1、 专题十四生物技术实践非选择题(本题共8小题，每小题15分，共120分)1(2016辽宁辽南协作体二模，39)为了调查某城市自来水的水质状况，某研究小组测定了自来水水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题：(1)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。涂布平板所用的培养基是_(填“固体”或“液体”)培养基；该培养基的制备过程是_。对培养基灭菌的方法是_法。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白培养基培养了一段时间，若空白培养基出现了菌落，请分析说明原因(写出二个)_； _。(2)培养基灭菌后，将1 mL水样稀释1 000倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1 mL稀释液；经适
2、当培养后，3个平板上的菌落数分别为51、50和49。据此可得出每升水样中的活菌数为_。(3)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时，每次划线之前都要灼烧接种环，目的是_的菌种，使下次划线的菌种直接来源于_ 。【答案】(1)固体计算称量溶化灭菌倒平板高压蒸汽灭菌培养基灭菌不合格倒平板过程被污染(或培养皿灭菌不合格等正确答案均给分)(2)5.0108(3)杀死上次划线后接种环上残留(或杀死接种环上)上一次划线末端【解析】(1)涂布平板所用的培养基是固体培养基。固体培养基的制作过程是：计算称量溶化灭菌倒平板。常采用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白培养基进行培
3、养，若一段时间后出现了菌落，则可能的原因有：培养基灭菌不合格、倒平板过程被污染或培养皿灭菌不合格等。 (2)由题意可知：平板上生长的平均菌落数(515049)350个，则1mL水样中的菌落数(CV)M(500.1)10005.0105个，每升水样中的活菌数为5.01051035.0108个。(3)采用平板划线法分离水样中的细菌，在操作时，每次划线之前都要灼烧接种环的目的是：杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上一次划线末端。2(2016四川成都七中3月模拟，18)为获得果胶酶高产菌株，科研人员进行了下列分离、筛选、鉴定工作。(1)为分离果胶酶产生菌，科研人员配制了下表所
4、示成分的培养基，该表空白处的两种成分是_。制备的培养基常用_法进行灭菌。K2HPO4MgSO4NaNO3FeSO4琼脂0.1 g0.5 g3 g0.01 g2 g15 g加至1 L(2)科研人员将采集的果园土壤放入无菌水中，振荡混匀，制成悬液。为获得较均匀分布的单菌落，还需要将悬液进行_，用_法接种于固体培养基上。接种后的培养基_状态放入培养箱。(3)选择单菌落数目适宜的培养基，加入一定浓度的刚果红溶液(果胶与刚果红结合后显红色)，一段时间后洗去培养基表面的刚果红溶液，观察并比较菌落和_直径的比值，筛选果胶酶高产菌株。(4)将获得的菌株进行液体培养后，从培养液的_(填“上清液”或“沉淀物”)获
5、得粗提的果胶酶。将一定量的粗提果胶酶与适量果胶溶液混合，一定时间后测定吸光值来测定酶活性。进行吸光值测定时，需将_与等量果胶溶液混合，作为实验的对照。【答案】(1)果胶和蒸馏水高压蒸汽灭菌(2)梯度稀释(或系列稀释)(稀释)涂布平板倒置(3)水解圈(或透明)(4)上清液等量失活的粗提果胶酶【解析】(1)依题意可知：该实验的目的是分离果胶酶产生菌，因此培养基中需要加入果胶，在配制过程中需用蒸馏水定容，所以该表空白处的两种成分是果胶和蒸馏水。制备的培养基常用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。(2)为获得较均匀分布的单菌落，还需要将悬液进行梯度稀释，并用稀释涂布平板法接种于固体培养基上。接种后的培养基倒置状态
6、放入培养箱，以防止培养皿盖上凝结的水珠落入培养基造成污染。(3)已知果胶与刚果红结合后显红色。果胶酶产生菌分泌的果胶酶能够将培养基中的果胶水解，当单菌落数目适宜的培养基中加入一定浓度的刚果红溶液一段时间后，洗去培养基表面的刚果红溶液，因菌落周围的果胶被分解，无法形成红色的复合物而出现水解透明圈，所以观察并比较菌落和水解(或透明圈)直径的比值，可筛选出果胶酶高产菌株。(4)将获得的菌株进行液体培养后，从培养液的上清液获得粗提的果胶酶。将一定量的粗提果胶酶与适量果胶溶液混合，一定时间后测定吸光值来测定酶活性。进行吸光值测定时，需将等量失活的粗提果胶酶与等量果胶溶液混合，作为实验的对照。3(2016
7、贵州高校招生适应考试，39)尿素是一种重要的农业氮肥，不能直接被农作物吸收，只有当土壤中的微生物将尿素分解后才能被植物吸收利用。因此，对土壤中分解尿素的微生物进行分离和鉴定具有重要意义。回答下列问题：(1)对土壤中分解尿素的微生物的分离过程如下：第一步：土壤取样。取土样用的工具和盛土样的信封等在使用前都需要_(填“消毒”或“灭菌”)。第二步：样品稀释。通常分离不同种类的微生物要采用不同的稀释度，原因是_。第三步：微生物的培养与观察。将一定稀释度的样品接种在以尿素为唯一氮源的培养基上，并在适宜的条件下培养。分解尿素的微生物能在该培养基上生长繁殖，而_则不能生长繁殖。(注：实验中所用的培养基经检测
8、符合要求，且均在无菌条件下操作)(2)若对土壤悬液进行梯度稀释时，未经振荡而直接取上层悬液进行梯度稀释，用稀释倍数为104的样液涂布到平板上进行培养和计数，统计出的菌落数往往比正确操作统计出的菌落数_。(3)对土壤中分解尿素的微生物作进一步的鉴定成分KH2PO4Na2HPO4MgSO47H2O酚红指示剂尿素蒸馏水培养基(含量)1.4 g2.1 g0.2 g0.01 g1.0 g1000mL若要对上述初步筛选出的分解尿素的微生物作进一步的鉴定，需在上表培养基配方中添加的物质是_、_。若分离得到的是尿素分解菌，则培养基中pH升高使酚红指示剂变为红色，pH升高的原因是_。(4)分解尿素的微生物在生态
9、系统中的作用是_。【答案】(1)灭菌土壤中各种生物的数量不同不能利用尿素的微生物(2)偏高(3)葡萄糖琼脂尿素分解菌合成的脲酶将尿素分解成氨(合理叙述即可)(4)将有机物分解为无机物(将尿素分解为氨)【解析】(1)为了防止外来杂菌的污染，应对取样前的工具和信封都进行灭菌。在稀释样品时，分离不同种类的微生物要采用不同的稀释度，原因是土壤中各种生物的数量不同，所以稀释倍数不同，因为是以尿素为唯一氮源，所以在该培养基上不能利用尿素的微生物是不能生长的。(2)如果没有振荡取上层的菌液进行计数，因为下层是土壤，此时的细菌主要在上层菌液中，所以应比正常的操作菌落数偏高。(3)该培养基中还没有碳源，所以应加
10、入葡萄糖，要做鉴别应在固体培养基上培养，所以还应加入琼脂。因为加入的有酚红指示剂，尿素分解菌合成的脲酶将尿素分解成氨，pH升高，酚红指示剂变红。(4)分解尿素的微生物在生态系统中是分解者，其作用是将有机物分解为无机物。4(2016山西高三考前质检，39)下图为苹果醋的制作流程：(1)过程常用的发酵菌是_，在苹果酒的基础上制作苹果醋时，需要_(填“升高”或“降低”)温度，同时还需要适当_。(2)该发酵菌种可以从食醋中分离获得。若用平板划线法分离该发酵菌，接种结束后，对接种环还要进行一次 _灭菌，是为了_。(3)对该发酵菌进行扩大培养时，将其接种到液体培养基中并混匀，然后分为甲、乙两组。甲组进行静
11、置培养，乙组进行振荡培养，结果发现_组培养的发酵菌生长速度快，原因是_、_。【答案】(1)醋酸(杆)菌升高通入无菌空气(2)灼烧杀死接种环上残留的菌种，避免污染环境和感染操作者(3)乙醋酸(杆)菌为需氧型细菌，振荡可提高培养液的溶解氧含量振荡可以使菌体与培养液成分充分接触，提高营养物质的利用率【解析】(1)过程要获得苹果原醋，则发酵菌为醋酸菌，在制作苹果醋时，需要升高温度，同时还需要适当通入无菌空气。(2)若用平板划线法分离该发酵菌，对接种环还要进行一次灼烧灭菌，为了杀死接种环上残留的菌种，避免污染环境和感染操作者。(3)甲组进行静置培养，乙组进行振荡培养，结果为乙组培养的发酵菌生长速度快，原
12、因是醋酸菌为需氧型细菌，振荡可提高培养液的溶解氧含量和对营养物质的利用率。5(2016宁夏银川一中一模，39)农村中泡菜的制作方法是：新鲜的蔬菜经过整理、清洁后，放入彻底清洗并用白酒擦拭过的泡菜坛中，然后向坛中加入盐水、香辛料及一些“陈泡菜水”。密封后置于阴凉处，适宜环境温度为2830 。有时制作的泡菜会“咸而不酸”或“酸而不咸”，据此分析，回答下列问题：(1)用白酒擦拭泡菜坛的目的是_。(2)若制作的泡菜“咸而不酸”，最可能的原因是_。(3)制作过程中，需要加入盐水，其中清水与盐的比例应为_，加入“陈泡菜水”的作用是_。(4)若要获得优良乳酸菌菌种，应选用培养基培养。培养基中应含有_、_、水
13、和无机盐，同时需要在培养基中添加_。纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有_。培养时还需提供_条件。【答案】(1)消毒(2)盐过多抑制了乳酸菌发酵(3)4：1提供乳酸菌菌种(4)碳源氮源维生素平板划线法或稀释涂布平板法无氧【解析】(1)泡菜的制作过程中，用白酒擦拭泡菜坛的目的是消毒。(2)泡菜的制作原理是利用乳酸菌的无氧呼吸产生乳酸，若制作的泡菜“咸而不酸”，最可能的原因是加入的盐过多，抑制了乳酸菌发酵，产生的乳酸过少。(3)制作过程中，需要加入盐水，其中清水与盐的比例应为4：1，加入“陈泡菜水”的作用是提供乳酸菌菌种。(4)乳酸菌的代谢类型是异养厌氧型，用选择培养基获得优良乳酸菌菌种
14、时，培养基中应含有碳源、氮源、水和无机盐，同时需要在培养基中添加维生素。纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用平板划线法或稀释涂布平板法接种，培养时还需提供无氧条件。6(2016山东枣庄3月模拟，39)我国粮产区产生大量的作物秸秆，科技工作者研究出利用秸秆生产燃料酒精的技术，大致流程为(以玉米秸秆为例)：(1)玉米秸秆预处理后，应该选用特定的酶进行水解，使之转化为发酵所需的葡萄糖。从以下哪些微生物中可以提取到上述的酶？()A酿制果醋的醋酸菌B生长在腐木上的霉菌C制作酸奶的乳酸菌D生产味精的谷氨酸棒状杆菌(2)若要从土壤中分离生产这种酶的微生物，所需要的培养基为_(按功能分)，培养基中的碳源为_。(
15、3)某同学对这种微生物培养液进行数量测定，在稀释倍数为105对应的培养基中测得平板上菌落数的平均值为23.4，那么每毫升样品中的活菌数是(涂布平板时所用稀释液的体积为0.2 mL)_。(4)用这种方法测定密度，实际活菌数量要比测得的菌落数量多，原因是_。(5)上述流程图中，发酵阶段需要的菌种是_，生产酒精要控制的必要条件是_。【答案】(1)B (2)选择培养基纤维素 (3)1.17107(4)当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落(5)酵母菌 无氧(密封、密闭)【解析】(1)玉米秸秆含有丰富的纤维素，要将纤维素分解为葡萄糖，需要纤维素酶。生长在腐木上的霉菌，可以分解木头的纤维素
16、，故可以提取到纤维素酶。(2)用选择培养基可以分离分解纤维素的微生物。 该种微生物以纤维素为碳源。(3)23.4/0.21051.17107。(4)稀释涂布平板法测得的数目比实际少，因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。(5)发酵产生酒精可以用酵母菌，酵母菌产酒的条件是无氧。7(2016安徽池州二模，39)请回答与微生物分离和培养有关的问题：(1)稀释涂布平板法分离纯化土壤中微生物的正确操作步骤是_(填序号)。为减少误差，一般要设置_或以上数目的平板。土壤取样称取10 g土壤加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中制备土壤提取液吸取0.1 mL溶液进行涂布平板依次稀释至101、
17、102、103、104、105、106、107稀释度(2)无菌技术主要通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。其中对培养基进行灭菌的常用方法是_；要求实验操作应在_进行，以避免周围环境中微生物的污染。(3)下图是某同学对萃取的胡萝卜素样品所做的鉴定实验的结果。图中实验组是_，实验得出的结论是_。【答案】(1)3个 (2)高压蒸汽灭菌 酒精灯火焰旁(3)BC萃取样品中不含胡萝卜素【解析】(1)稀释涂布平板法应进行一系列的梯度稀释然后再进行涂布，故正确的操作步骤是。为了减少误差一般要统计至少3个平板，然后选择菌落数在30300之间的平板进行计数。(2)对培养基进行灭菌最常用的是高压蒸汽灭菌法，整个实验操作
18、要在酒精灯火焰旁进行，避免外来微生物的污染。(3)从图中可以看出，A和D是标准对照，实验组是B和C，B、C组虽然有色素带，但没有出现和标准对照一样的色素带，所以得出的结论是萃取样品中不含胡萝卜素。8(2016河北邯郸一中二模，39)生物组织中存在多种有机物，不同有机物的提取和鉴定方法不尽相同。根据所学知识，回答下列问题：(1)植物芳香油具有的共同特点有_。(答两点)(2)用_法提取玫瑰精油时，如果想提取较高品质的产品，对温度和时间的要求是_。向收集到的乳浊液中加入_，就会出现明显的分层现象，再用分液漏斗将其分开。(3)从柠檬中提取柠檬烯时不适宜用水中蒸馏的方法，这是因为水中蒸馏会导致_等问题。(4)粗提取胡萝卜素所用的萃取剂应该具有能充分溶解胡萝卜素，且_ 、_，胡萝卜的粉碎一定要彻底，主要目的是_。【答案】(1)挥发性强、易溶于有机溶剂(2)水蒸气蒸馏温度不要太高，延长蒸馏时间氯化钠(3)原料焦糊和有效成分水解(4)有较高的沸点不与水混溶增加与萃取剂的接触面积，加大萃取效率
