1、1.2基因工程的基本操作程序课后篇巩固提升基础知识巩固1.基因比较小,且核苷酸序列已知,获得该基因的最佳方法是()A.以mRNA为模板反转录合成DNAB.以4种脱氧核苷酸为原料人工合成C.将供体DNA片段转入受体细胞中,再进一步筛选D.先建立基因文库,再从中筛选解析目的基因的获取方法主要有三种:从基因文库中获取、利用PCR技术扩增、人工合成。对于比较小且核苷酸序列已知的目的基因,可以通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成。答案B2.基因工程的核心是()A.目的基因的获取B.基因表达载体的构建C.将目的基因导入受体细胞D.目的基因的检测与鉴定答案B3.人的糖蛋白必须经内质网和高尔基体进一步加工。
2、通过转基因技术等,可以使人的糖蛋白基因得以表达的受体细胞是()A.大肠杆菌B.大肠杆菌质粒C.T4噬菌体D.酵母菌解析糖蛋白上有共价结合的糖链,这些糖链是在内质网和高尔基体上加工完成的,大肠杆菌属于原核生物,细胞内无内质网、高尔基体等细胞器,A项错误;大肠杆菌质粒的化学本质是环状的DNA,不能作为受体细胞,B项错误;T4噬菌体是病毒,不能作为受体细胞,C项错误;酵母菌为真核生物,细胞内有内质网和高尔基体等细胞器,D项正确。答案D4.将目的基因导入玉米茎尖分生区细胞和小鼠受精卵,应采用的方法分别是()A.显微注射技术农杆菌转化法B.基因枪法花粉管通道法C.农杆菌转化法显微注射技术D.基因枪法显微
3、注射技术解析玉米是单子叶植物,对单子叶植物来说,常用的方法是基因枪法;对于动物细胞来说,常用的方法是显微注射技术。答案D5.检测转基因生物染色体DNA上是否插入了目的基因的常用方法是()A.DNA分子杂交技术B.荧光分子标记技术C.放射性同位素标记技术D.显微注射技术解析检测目的基因常采用DNA分子杂交技术,即在含有目的基因的DNA片段上用放射性同位素进行标记,以此作为基因探针,并使基因探针与基因组DNA杂交,若显示出杂交带,则表明目的基因已插入染色体DNA中。答案A6.农杆菌中含有一个大型的Ti质粒(如右图所示),在侵染双子叶植物细胞的过程中,其中的T-DNA片段转入植物的染色体DNA上。若
4、想用基因工程并通过农杆菌向某种双子叶植物中导入抗旱基因,下列分析不合理的是()A.若用Ti质粒作为抗旱基因的载体,目的基因的插入位置应该在T-DNA片段内,且要保证复制原点、启动子和终止子不被破坏B.将重组Ti质粒导入农杆菌之前,可以用Ca2+处理农杆菌C.转基因抗旱植物培育是否成功的最简单检测方法是看该植物是否具有抗旱性状D.若能够在植物细胞中检测到抗旱基因,则说明该基因工程项目获得成功解析若用Ti质粒作为抗旱基因的载体,目的基因的插入位置应该在T-DNA片段内,且要保证复制原点、启动子和终止子不被破坏;将重组Ti质粒导入农杆菌之前,可以用Ca2+处理农杆菌,便于完成转化;转基因抗旱植物培育
5、是否成功的最简单检测方法是看该植物是否具有抗旱性状;能够在植物细胞中检测到抗旱基因及其表达产物,或转基因植物表现出抗旱性状,才能说明该基因工程项目获得成功。答案D7.下面是将某细菌的基因A导入大肠杆菌内,制备“工程菌”的示意图。请据图回答下列问题。(1)获得A有两条途径:一是以A的mRNA为模板,在酶的催化下,合成互补的单链DNA,然后在作用下合成双链DNA,从而获得所需基因;二是根据目标蛋白质的序列,推测出相应的mRNA序列,然后按照碱基互补配对原则,推测其DNA的序列,再通过化学方法合成所需基因。(2)利用PCR技术扩增DNA时,需要在反应体系中添加的有机物质有、4种脱氧核苷酸和耐热性的D
6、NA聚合酶,扩增过程可以在PCR扩增仪中完成。(3)由A和载体B拼接形成的C通常称为。(4)在基因工程中,常用Ca2+处理D,其目的是。解析(1)利用反转录法合成目的基因的过程:以mRNA为模板,在逆转录酶的催化作用下合成单链DNA,然后在DNA聚合酶作用下,合成双链DNA分子。根据蛋白质合成目的基因的过程:根据目标蛋白质的氨基酸序列,推测相应的mRNA序列,然后按照碱基互补配对原则,推测DNA中脱氧核苷酸的序列,通过化学方法合成。(2)PCR过程中需要耐热性DNA聚合酶、原料、模板、引物等物质。(3)目的基因和运载体结合,形成基因表达载体。(4)在利用大肠杆菌作受体细胞时,需要先用Ca2+处
7、理,使之成为感受态细胞,有利于吸收重组DNA分子。答案(1)逆转录DNA聚合酶氨基酸脱氧核苷酸(2)引物模板(目的基因或基因A)(3)基因表达载体(4)使大肠杆菌成为感受态细胞,更容易吸收重组DNA分子能力素养提升8.甲、乙两图表示从细菌细胞中获取目的基因的两种方法,下列叙述错误的是()A.甲方法可建立该细菌的基因组文库B.乙方法可建立该细菌的cDNA文库C.甲方法要以脱氧核苷酸为原料D.乙方法需要逆转录酶参与解析甲方法是从细菌的DNA中直接提取,故可以建立该细菌的基因组文库;乙方法是由mRNA反转录获得目的基因,故可以建立该细菌的cDNA文库。乙方法需要逆转录酶和脱氧核苷酸。答案C9.下图是
8、利用基因工程技术培育转基因植物,生产可食用疫苗的部分过程示意图,其中Pst 、Sma 、EcoR 、Apa 为四种限制性核酸内切酶。下列叙述错误的是()A.图示过程是基因工程的核心步骤B.表达载体构建时需要用到限制酶SmaC.抗卡那霉素基因的存在有利于将含有抗原基因的细胞筛选出来D.除图示组成外,表达载体中还应该含有启动子和终止子等结构解析图示过程为基因表达载体的构建过程,是基因工程的核心步骤。构建过程中需要将目的基因完整切割下来,此时要用到限制酶Pst 、EcoR 。抗卡那霉素基因是标记基因,便于鉴定和筛选含有目的基因的细胞。基因表达载体包括启动子、目的基因、终止子和标记基因等。答案B10.
9、(多选)为获得抗病的马铃薯往往采用转基因技术,将相关抗病基因转移到马铃薯体内。其过程大致如下图所示。下列相关叙述错误的是()A.图中过程涉及两种工具酶,目的基因插入的位置为T-DNA所在的区段B.图中过程,农杆菌需经镁离子溶液处理,处理后的细胞处于感受态C.图中过程,所用培养基中应添加两种激素,添加顺序对细胞的分化方向无影响D.检测相关抗病基因是否在受体细胞内转录,可采用抗原抗体杂交法解析图中表示基因表达载体的构建过程,该过程涉及两种工具酶(限制酶和DNA连接酶),该过程中将目的基因导入受体细胞的方法是农杆菌转化法,因此要将目的基因插入Ti质粒的T-DNA所在的区段,A项正确;图中过程,农杆菌
10、需经钙离子溶液处理,处理后的细胞处于感受态,B项错误;图中过程,所用培养基中应添加两种激素(生长素和细胞分裂素),这两种激素的添加顺序对细胞的分化方向有影响,C项错误;检测相关抗病基因是否在受体细胞内转录,可采用DNARNA分子杂交技术,D项错误。答案BCD11.苦荞是一种有名的经济植物,其含有的黄酮类化合物具有降血糖、降血脂等功效。CHS是合成黄酮类化合物的关键酶,有人把经修饰的CHS基因导入苦荞细胞中,培育高产黄酮苦荞品系。按图示回答下列问题。(1)过程中将修饰后的CHS基因与Ti质粒连接成重组Ti质粒的酶称为。这种酶主要有两类,一类是从T4噬菌体中分离得到的,另一类是从大肠杆菌中分离得到
11、的,称为。这两类酶都能恢复被限制酶切开的两个脱氧核苷酸之间的键。(2)图中将修饰后的CHS基因导入苦荞体细胞的方法称为,除此外还可以利用的方法有。对过程操作前,需先用Ca2+处理农杆菌,使其成为细胞。(3)检测转基因苦荞培育是否成功,不能用抗原抗体杂交技术进行检测的原因是,可以比较转基因苦荞与普通苦荞的含量或测定细胞中CHS含量进行鉴定。解析(1)过程中将修饰后的CHS基因与Ti质粒连接成重组Ti质粒需要DNA连接酶。这种酶主要有两类,一类是从T4噬菌体中分离得到的,称为T4DNA连接酶,另一类是从大肠杆菌中分离得到的,称为EcoliDNA连接酶。DNA连接酶连接的是被限制酶切开的两个脱氧核苷
12、酸之间的磷酸二酯键。(2)将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、花粉管通道法、基因枪法等,图中将修饰后的CHS基因导入苦荞体细胞采用的是农杆菌转化法。将目的基因导入微生物细胞需要采用感受态细胞法,即需先用Ca2+处理农杆菌,使其成为易于吸收周围环境中DNA分子的感受态细胞。(3)检测转基因苦荞培育是否成功,不能用抗原抗体杂交技术进行检测,原因是转基因苦荞植株与普通苦荞植株都能产生黄酮类化合物,可以比较转基因苦荞与普通苦荞的黄酮类化合物含量或测定细胞中CHS含量进行鉴定。答案(1)DNA连接酶EcoliDNA连接酶磷酸二酯(2)农杆菌转化法基因枪法、花粉管通道法感受态(3)转基因苦荞植株与
13、普通苦荞植株都能产生黄酮类化合物黄酮类化合物12.真核生物基因中通常有内含子,而原核生物基因中没有,原核生物没有真核生物所具有的切除内含子对应的RNA序列的机制。已知在人体中基因A(有内含子)可以表达出某种特定蛋白(简称蛋白A)。回答下列问题。(1)某同学从人的基因组文库中获得了基因A,以大肠杆菌作为受体细胞却未得到蛋白A,其原因是。(2)若用家蚕作为表达基因A的受体,在噬菌体和昆虫病毒两种载体中,不选用作为载体,其原因是。(3)若要高效地获得蛋白A,可选用大肠杆菌作为受体。因为与家蚕相比,大肠杆菌具有(答出两点即可)等优点。(4)若要检测基因A是否翻译出蛋白A,可用的检测物质是(填“蛋白A的
14、基因”或“蛋白A的抗体”)。(5)艾弗里等人的肺炎双球菌转化实验为证明DNA是遗传物质做出了重要贡献,也可以说是基因工程的先导,如果说他们的工作为基因工程理论的建立提供了启示,那么,这一启示是。解析(1)人的基因A含有内含子,其转录出的RNA需切除内含子对应的RNA序列后才能翻译出蛋白A,大肠杆菌是原核生物,其没有切除内含子对应的RNA序列的机制,故将人的基因A导入大肠杆菌无法表达出蛋白A。(2)噬菌体是一种专门寄生在细菌体内的病毒,无法寄生在家蚕中。(3)大肠杆菌繁殖快、容易培养,常用作基因工程的受体。(4)在分子水平上检测目的基因是否表达,应用抗原抗体杂交法,即用蛋白A与蛋白A的抗体进行杂
15、交。(5)艾弗里等人的肺炎双球菌转化实验的原理是基因重组,通过重组使得S型细菌的DNA在R型细菌中表达,这种思路为基因工程理论的建立提供了启示。答案(1)基因A有内含子,在大肠杆菌中,其初始转录产物中与内含子对应的RNA序列不能被切除,无法表达出蛋白A(2)噬菌体噬菌体的宿主是细菌,而不是家蚕(3)繁殖快、容易培养(4)蛋白A的抗体(5)DNA可以从一种生物个体转移到另一种生物个体13.为探究SHH基因与角化囊肿发生的相关性,科研人员利用SHH基因的非模板链转录合成的RNA作为探针,进行分子杂交实验,以检测SHH基因在角化囊肿中的表达情况。其基本流程如下图:(Amp表示氨苄青霉素抗性基因;La
16、cZ基因被SHH基因插入后不表达)请回答下列问题。(1)重组载体中SHH基因转录合成RNA探针时,(填“需要”或“不需要”)启动子。(2)步骤中,用Ca2+处理大肠杆菌,使之成为细胞,然后导入重组载体。实验中,用添加氨苄青霉素的培养基培养大肠杆菌,未导入质粒的细菌将会死亡,原因是这些细菌不含有基因。(3)将制备的探针加入角化囊肿切片中,探针将与形成杂交带,进而判断SHH基因的转录情况。解析(1)重组载体中,SHH基因的表达需要启动子。(2)大肠杆菌细胞用Ca2+处理后就成为感受态细胞;能在添加氨苄青霉素的培养基中生存的细菌含有氨苄青霉素抗性基因,没有氨苄青霉素抗性基因的细菌将会死亡。(3)判断SHH基因的转录情况,也就是判断SHH基因是否转录出mRNA。答案(1)需要(2)感受态Amp(或氨苄青霉素抗性或抗性)(3)SHH转录的mRNA(只写mRNA不可)
