1、选修1第9单元生物技术实践专题17微生物的利用考点五十三 微生物的分离和培养高考试题 1.(2013年江苏单科,T18,2分,)某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。下列叙述正确的是()A.培养基分装到培养皿后进行灭菌B.转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线C.接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养D.培养过程中每隔一周观察一次点睛:本题考查微生物培养基的配制流程和培养条件等知识,意在考查考生知识运用能力和实验操作处理能力。解析:微生物分离中培养基的制备应是先灭菌再倒平板,A项错误;每一次划线前都要灼烧接种环,以杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种,B项正确;接种后的培养皿应在恒温培养箱
2、中进行培养,光照会影响温度等条件,C项错误;培养过程中观察的间隔时间不能太长,适宜条件下一般不超过24 h,D项错误。答案:B2.(2013年广东理综,T6,4分,)以下为某兴趣小组获得的实验结果及其分析,正确的是()点睛:本题主要考查色素的提取和分离,微生物的培养,有丝分裂及影响酶活性的因素等知识,意在考查考生应用基础知识解决实际问题的能力。解析:为叶绿素a(蓝绿色),为叶绿素b(黄绿色),为叶黄素(黄色),为胡萝卜素(橙黄色),A错误;用刚果红染色法筛选纤维素分解菌时,当纤维素被纤维素分解菌分解后,会形成一个透明圈,透明圈越大,细菌分解纤维素的能力越强,B正确;C中染色体的着丝点整齐地排列
3、在赤道板上,为分裂中期,C错误;D图示目的是验证酶的高效性和酶具有催化作用等,D错误。答案:B3.(2012年山东基本能力测试,T55,1分,)除了高温加热以外,其他灭菌方法还有()A.紫外线照射 B.真空包装C.用保鲜膜密闭D.添加防腐剂点睛:此题主要考查与灭菌相关的知识,考查学生的识记和理解能力。解析:灭菌是使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物(包括芽孢和孢子)。本题中真空包装、添加防腐剂、用保鲜膜密闭都起到了抑菌作用,紫外线照射使细菌的蛋白质变性,核酸受破坏,是灭菌方法。答案:A4.(2012年北京理综,T5,6分,)高中生物学实验中,在接种时不进行严格无菌操作对实验结果影响最大的
4、一项是()A.将少许干酵母加入到新鲜的葡萄汁中B.将毛霉菌液接种在切成小块的鲜豆腐上C.将转基因植物叶片接种到无菌培养基上D.将土壤浸出液涂布在无菌的选择培养基上点睛:本题考查对传统发酵技术的应用、微生物的培养和植物组织培养技术中无菌操作的掌握。考查学生的理解和综合应用能力,解答本题的关键是熟悉相应操作过程中的注意事项。解析:在酿制葡萄酒的过程中,如果灭菌不彻底会影响葡萄酒的品质,但影响不大;在制作腐乳的过程中,发酵过程有多种微生物的参与,所以该过程不进行严格的无菌操作,对结果影响不大;在植物组织培养过程中,如果灭菌不彻底,杂菌产生的物质会影响外植体的生长,甚至杀死外植体,导致培养失败,对结果
5、影响最大;土壤浸出液本身就含有大量的杂菌,另外在选择培养基上只能生存我们所要筛选的细菌,所以无菌操作不严格,对结果影响也不会太大。答案:C5.(2011年重庆理综,T2,6分,)下列有关细菌培养的叙述,正确的是()A.在琼脂固体培养基上长出的单个菌落含有多种细菌B.在培养基中加入青霉素可抑制真菌而促进细菌生长C.向液体培养基中通入氧气能促进破伤风杆菌的生长D.在半固体培养基中接种细菌培养后可以观察其运动点睛:本题考查培养基的用途和微生物的代谢知识,考查学生的识记和理解能力。解析:琼脂固体培养基上长出的单个菌落是由一个或少数同种细菌繁殖而成的同种个体的总和,A项错误;培养基中加入青霉素可选择酵母
6、菌、霉菌等真菌而抑制细菌的生长,因为青霉素可抑制细菌细胞壁的合成,B项错误;破伤风杆菌的代谢类型为厌氧型,通入氧气可使培养基中的破伤风杆菌代谢活动受到抑制,C项错误;半固体培养基可用于观察细菌的运动,D项正确。答案:D6.(2013年新课标全国理综,T39,15分,)临床使用抗生素前,有时需要做细菌耐药实验。实验时,首先要从病人身上获取少量样本,然后按照一定的实验步骤操作,以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。回答下列问题:(1)为了从样本中获取致病菌单菌落,可用法或法将样本接种于固体培养基表面,经过选择培养、鉴别等步骤获得。(2)取该单菌落适当稀释,用法接种于固体培养基表面,在37 培养箱中培
7、养24 h,使其均匀生长,布满平板。(3)为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性,将分别含有A、B、C、D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置,培养一段时间后,含A的滤纸片周围出现透明圈,说明该致病菌对抗生素A;含B的滤纸片周围没有出现透明圈,说明该致病菌对抗生素B;含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小,说明 ; 含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小,且透明圈中出现了一个菌落,在排除杂菌污染的情况下,此菌落很可能是抗生素D的。(4)根据上述实验结果,为达到抗菌目的,最好选用抗生素。点睛:本题主要考查了微生物的培养与应用的相关知识,涉及微生物的纯化培养时常用的接种方法,鉴别某种微生物与抗生素作
8、用所产生的效应及应用。意在考查考生对微生物基础知识的识记能力和理解、应用能力。解析:(1)对微生物纯化培养时 ,常用的接种方法为划线法和稀释涂布法。(2)若让已经获得的单个菌落在固体培养基上大量且均匀繁殖,接种方法为涂布法。(3)对某种抗生素越敏感的致病菌,在该抗生素存在的范围内,越不易生存,所形成的透明圈就越大。但是,如果在透明圈中还有菌落生存,则说明该菌落的耐药性强。(4)根据(3)的结论,为了达到抗菌目的,应选择能使该致病菌大量死亡,即产生的透明圈大的那种抗生素。答案:(1)划线稀释涂布(或涂布)(2)涂布(3)敏感不敏感该致病菌对C的敏感性比对A的弱耐药菌(4)A7.(2013年山东理
9、综,T34,8分,)胡萝卜素是一种常用的食用色素,可从胡萝卜或产胡萝卜素的微生物菌体中提取获得,流程如下:(1)筛选产胡萝卜素的酵母菌R时,可选用或平板划线法接种。采用平板划线法接种时需先灼烧接种环,其目的是。(2)培养酵母菌R时,培养基中的蔗糖和硝酸盐可分别为酵母菌R的生长提供和。(3)从胡萝卜中提取胡萝卜素时,干燥过程应控制好温度和以防止胡萝卜素分解;萃取过程中宜采用方式加热以防止温度过高;萃取液浓缩前需进行过滤,其目的是。(4)纸层析法可用于鉴定所提取的胡萝卜素。鉴定过程中需用胡萝卜素标准品作为。点睛:本题主要考查微生物的培养、植物有效成分的提取等相关知识。意在考查考生的识记、理解和应用
10、能力。解析:(1)接种微生物的主要方法是稀释涂布平板法和平板划线法,接种过程为了防止杂菌的污染,要进行无菌操作,必须对接种环进行灼烧。(2)在微生物培养中,蔗糖主要提供碳源,也可作为能源物质,硝酸盐提供氮源。(3)温度过高,干燥的时间过长,会导致胡萝卜素分解;由于萃取剂都是易燃物,易挥发,直接加热易引起燃烧、爆炸,故常用水浴加热。(4)提取得到的胡萝卜素往往不纯,鉴定时常用标准品进行对照。答案:(1)稀释涂布平板法(或:稀释混合平板法)灭菌(或:防止杂菌污染)(2)碳源氮源(3)时间水浴滤去不溶物(4)(实验)对照8.(2012年上海单科,T(四),10分,)回答下列关于微生物和酶的问题。高温
11、淀粉酶在大规模工业生产中有很大的实用性。研究者从热泉中筛选了高效产生高温淀粉酶的嗜热菌,其筛选过程如图所示。(1)过程称为,过程是为了 。(2)号培养基称为(按功能分);该培养基中除了加入淀粉外,还需加入另一种重要的营养成分。A.琼脂B.葡萄糖C.硝酸铵D.碳酸氢钠(3)一般对配制的培养基采用高压蒸汽灭菌,其中“高压”是为了。在高温淀粉酶运用到工业生产前,需对该酶的最佳温度范围进行测定。图中的曲线表示酶在各种温度下酶活性相对最高酶活性的百分比。将酶在不同温度下保温足够长的时间,再在酶活性最高的温度下测其残余酶活性,由此得到的数据为酶的热稳定性数据,即图中的曲线。(4)根据图中的数据,判断该酶使
12、用的最佳温度范围是。A.4050 B.5060 C.6070 D.7080 (5)据图判断下列叙述错误的是。A.该酶只能在最佳温度范围内测出活性B.曲线35 数据点是在80 时测得的C.曲线表明80 是该酶活性最高的温度D.曲线表明该酶的热稳定性在70 之后急剧下降点睛:本题主要考查微生物培养和酶的相关知识,考查学生的识图和信息分析能力,解答本题的关键是理解稀释涂布培养法的操作原理和过程。解析:欲培养和分离嗜热菌单个菌落可采用稀释涂布平板法;为稀释过程,为筛选过程;号培养基为选择培养基,加入硝酸铵的目的主要是补充氮元素;高压蒸汽灭菌的目的是杀死包括细菌芽孢等在内的全部生物;据图可知,工业生产中
13、该酶的最佳温度范围为6070 。酶活性受温度影响,在不同的温度下,都可以测定酶的活性,A错误。由曲线可知,该酶的最适温度是80 ,曲线中的数据是将酶在不同温度下保温足够长的时间,再在酶活性最高的温度下测其残余酶活性,对于B选项而言是将该酶在35 下保存,然后在80 下测定该酶活性,B、C正确。曲线显示,酶的热稳定性从30 开始不断下降,在70 后,急剧下降,D正确。答案:(1)稀释单个菌落的筛选(或筛选)(2)选择培养基C(3)杀死培养基中的细菌芽孢(4)C(5)A9.(2011年新课标全国理综,T39,15分,)有些细菌可分解原油,从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤
14、中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题:(1)在筛选过程中,应将土壤样品稀释液接种于以为唯一碳源的固体培养基上,从功能上讲,该培养基属于培养基。 (2)纯化菌种时,为了得到单菌落,常采用的接种方法有两种,即和。(3)为了筛选出高效菌株,可比较单菌落周围分解圈的大小,分解圈大说明该菌株的降解能力。(4)通常情况下,在微生物培养过程中,实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、和。无菌技术要求实验操作应在酒精灯附近进行,以避免周围环境中微生物的污染。点睛:本题主要考查微生物实验室培养的相关技术操作、土壤微生物的分离等知识,考查了考生的实验与探究能力。解析:(1)筛选目的菌株应使用选择培养基,可以在这类培养基
15、中加入某种营养物质,促进所需要的微生物生长,这就是微生物学家常用的“投其所好”的策略。(2)平板划线法和稀释涂布平板法都可以将聚集在一起的细菌分散或稀释成单个细胞,进而得到单菌落。(3)目的菌株可降解原油,从而在培养基上形成以目的菌株为中心的分解圈,分解圈越大表明菌株的降解能力越强。(4)常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌,酒精灯火焰附近是一个无菌区,故实验操作在此处进行可防周围环境中微生物的污染。答案:(1)原油选择(2)平板划线法稀释涂布平板法(3)强(4)干热灭菌高压蒸汽灭菌火焰10.(2011年四川理综,T30,9分,)有人通过实验探究某海藻的最佳培养条件,以获得最大生物
16、量(注:生物量指单位体积的藻体干重)。(1)在有光条件下培养海藻时,培养液中必须含有,还需定时向培养液中通入空气,目的是提供。海藻光合速率随着不同光照强度的变化曲线如下图,图中B点表示最佳的培养条件。(2)该海藻在无光条件下仍能生长,但需在培养液中添加葡萄糖等有机物,目的是提供。(3)向培养液中添加葡萄糖配成不同浓度的培养液,在一定光照条件下培养该海藻,测定海藻的生物量如下表:葡萄糖浓度(g/L)00.10.20.40.61.0海藻生物量(g/L)0.840.931.001.030.790.67要确定培养海藻的最佳葡萄糖浓度,还需设计的实验。(4)综合上述实验,获得该海藻最大生物量的培养条件是
17、 。点睛:本题结合海藻的代谢考查海藻生长、发育所必需的物质和培养条件,考查学生对曲线、图表的分析能力和综合应用能力。解析:(1)海藻是植物,因此培养时必须在培养液中加入各种必需矿质元素。通入空气,目的是提供光合作用所需CO2。B点光照强度生物量最大。(2)无光条件下海藻不能进行光合作用,因此必须提供有机物作碳源、能量来源。(3)要确定培养海藻的最佳葡萄糖浓度,还需在0.20.6 g/L之间更细分的浓度梯度。(4)根据图,获得该海藻最大生物量需光照强度适宜,据表格知需添加适宜浓度葡萄糖。答案:(1)各种必需矿质元素 CO2光照强度(2)碳源和能源(3)在0.20.6 g/L之间更细分的浓度梯度(
18、4)适宜光照强度,添加适宜浓度的葡萄糖模拟试题1.(2013成都高新区统考)下列有关微生物的培养或纯化的叙述,错误的是()A.微生物在培养前要先对培养基进行灭菌处理再接种B.培养液中溶氧量的变化会影响酵母菌的繁殖和代谢途径C.分离自养型微生物的方法是用纤维素作为唯一碳源的培养基D.分离纯化微生物的常用方法是平板划线法和稀释涂布平板法解析:微生物在培养前要先对培养基进行灭菌处理再接种,培养液中溶氧量的变化会影响酵母菌的繁殖和代谢途径。分离分解纤维素菌的方法是用纤维素作为唯一碳源的培养基,分离纯化微生物的常用方法是平板划线法和稀释涂布平板法,所以C选项错误。答案:C2.(2011南通模拟)不同的微
19、生物对营养物质的需要各不相同。下列有关一种以CO2为唯一碳源的自养微生物营养的描述不正确的是()A.氮源物质为该微生物提供必要的氮素B.碳源物质也是该微生物的能源物质C.无机盐是该微生物不可缺少的营养物质D.水是该微生物的营养要素之一解析:碳源分为有机碳源和无机碳源。当有机物作为碳源时,既是碳源,又可作为能源;当无机物作为碳源时,只能作为碳源,不能作为能源。答案:B3.(2013蚌埠模拟)二口恶英是持久性有机污染物,其毒性强,降解难。某种白腐真菌能利用二口恶英中的碳元素作为碳源。为了降解废水中的二口恶英,研究人员从土壤中筛选获得了能降解利用二口恶英的白腐真菌菌株,筛选的主要步骤如图所示,为土壤
20、样品,为筛选出的目的菌株。请回答下列问题:(1)中培养目的菌株的选择培养基中应加入作为唯一碳源,如果要测定中活菌数量,常采用法。(2)、为对照组,为实验组,、中加入马铃薯琼脂培养基(培养真菌的培养基)。若在培养过程中没有菌落生长,说明培养基没有;若中的菌落数目明显(填“多于”或“少于”),说明已经筛选出一些菌落。(3)在提取白腐真菌细胞内的分解酶时,通常先将菌株细胞制取粗酶液,再进一步获得相应的酶;从中分离提取的酶通常需要检测,以确定其应用价值;为降低生产成本,可利用技术使白腐真菌重复利用。(4)提取白腐真菌细胞内的蛋白质过程中,为了保证蛋白质不变性,需要对样品进行洗脱,措施一般是需要加入;在
21、装填凝胶柱时,如果有存在,会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序,降低分离效果。该真菌可以产生某种挥发性强、易溶于有机溶剂的芳香化合物,适于采用法提取。解析:(1)考查筛选细菌的方法,特殊的碳源和氮源可筛选目的菌,常用稀释涂布平板法来测定细菌的数量。(2)灭菌后的培养基如果未污染,则上面没有微生物菌落,为选择培养基,只能适于能降解利用二口恶英的白腐真菌生长,故其上菌落少。(3)考查酶的制取和固定的方法,制取酶液需破碎细胞才方便提取,制得的酶要检测活性。(4)考查蛋白质的洗脱方法和特殊产物的提取。答案:(1)二口恶英稀释涂布平板(2)(被杂质)污染多于(3)破碎和离心酶活性(或酶活力)固定化细胞(4)缓
22、冲液气泡萃取4.(2012海淀二模)常见的酿酒酵母菌只能利用葡萄糖而不能利用木糖,自然界中一些酵母菌能分解木糖产生酒精但对酒精的耐受能力较差。下面是利用木糖发酵产生酒精的酿酒酵母菌的培育过程,请分析回答下列问题:(1)将自然界中采集到的葡萄带回实验室,用将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中,瓶中的液体经适当稀释后,用法接种于固体培养基上,在适宜的条件下培养,获得各种菌落。(2)将培养基上的酵母菌菌株转接到以木糖为唯一碳源的培养基中,无氧条件下培养一周后,有些酵母菌死亡,说明这些酵母菌。从存活的酵母菌提取DNA,并用PCR技术大量扩增目的基因。(3)将目的基因连接到一种穿梭质粒(可以在大肠杆菌
23、中复制和在酿酒酵母菌中表达的质粒)上。该质粒具有两种标记基因,即氨苄青霉素抗性基因和尿嘧啶合成酶基因。大肠杆菌被该质粒转化后,应接种于含的培养基上进行筛选。将质粒导入酵母菌时,由于氨苄青霉素不能抑制酵母菌繁殖,应选择缺乏能力的酿酒酵母菌作为受体菌。从细胞结构看,酵母菌不同于大肠杆菌的主要特点是 。(4)对转基因酿酒酵母菌发酵能力进行测试,结果如下图所示。据图分析,将转基因酿酒酵母菌接种在为碳源的培养基中进行发酵能力测试,最初培养基中的糖被快速消耗,随着发酵继续进行,转基因酿酒酵母菌能够,说明所需菌株培育成功。解析:(1)由于葡萄皮上有酵母菌,所以可用无菌水冲洗葡萄获得菌液,然后用稀释涂布平板法
24、培养分离。(2)以木糖为唯一碳源的培养基是选择培养基,可以筛选出能利用木糖的酵母菌。(3)转入质粒的大肠杆菌对氨苄青霉素有抗性,故可以在含有氨苄青霉素的培养基上进行筛选。以缺乏尿嘧啶合成酶的酵母菌作为受体细胞,可以利用缺乏尿嘧啶的培养基筛选出导入质粒的酵母菌菌株。(4)图示实验结果表明,在葡萄糖大量消耗后,酵母菌仍能利用木糖快速产生酒精,说明转基因酵母菌培养成功。答案:(1)无菌水稀释涂布平板(2)不能利用木糖发酵(或缺乏水糖发酵途径)(3)氨苄青霉素尿嘧啶合成有核膜包被的细胞核(4)葡萄糖和木糖葡萄利用木糖产生酒精,并且酒精浓度升高对木糖发酵无明显影响5.(2012西安模拟)某中学杨老师自制
25、大蒜提取液,希望这种简便、经济的提取液能够高效地杀灭餐具上的细菌,杨老师完成了下面的探究实验:(1)制作提取液:杨老师将大蒜榨汁后制成提取液,具体做法如下表所示。请根据表中数据,在表中的括号内填出1#提取液应加入的冷开水量:大蒜提取液编号1#2#大蒜(g)350350冷开水(mL)()880无色食醋(mL)/20制备量1 000 mL1 000 mL(2)使用方法:将餐具浸泡在提取液中10 min后取出冲洗。(3)样品抽取:将经过处理的滤纸贴在餐具表面1 min,然后将滤纸放到50 mL无菌水中,充分振荡后制成原液。再取1 mL原液加入mL无菌水中摇匀制成10倍稀释液。 (4)分离及培养:用法
26、分离细菌。分别取1 mL原液和10倍稀释液,分别加到伊红-美蓝培养基中,用灭菌、消毒后的(用具),将原液和10倍稀释液均匀涂布到整个平板上。每个浓度各做三个培养皿,其目的是。本实验另设1 mL无菌水涂布在未接种的培养皿上为空白对照,原因是排除 。最后在37 下培养48 h。(5)观察记录:设计1#提取液实验组的观察记录表。(6)结果分析:统计数据,得到消毒前后的菌落总数变化(单位:cfu/cm2,每平方厘米样品中含有的细菌群落总数)编号条件总份数1041#提取液消毒前300003189消毒后30141240002#提取液消毒前3320031216消毒后3319104000根据消毒前后的数据可知
27、: 。2#提取液效果高于1#,分析可能的原因: 。请你给杨老师提出需要进一步研究的问题: 。解析:设计实验要遵循单一变量原则、对照性原则和平行重复原则,在制作提取液时,为了遵循单一变量原则,对照实验1#和2#液体量必须相同,使其唯一的变量是有无无色食醋。本实验探究的是大蒜提取液的杀菌效果,要防止杂菌干扰实验结果,所以每一步都要严格进行无菌操作,为了使结果更可靠,统计更准确,原液和10倍稀释液都要多设置几组培养皿进行涂布培养,求其平均值,以增加实验数据的可靠性。通过统计消毒前后的菌落总数变化数据看,无论1#提取液还是2#提取液,都是消毒后的样品含菌数量明显减少,说明大蒜提取液是能够高效杀菌的。并
28、且2#提取液杀菌效果比1#提取液更好。答案:(1)900(3)灭菌9(4)涂布分离(稀释涂布平板)(只写“涂布”不可)玻璃刮刀(三角刮刀、涂布器)重复实验,减小实验误差灭菌不彻底对本实验的影响(5)提取液菌落数1号培养皿2号培养皿3号培养皿平均值原液10倍稀释液(6)大蒜提取液能够高效杀菌无色食醋促使大蒜提取液呈微酸性,协同杀菌如:进一步探究同等条件下,醋和大蒜汁哪种消毒作用更好?不同浓度的大蒜汁,哪种消毒效果更好?醋作用的最适pH?(任选其中一种即可,其他合理答案也可)考点五十四 某种微生物数量的测定高考试题 (2009年安徽理综,T6,6分,)下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述
29、,其中错误的是()A.用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基,经高温、高压灭菌后倒平板B.取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL,分别涂布于各组平板上C.将实验组和对照组平板倒置,37 恒温培养2448小时D.确定对照组无菌后,选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数点睛:本题考查检测土壤中细菌总数的有关实验操作,考查学生的理解能力和综合应用能力。解析:检测土壤中细菌总数,用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基,经高温、高压灭菌后倒平板,取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL,分别涂布于各组平板上,将实验组和对照组平板倒置,37 恒温培养2448小时,在确定对照组
30、无菌后,选择菌落数在30300的一组平板为代表进行计数。所以D不对。答案:D模拟试题1.(2012临沂模拟)能够测定样品活菌数的方法是()A.稀释涂布平板法B.直接计数法C.重量法 D.比浊法解析:直接计数法是利用特定的细菌计数板,在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量,不能区分死菌与活菌。重量法是用于微生物生长测定的一种方法,有湿重和干重,测蛋白质和DNA含量反映细胞的物质量。比浊法是在一定范围内,菌悬液中细胞浓度与浑浊度成正比,即与光密度成正比,菌越多,光密度越大。稀释涂布平板法是活菌在适宜培养基和良好生长条件下通过生长形成菌落,此法又称活菌计数法。答案:A2.(2013湖南十二校模拟
31、)某同学在101、102、103倍稀释液的平均菌落数为2 760、295和46,则菌落总数(个/mL)为()A.2.76104B.2.95104C.4.6104D.3.775104解析:菌落计数法,注意是计算不同稀释度的平均菌落数。首先选择平均菌落数在30300,当只有一个稀释倍的平均菌落数符合此范围时,则以该平均菌落数乘以稀释倍数即为该样品的细菌总数;若有两个稀释倍数的平均菌落数均在30300,则按两者菌落总数之比值来决定,若比值小于2应采取两者的平均数,若大于2,则取其中较小的菌落总数。本题295、46在30300,46103与295102比值为1.6,应取二者平均数(46103+2951
32、02)2=3.775104。若所有稀释倍数的菌落数均不在30300,则应以最接近300或30的平均菌落乘以稀释倍数。答案:D3.(2011中山模拟)某学者欲研究被石油污染过的土壤中细菌数量,并从中筛选出能分解石油的细菌。下列操作错误的是()A.利用平板划线法对细菌进行计数B.用以石油为唯一碳源的培养基筛选C.采用稀释涂布平板法分离菌种D.称取和稀释土壤时应在火焰旁解析:平板划线法能对细菌分离纯化,但不能对细菌进行计数,稀释涂布平板法可以分离菌种还可进行计数,A错误。答案:A4.(2013吉林省高考复习质检)某生物兴趣小组开展探究实验,课题是:培养液中酵母菌种群数量与时间的变化关系。实验材料:菌
33、种和无菌马铃薯培养液、试管、血细胞计数板、滴管、显微镜等。酵母菌的显微计数方法:A.血细胞计数板:是带有微小方格刻度的玻璃片,用于在显微镜下对血细胞、微生物进行计数。B.将含有酵母菌的培养液滴在计数板上,计数一个小方格内的酵母菌数量,再以此为根据,估算试管中的酵母菌总数。连续观察7天,并记录每天的数值。根据以上叙述回答下列问题: (1)根据所学知识,该课题的实验假设是:开始时,在资源和空间无限多的环境中,酵母菌种群数量呈“J”型增长;随着时间的推移,酵母菌种群数量呈“S”型增长。 (2)本实验没有另设置对照实验,原因是。该实验是否需要重复实验?,试解释原因: 。 (3)在吸取培养液制片前,要轻
34、轻振荡几次试管,原因是。如果一个小方格内酵母菌过多,难以数清,应当采取的措施是 。对于压在小方格界线上的酵母菌,应当怎样计数? 。(4)请你设计处理实验数据的表格。答案: (1)环境中资源和空间逐渐变得有限(2)该实验在时间上形成前后自身对照需要为了提高实验数据的准确性(3)使酵母菌分布均匀增加稀释倍数上下和左右只计一边线上菌体(4)时间(天)次数1234567123平均考点五十五 培养基对微生物的选择作用高考试题 1.(2009年宁夏理综,T40,15分,)(1)在大肠杆菌培养过程中,除考虑营养条件外,还要考虑、和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、等优点,因此常
35、作为遗传学研究的实验材料。(2)在微生物培养操作过程中,为防止杂菌污染,需对培养基和培养皿进行(填“消毒”或“灭菌”);操作者的双手需进行清洗和;静止空气中的细菌可用紫外线杀灭,其原因是紫外线能使蛋白质变性,还能。(3)若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数,要想使所得估计值更接近实际值,除应严格操作、多次重复外,还应保证待测样品稀释的。(4)通常,对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的。(5)培养大肠杆菌时,在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是 。(6)若用大肠杆菌进行实验,使用过的培养基及培养物必须经过处理后才能丢弃,以防止培养物
36、的扩散。点睛:本题综合考查微生物的培养条件、培养基种类和计数等知识,考查学生的识记能力和综合应用能力。解析:(1)大肠杆菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、易培养、生活周期短等优点,培养过程中,除考虑营养条件外,还要考虑温度、酸碱度和渗透压等条件。(2)灭菌使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物,所以对培养基和培养皿进行灭菌,消毒使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物, 操作者的双手需要进行清洗和消毒, 紫外线能使蛋白质变性,还能损伤DNA的结构。(3)稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面,
37、进行培养,应保证样品稀释的比例适合。(4)对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的鉴定。(5)培养大肠杆菌时,在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间,观察培养基上是否有菌落产生(6)因为有的大肠杆菌会释放一种强烈的毒素,并可能导致肠道出现严重症状,使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃,以防止培养物的扩散。答案:(1)温度酸碱度易培养生活周期短(2)灭菌消毒损伤DNA的结构(3)比例合适(4)鉴定(或分类)(5)将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间,观察培养基上是否有菌落产生(
38、6)灭菌2.(2009年上海单科,T39,9分,)氯苯化合物是重要的有机化工原料,因其不易降解,会污染环境。某研究小组依照下列实验方案(图1)筛选出能高效降解氯苯的微生物SP1菌,培养基配方如表1。表1培养基的组成液体培养基蛋白胨牛肉膏氯苯氯化钠硝酸铵无机盐(无碳)蒸馏水号10 g5 g5 mg5 g-1 L号-50 mg5 g3 g适量1 L号-2080 mg5 g3 g适量1 L(1)配制号固体培养基时,除添加号液体培养基成分外,还应添加1%的。(2)培养基配制时,灭菌与调pH的先后顺序是。(3)从用途上来说,号培养基和号培养基分别属于培养基和培养基。在号培养基中,为SP1菌提供氮源的成分
39、是 。(4)在营养缺乏或环境恶劣时,SP1的菌体会变成一个圆形的休眠体,这种休眠体被称为。(5)将SP1菌接种在含不同浓度氯苯的号培养液中培养,得到生长曲线(如图2)。从图2可知SP1菌在培养条件下最早停止生长,其原因是。点睛:本题考查培养基的配制原则以及微生物的实验室培养过程,意在考查考生的图表信息转换与分析能力。解析: (1)固体培养基中需加入琼脂作为凝固剂。(2)先配制培养基后灭菌,调pH属于培养基的配制过程,故先调pH后灭菌。(3)从用途上看,号培养基为通用培养基(基本培养基);号培养基是选择培养基,以氯苯为唯一的碳源,其中为SP1菌提供氮源的成分是硝酸铵。(4)芽孢是在细胞质内高度浓
40、缩脱水形成的抗逆性很强的球形或椭圆形的休眠体。(5)由图示可知SP1菌在20 mg/L氯苯培养条件下最早停止生长,20 mg/L氯苯可提供的碳源较少,碳源最早耗尽,影响菌体的生长繁殖。答案:(1)琼脂(2)先调pH,后灭菌(3)通用选择硝酸铵(4)芽孢(5)20 mg/L氯苯碳源最早耗尽模拟试题1.(2012临沂模拟)下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是()A.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、水B.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、葡萄糖、琼脂、水C.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、尿素、琼脂、水D.KH2PO4、Na2H
41、PO4、MgSO47H2O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水解析:能合成脲酶的细菌才能分解尿素,选择的原则是只有能够利用尿素的微生物才能够生长。该选择培养基应只含尿素一种氮源并能让该类细菌生长,需有碳源。分离微生物要用固体培养基;分解尿素的细菌属于异养微生物,需要加葡萄糖作为碳源。B无氮源、C无碳源,D中牛肉膏、蛋白胨可作为氮源。答案:A2.(2013河南五市联考)请选出土壤微生物分离的正确操作步骤()土壤取样称取0.5 g土壤将其加入盛有50 mL无菌水的锥形瓶中吸取1 mL进行平板涂抹依次稀释至103、104、105、106、107A.B.C.D.解析:本题考查土壤微生物的分离。正确的操作步骤为:
42、土壤取样,制备土壤溶液,制备土壤样品稀释液,涂抹平板分离。答案:C3.(2013江苏苏北质检)分离纤维素分解菌的实验过程中,操作有误的是()A.经选择培养后将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上B.富集培养这一步可省略,但所培养的纤维素分解菌少C.经稀释培养后,用刚果红染色D.对照组可用同样量的培养液涂布到不含纤维素的培养基上解析:经选择培养后,再经稀释,才能将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上;富集培养可省略;经稀释培养后,可用刚果红染色;设置对照能证明经富集培养后,的确得到了欲分离的微生物。答案:A4.(2013焦作模拟)下图表示为平板划线法分离纯化细菌示意图。根据所学生物学知识,完成下
43、列问题。(1)微生物所需的营养成分包括、水和无机盐。(2)培养微生物时,除考虑微生物生长所需的营养外,还要考虑微生物生长所需的温度、以及是否需要O2等。(3)对培养基进行灭菌时,多采用法,而对接种环或涂布器灭菌时则用法。(4)平板划线时,为保证每次划线都从上次划线末端的微生物浓度开始,所以每次划线前都要,平板划线结束后,最后一次划的线不能与第一次划的线。(5)脲酶可以将尿素分解为氨,从而使尿素溶液pH升高,这可用试剂来检验。用纤维素做唯一碳源的培养基培养微生物,得到的纤维素分解菌中可能还混杂有。(6)抗生素可以抑制肽聚糖合成,从而可以抑制多数原核生物繁殖。实验室现有酵母菌、大肠杆菌、金黄色葡萄
44、球菌三种微生物混杂生长的固体培养基,已知大肠杆菌菌落遇伊红美蓝试剂变为紫色,并带有金属光泽;金黄色葡萄球菌耐高浓度食盐水,菌落为金黄色;酵母菌细胞壁成分主要为几丁质,营养条件好,氧气充足,显微镜下可见典型的出芽生殖。现在请你设计一个合理的实验方案,从一个培养基中,将三种微生物一次分离开来。(所需试剂可自选)实验方案: 。解析:本题考查多为识记内容,如培养基的成分、微生物生长条件、常用的灭菌方法等;平板划线法时如果划线相重合则不能分离出纯种;酚酞可检验碱性溶液,用纤维素做唯一碳源的培养基培养微生物,得到纤维素分解菌,但自养菌可以利用空气中的CO2,也能生存,需要进一步分离;根据条件可以将不同菌分
45、离开来。答案:(1)碳源氮源(2)pH(3)高压蒸汽灭菌灼烧灭菌(4)对接种环灼烧灭菌相交(相接、相连、交叉等)(5)酚酞自养微生物(硝化细菌)(6)方案:根据菌落颜色,首先分离出金黄色葡萄球菌,然后向培养基中加入伊红美蓝,将变为紫色,带有金属光泽的菌落分离出来,得到大肠杆菌,然后加入非磺胺类抗生素如青霉素,将培养基中的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌杀死,得到酵母菌。(分离顺序不唯一,答案合理即可)5.(2011唐山模拟)随着环境污染的加剧和石油危机的出现,越来越多的国家使用乙醇作为燃料,玉米和麦草的秸秆可以用来生产燃料乙醇,已知秸秆的主要成分是纤维素,回答下列问题:(1)人们首先利用纤维素分解菌将
46、纤维素分解,纤维素分解菌多分布在的土壤中,该微生物产生的纤维素酶是一种复合酶,一般包括三种成分:,和。前两种酶能使纤维素分解成纤维二糖,第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。 (2)从土壤中筛选纤维素分解菌需要配制培养基,该培养基中需要加入纤维素粉作为唯一的。(3)经过梯度稀释后,要将样品均匀涂布在用于鉴别纤维素分解菌的培养基上,在该培养基中需要加入的特殊染料是,当形成菌落以后可以根据菌落周围是否产生来筛选纤维素分解菌。当利用涂布器涂布平板之后需要对涂布器进行处理(填“消毒”或“灭菌”)。 (4)产生葡萄糖后需要用到(微生物种类)发酵产生酒精,还可以使用检测产物是否为酒精,该试剂在酸性条件下可与酒精
47、反应,溶液呈灰绿色。解析:纤维素分解菌大多分布在富含纤维素的土壤中,该微生物产生的纤维素酶是一种复合酶,一般包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶三种成分。用选择培养基可以将纤维素分解菌从土壤中筛选出来,在培养基中加入纤维素粉作为唯一的碳源。在含有纤维素的培养基中加入刚果红时,刚果红与其中的纤维素形成红色复合物,当纤维素被酶分解后,培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。利用涂布器涂布平板后,需要对涂布器进行灭菌处理,以防止杂菌污染。产生葡萄糖后要用酵母菌发酵产生酒精,在酸性条件下酒精与重铬酸钾反应,溶液呈灰绿色。答案:(1)富含纤维素C1酶CX酶葡萄糖苷酶(2)选择碳源(3)刚果红透明圈灭菌(4)酵母菌重铬酸钾