解甲醛细菌的实验过程。请分析回答：(1)过程的目的是_，过程培养出的是_。(2)上述实验中，不需要进行灭菌处理的是_，培养基灭菌的常用方法为_。(3)由的接种可选用_法，通过培养能获得_。经过过程后，取样测定甲醛浓度，选出_，再分离、培养菌株。此菌种异化作用的类型是_。(4)为研究甲醛初始浓度对菌株降解甲醛能力的影响，进行了相应实验并得到如下结果。由图可知，当甲醛的初始浓度小于1 200 mg/L时，菌株_；当甲醛的初始浓度增高至1 600 mg/L时，48 h后菌株对甲醛的降解能力很弱，甚至失去降解能力，其原因可能是_。答案(1)增加目的菌的菌群数量(提高菌的种群密度)以甲醛为唯一碳源的细菌(2)活性污泥高压蒸汽灭菌法(3)平板划线(稀释涂布)单个菌落甲醛浓度最低的培养瓶需氧型(4)可以完全降解甲醛甲醛浓度过高会使菌体蛋白质变性，从而降低了细菌降解甲醛的能力(甲醛浓度过高会产生毒害作用，降低了细菌降解甲醛的能力)